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利用CRISPR/Cas9技术构建环指蛋白126基因敲除小鼠
被引量:
1
1
作者
高梦樵
艾东旭
+6 位作者
李钰
孙菲
王进
范君文
袁征
刘源
孙兆增
《实验动物与比较医学》
CAS
2019年第1期21-25,共5页
目的利用CRISPR/Cas9技术,获得环指蛋白126(RNF126)基因敲除小鼠模型。方法针对C57BL/6小鼠Rnf126基因的第四外显子设计敲除引物,构建sgRNA重组表达载体。通过体外转录获得sgRNA及Cas9 mRNA,并以显微注射的方式将RNA导入到C57BL/6小鼠...
目的利用CRISPR/Cas9技术,获得环指蛋白126(RNF126)基因敲除小鼠模型。方法针对C57BL/6小鼠Rnf126基因的第四外显子设计敲除引物,构建sgRNA重组表达载体。通过体外转录获得sgRNA及Cas9 mRNA,并以显微注射的方式将RNA导入到C57BL/6小鼠的受精卵中,通过胚胎移植至代孕母鼠。获得子代工程鼠后,用PCR对其进行鉴定。结果成功获得针对鼠Rnf126基因的sgRNA以及Cas9 mRNA;通过显微注射获得了82枚状态良好的受精卵并成功移植至3只代孕母鼠体内;获得了11只F0代仔鼠,鉴定后选择一只单链缺失62个碱基的阳性鼠进行扩繁并在F1、F2代检测到该突变。结论成功构建Rnf126基因敲除C57BL/6小鼠,该模型可用于RNF126基因及其表达产物的生物学功能研究。
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关键词
CRISPR/Cas9
环指蛋白126(RNF126)
基因敲除
动物模型
下载PDF
职称材料
利用CRISPR/Csa9技术构建溶酶体运输调节因子基因缺陷C57BL/6小鼠
2
作者
艾东旭
钟德刚
+7 位作者
孙菲
李钰
李崇
秦佟童
高梦樵
董施施
孙兆增
李莲瑞
《实验动物与比较医学》
CAS
2018年第3期202-206,共5页
目的获得自然杀伤(NK)细胞缺陷的小鼠动物模型,并研究溶酶体运输调节因子(Lyst)基因的功能。方法采用CRISPR/Cas9技术敲除C57BL/6小鼠的Lyst基因:针对小鼠Lyst基因编码区第50个外显子,设计CRISPR/Cas9靶点引物(sgRNA),并重组构建pUC57-L...
目的获得自然杀伤(NK)细胞缺陷的小鼠动物模型,并研究溶酶体运输调节因子(Lyst)基因的功能。方法采用CRISPR/Cas9技术敲除C57BL/6小鼠的Lyst基因:针对小鼠Lyst基因编码区第50个外显子,设计CRISPR/Cas9靶点引物(sgRNA),并重组构建pUC57-Lyst-sg RNA载体。将重组质粒体与Cas9质粒分别利用T7 RNA聚合酶体外转录为mRNA,并按比例显微注射入小鼠受精卵,将受精卵移植到受体动物。获得子代小鼠后,利用PCR扩增和测序方法筛选Lyst基因发生改变的动物个体。结果显微注射移植后获得7只F0代基因敲除小鼠,且毛色均发生了明显的变化。结论利用CRISPR/Cas9技术可以构建Lyst基因缺陷小鼠,外观表型与已有的文献报道一致。
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关键词
CRISPR/Cas9
溶酶体运输调节因子(Lyst)基因
基因敲除
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职称材料
题名
利用CRISPR/Cas9技术构建环指蛋白126基因敲除小鼠
被引量:
1
1
作者
高梦樵
艾东旭
李钰
孙菲
王进
范君文
袁征
刘源
孙兆增
机构
军事医学研究院实验动物中心
塔里木大学生命科学学院
出处
《实验动物与比较医学》
CAS
2019年第1期21-25,共5页
基金
军队实验动物专项[SYDW(2014)006]
国家传染病重大专项基金(2017ZX10304402-003)
文摘
目的利用CRISPR/Cas9技术,获得环指蛋白126(RNF126)基因敲除小鼠模型。方法针对C57BL/6小鼠Rnf126基因的第四外显子设计敲除引物,构建sgRNA重组表达载体。通过体外转录获得sgRNA及Cas9 mRNA,并以显微注射的方式将RNA导入到C57BL/6小鼠的受精卵中,通过胚胎移植至代孕母鼠。获得子代工程鼠后,用PCR对其进行鉴定。结果成功获得针对鼠Rnf126基因的sgRNA以及Cas9 mRNA;通过显微注射获得了82枚状态良好的受精卵并成功移植至3只代孕母鼠体内;获得了11只F0代仔鼠,鉴定后选择一只单链缺失62个碱基的阳性鼠进行扩繁并在F1、F2代检测到该突变。结论成功构建Rnf126基因敲除C57BL/6小鼠,该模型可用于RNF126基因及其表达产物的生物学功能研究。
关键词
CRISPR/Cas9
环指蛋白126(RNF126)
基因敲除
动物模型
Keywords
CRISPR/Cas9
Ring finger protein 126(7WF126)
Gene knockout
Animal model
分类号
Q95-33 [生物学—动物学]
下载PDF
职称材料
题名
利用CRISPR/Csa9技术构建溶酶体运输调节因子基因缺陷C57BL/6小鼠
2
作者
艾东旭
钟德刚
孙菲
李钰
李崇
秦佟童
高梦樵
董施施
孙兆增
李莲瑞
机构
塔里木大学生命科学学院
山东省日照市莒县畜牧兽医局
军事医学研究院实验动物中心
塔里木大学动物科学学院
出处
《实验动物与比较医学》
CAS
2018年第3期202-206,共5页
基金
军队实验动物专项[SYDW(2014)006]
文摘
目的获得自然杀伤(NK)细胞缺陷的小鼠动物模型,并研究溶酶体运输调节因子(Lyst)基因的功能。方法采用CRISPR/Cas9技术敲除C57BL/6小鼠的Lyst基因:针对小鼠Lyst基因编码区第50个外显子,设计CRISPR/Cas9靶点引物(sgRNA),并重组构建pUC57-Lyst-sg RNA载体。将重组质粒体与Cas9质粒分别利用T7 RNA聚合酶体外转录为mRNA,并按比例显微注射入小鼠受精卵,将受精卵移植到受体动物。获得子代小鼠后,利用PCR扩增和测序方法筛选Lyst基因发生改变的动物个体。结果显微注射移植后获得7只F0代基因敲除小鼠,且毛色均发生了明显的变化。结论利用CRISPR/Cas9技术可以构建Lyst基因缺陷小鼠,外观表型与已有的文献报道一致。
关键词
CRISPR/Cas9
溶酶体运输调节因子(Lyst)基因
基因敲除
Keywords
CRISPR/Cas9
Lysosomal trafficking regulator (Lyst) gene
Gene knockout
分类号
Q95-33 [生物学—动物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
利用CRISPR/Cas9技术构建环指蛋白126基因敲除小鼠
高梦樵
艾东旭
李钰
孙菲
王进
范君文
袁征
刘源
孙兆增
《实验动物与比较医学》
CAS
2019
1
下载PDF
职称材料
2
利用CRISPR/Csa9技术构建溶酶体运输调节因子基因缺陷C57BL/6小鼠
艾东旭
钟德刚
孙菲
李钰
李崇
秦佟童
高梦樵
董施施
孙兆增
李莲瑞
《实验动物与比较医学》
CAS
2018
0
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职称材料
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