经典名方温经汤基准样品HPLC-Q-TOF/MS分析与指纹图谱研究

目的采用HPLC-Q-TOF/MS技术对温经汤基准样品化学成分进行表征,同时建立经典名方温经汤基准样品指纹图谱,并对其共有峰进行指认与归属。方法采用Agilent 5 TC-C_(18)(2)柱(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸水为流动相进行梯度洗脱,通过PeakView软件辅助解析,快速鉴别出温经汤基准样品中化学成分,并通过HPLC-UV及HPLC-ELSD法建立温经汤基准样品指纹图谱。结果温经汤基准样品中共分析鉴别出122个化合物,并进行相关药味归属。建立的温经汤基准样品HPLC-UV指纹图谱有19个共有峰,通过对照品比对,指认出没食子酸、芍药苷、甘草酸、甘草苷、桂皮醛、丹皮酚、阿魏酸、藁本内酯、β-蜕皮甾酮9个色谱峰;HPLC-ELSD指纹图谱有8个共有峰,通过对照品比对,指认出人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Re和人参皂苷Rb_(1)。建立的HPLC-UV、HPLC-ELSD两张指纹图谱能够归属全方所有药味。结论通过UV、ELSD建立的指纹图谱方法灵敏度高,稳定性和准确性良好,全面反映了温经汤基准样品的整体特征,为温经汤基准样品质量标准的建立提供了可靠的依据。

山西省临汾市隰县药用植物资源普查概况

目的通过调查山西省临汾市隰县药用植物资源种类、分布、数量等现状,为当地药用植物野生资源保护及可持续利用提供依据。方法依据《全国中药资源普查技术规范》,采用线路踏查、样地调查和实地走访等形式,结合现代技术,对隰县药用植物资源进行普查,并统计分析。结果本次普查工作覆盖6个乡镇37个样地,共计185个套方,1110个样方,涵盖野生药用植物种类131种,包括蕨类植物、裸子植物和被子植物三大类群,其中优势科主要集中在蔷薇科、菊科、豆科、百合科和唇形科,中药材种植资源有赤芍、丹参、射干、苍术、穿山龙、黄精等。结论山西省临汾市隰县野生药用植物资源具有生物多样性,应加强野生药用植物资源的保护力度及种植资源的规范化指导。

基于DASS-RTCA法的经典名方当归补血汤质量一致性评价初步研究

目的建立一种反映多批次中药复方制剂整体药效特征的质量一致性评价方法。方法以外翻肠囊模型建立药物吸收仿生系统(drug absorption simulating system,DASS)标准化吸收仿生系统模块,制备不同来源、批次的当归补血汤(Danggui buxue tang,DBT)肠吸收样品;借鉴生物药一致性评价思路,以实时细胞分析(real-time cell analysis,RTCA)建立细胞生物效应表征模块,监测15批DBT样品细胞反应曲线。结果联合DASS-RTCA法,对15批DBT样品时间剂量依赖性细胞反应曲线(time-dependent cell response patterns,TCRPs)的特征参数进行提取,各特征参数的相对标准偏差(RSD)均<5.1%,表明各批次DBT细胞效应表征差异较小,TCRPs图相似度高。通过相似度分析、聚类分析、雷达图等分析,均反映不同批次DBT的质量具有较高的一致性。结论联合DASS-RTCA法建立的质量一致性评价方法可反映制剂的整体质量,为中药批次间质量一致性评价提供新的思路和方法。

基于混料设计的经典名方当归补血汤喷雾干燥工艺研究

目的采用混料设计的方法,对当归补血汤(Danggui Buxue Decoction,DBD)水提液进行喷雾干燥工艺研究,重点考察阿魏酸、藁本内酯等热不稳定性成分的保留率,优化喷雾干燥工艺。方法以DBD喷干粉得率、吸湿性、流动性及指标性成分藁本内酯的含量为评价指标,对辅料进行筛选,同时基于混料设计对筛选辅料配比进行优化;在此基础上以喷干粉得率、阿魏酸、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、藁本内酯含量及保留率,为指标进一步优化喷雾干燥工艺参数。结果筛选辅料为羟丙基-β-环糊精、微粉硅胶和微晶纤维素,分别建立喷干粉得率、吸湿率、休止角与筛选辅料配比的回归方程,并优选辅料配比为干膏-羟丙基-β-环糊精-微粉硅胶-微晶纤维素0.500∶0.226∶0.222∶0.052;优选DBD喷干工艺参数为进风温度170℃,空气流速37 m3/h,雾化压力0.061 MPa,此条件下喷干粉得率为58.92%,阿魏酸保留率为50.26%,毛蕊异黄酮葡萄糖苷保留率为54.98%,藁本内酯保留率为27.74%。结论优选的辅料及其配比能较好提高喷雾干燥产率,改善喷干粉性质,优选的工艺条件较好保留阿魏酸、藁本内酯等热不稳定性成分,可为后续DBD制剂研究打下基础,同时为其他中药复方提取液喷雾干燥研究提供参考。

蟾酥指纹图谱及其治疗COVID-19活性成分和作用机制初探

目的 :研究蟾酥中的化学成分,建立蟾酥HPLC指纹图谱,并探究其治疗新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的活性成分和作用机制。方法 :采用HPLC-Q-TOF/MS技术对蟾酥进行成分鉴定,建立HPLC指纹图谱,同时运用网络药理学方法进行靶点和通路分析。结果 :通过质谱鉴别出87个化学成分,包含生物碱类、蟾蜍甾二烯类、氨基酸及其酰化物等;建立10批蟾酥HPLC指纹图谱,共标定17个共有峰,相似度均≥0.950,通过对照品指认出五羟色胺盐酸盐、蟾蜍色胺、蟾毒它灵、日蟾毒它灵、沙蟾毒精、蟾毒灵、华蟾酥毒基、酯蟾毒配基8个化学成分;其中华蟾酥它灵、19-氧代华蟾酥它灵及指纹图谱指认的8个成分为蟾酥发挥治疗COVID-19的关键成分,得到包括PIK3CA、AKT1、MAPK1等10个核心靶点,涉及冠状病毒-新冠肺炎通路、PI3K-Akt信号通路、免疫调节通路等。推测蟾酥可能通过直接抑制病毒、改善免疫功能和减少炎症反应来发挥作用。结论 :建立的指纹图谱可较为全面的表征蟾酥药材,其主要色谱峰对应的成分与蟾酥治疗COVID-19密切相关,联合网络药理学为蟾酥治疗COVID-19活性成分及作用机制的研究奠定基础,为其他防治病毒感染成分的筛选提供参考。

经典名方清胃散基准样品浓缩干燥工艺及关键质量属性的研究

目的对清胃散基准样品的浓缩干燥工艺进行考察,确定其浓缩干燥工艺,并对清胃散基准样品中关键质量属性(critical quality attributes,CQA)进行研究。方法通过考察不同浓缩干燥方法,比较样品中异阿魏酸、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀及丹皮酚的含量相对于标准煎液的保留率,确定清胃散基准样品的浓缩干燥工艺,结合前期研究出的煎煮工艺,制备15批清胃散基准样品。利用超快速液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(ultra fast liquid chromatography-quadrupole time of flight mass spectrometry,UFLC-Q-TOF/MS)分析清胃散基准样品中的化学成分及入血原型成分,结合文献研究初步确定清胃散基准样品CQA。结果确定了清胃散基准样品的浓缩干燥工艺为原方煎煮液加药液量0.05 g/mL的β-环糊精直接喷雾干燥。分析出清胃散基准样品中化学成分有135个,入血原型成分28个,初步推测决定清胃散基准样品CQA的化学成分有黄连碱、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、表小檗碱、丹皮酚。结论建立的浓缩干燥工艺在保证最大程度清胃散标准煎液有效成分的基础上适用于现代生产工艺;并且为后续基准样品CQA的确认及制剂开发奠定基础,从而可以更全面地评价清胃散制剂质量的优劣。

基于药物吸收仿生系统的经典名方当归补血汤多指标成分肠吸收特征考察

目的:利用外翻肠囊模型建立的药物吸收仿生系统(DASS)考察当归补血汤多指标成分的肠吸收特征。方法:收集当归补血汤给药后不同时间点的肠吸收液,采用高效液相色谱法(HPLC)检测,以乙腈(A)-0.2%冰乙酸溶液(B)为流动相进行梯度洗脱(0~16 min,15%~23%A;16~20 min,23%~28%A;20~25 min,28%~30%A;25~30 min,30%A;30~35 min,30%~65%A;35~45 min,65%~95%A),检测波长302 nm,建立肠吸收液的HPLC指纹图谱并标定共有峰,计算各指标成分的相对累积吸收率,利用DDSolver 1.0软件对各成分相对累积吸收曲线进行模型拟合,探究不同成分的吸收规律。结果:当归补血汤中成分C2(毛蕊异黄酮葡萄糖苷)和C6的吸收过程较符合零级方程,C9成分以Weibull方程拟合最佳,其余7个成分则更符合Makoid-Banakar方程。成分C1与C2、C3、C5、C7、C10,C2与C5、C7,C3与C4、C5、C7、C10,C4与C6、C10,C5与C7,C6与C10,C7与C10,C8与C9在吸收过程中为同步吸收。随着时间的延长,当归补血汤的整体相对累积吸收率随之增加,120 min时,当归补血汤的整体相对累积吸收率>38%,至180 min时已达49.14%。结论:当归补血汤中的10个指标成分在空肠中均有吸收,但各成分的吸收规律并不一致,表明中药复方制剂的肠吸收具有多元特征,以化学成分为指标的中药复方制剂肠吸收研究能揭示其部分吸收规律,但用于表征复方制剂整体吸收特征的指标还需进一步探究。