瑞马唑仑通过调节肺泡巨噬细胞极化减轻脂多糖诱导的急性肺损伤

目的探讨瑞马唑仑对急性肺损伤(ALI)的作用及潜在分子机制。方法将C57BL/6雄性小鼠随机分为正常对照组(Control组)、模型组(LPS组)、瑞马唑仑干预组(RM+LPS组)和瑞马唑仑对照组(RM组),12 h后处死小鼠取材,收集肺泡灌洗液(BALF)、血清和双侧肺组织。通过苏木素⁃伊红(HE)染色、肺组织的湿干质量比(W/D)、BCA法检测BALF中总蛋白含量评价肺损伤情况;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测BALF和血清中肿瘤坏死因子⁃α(TNF⁃α)、白细胞介素(IL⁃6、IL⁃1β、IL⁃10)的含量;通过流式细胞术检测F4/80+标记的巨噬细胞中M1巨噬细胞阳性标志物iNOS+和M2巨噬细胞标志物CD206+的细胞比例;通过实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹分析检测肺组织中TNF⁃α、iNOS、CD206、Arg⁃1的mRNA和蛋白水平的表达量。结果LPS滴注12 h后小鼠出现明显肺损伤;BALF和血清中TNF⁃α、IL⁃6、IL⁃1β含量升高;流式细胞术检测iNOS+细胞数量显著增加;肺组织中TNF⁃α、iNOS mRNA含量及蛋白水平均显著增加。给予瑞马唑仑干预后,与LPS组相比,RM+LPS组小鼠肺损伤明显改善;BALF和血清中TNF⁃α、IL⁃6、IL⁃1β含量显著降低,IL⁃10含量显著增加;流式细胞术检测iNOS+细胞数量显著降低,CD206+细胞显著增加;肺组织中TNF⁃α、iNOS mRNA含量及蛋白水平均显著降低,CD206、Arg⁃1 mRNA含量及蛋白水平均显著增加。结论瑞马唑仑可通过抑制肺泡巨噬细胞向M1型极化,促进其向M2型极化,减轻炎症反应,缓解脂多糖诱导的ALI。

肺泡巨噬细胞极化及凋亡在脓毒症急性肺损伤中作用机制的研究进展

脓毒症是一种由于细菌感染引发的全身炎症反应综合征,是入侵的病原体造成宿主机体反应失调从而导致多个器官功能障碍进而危及生命。急性肺损伤(ALI)是脓毒症中常见且致死率较高的并发症之一。ALI的发病机制复杂,目前尚未完全阐明,但当前的研究表明炎症是ALI的一个重要机制。肺泡巨噬细胞(AM)是肺内主要的先天免疫效应细胞,可根据环境信号改变自身的功能和表型。

前蛋白转化酶枯草溶菌素9对脓毒症相关血小板活化的作用研究

目的:探讨前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)对脓毒症相关血小板活化的作用。方法:①临床试验:采用前瞻性研究方法,选择2021年1月至10月滨州医学院附属医院重症医学科收治的年龄≥18岁且符合脓毒症3.0诊断标准的脓毒症及脓毒性休克患者作为研究对象;以同期健康体检者作为对照。记录患者入院后第1次血常规中血小板计数(PLT);并于确诊1 d取静脉血,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清PCSK9水平。比较两组PCSK9水平及PLT的差异,并针对脓毒症患者根据PLT进行亚组分析;采用Pearson相关法分析脓毒症患者PCSK9水平与PLT的相关性。②动物实验:将80只雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为对照组、脓毒症模型组〔脂多糖(LPS)组〕、PCSK9抑制剂预处理组(PCSK9 inhibitor+LPS组)及PCSK9抑制剂对照组(PCSK9 inhibitor组),每组20只。腹腔注射LPS 12 mg/kg制备脓毒症小鼠模型;对照组和PCSK9 inhibitor组注射等量无菌生理盐水。PCSK9 inhibitor+LPS组及PCSK9 inhibitor组分别于注射LPS或生理盐水前腹腔注射PCSK9抑制剂5 mg/kg预处理7 d;对照组及LPS组注射等量无菌生理盐水。制模后24 h取肺组织进行病理学及免疫组化观察;取心脏血检测PLT;采用流式细胞仪检测血小板活化情况;采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测血小板活化标志物CD40L的蛋白表达。结果:①临床试验:最终共纳入脓毒症患者57例,同期27例健康体检者作为对照。脓毒症组血清PCSK9水平较健康对照组明显升高(μg/L:232.25±72.21比191.72±54.92,P<0.05),PLT较健康对照组明显降低〔×109/L:146.00(75.50,204.50)比224.00(194.00,247.00),P<0.01〕;进一步亚组分析显示,脓毒症血小板减少者(n=20)血清PCSK9水平较非血小板减少者(n=37)明显升高(μg/L:264.04±60.40比215.06±72.95,P<0.01)。相关分析显示,脓毒症患者血清PCSK9水平与PLT呈显著负相关(r=-0.340,P=0.010)。②动物实验:光镜下显示,对照组与PCSK9 inhibitor组肺组织均无明显病理学改变,且两组PLT、血小板活化情况及血浆CD40L蛋白表达差异均无统计学意义;LPS组小鼠肺间质可见大量炎症细胞浸润,肺泡结构破坏明显,肺泡间隔增厚,肺泡腔内广泛出血,毛细血管扩张并存在出血及血小板聚集,PLT明显降低,血小板活化及血浆CD40L蛋白表达水平显著增加;而给予PCSK9抑制剂预处理后,小鼠肺组织炎症细胞浸润较LPS组有一定程度减少,肺泡间隔增厚减轻,肺组织血小板聚集减少,PLT显著升高(×109/L:515.83±46.60比324.83±46.31,P<0.05),血小板活化及血浆CD40L蛋白表达水平显著降低〔血小板α颗粒膜糖蛋白CD62P阳性表达率:(12.15±1.39)%比(18.33±2.74)%,CD40L蛋白(CD40L/β-actin):0.77±0.08比1.18±0.10,均P<0.05〕。结论:脓毒症中PCSK9水平对促进血小板活化有一定的作用,抑制PCSK9水平对于改善脓毒症血小板减少致不良结局的效果可能具有潜在研究价值。