应用高效离子交换色谱分析青枯菌的致病力分化

应用高效离子交换色谱和激光光散射仪检测器对不同致病力的青枯菌进行分析,建立了一种快速检测青枯菌致病力分化的新方法.青枯菌纯培养物经过高效离子交换色谱分离得到3个致病力不同的特征峰,大小依次为峰3组分>峰2组分>峰1组分.对10株青枯菌进行色谱分析,并结合番茄组培苗感染试验检测其致病力,结果发现,强致病力菌株经过色谱分离只在峰3的保留时间位置出现单一特征峰,在9d内即可引起100%的番茄组培苗发病;若菌株经过色谱分离形成3个特征峰,则峰3所占的面积比越大,该菌株的致病性相对就越强.25株不同致病力青枯菌的验证试验表明了该方法的可行性,番茄组培苗发病率x与峰3面积比y之间呈现出良好的线性关系,回归方程y=0.9581x+5.4984,相关系数r=0.986.通过对青枯菌色谱行为、致病力、细胞表面黏附的EPSⅠ含量三者之间相互关系的进一步研究,发现青枯菌的致病力越强,则细胞表面黏附的EPSⅠ越多,峰3所占的面积比就越大.

产高温纤维素酶木霉菌株的筛选、鉴定及酶学性质研究

从稻草堆肥中筛选得到一株产高温纤维素酶的霉菌M1,通过形态学观察和分子生物学鉴定,确定其为木霉属(Trichoderma)。在稻草液体发酵培养基中,木霉M1的CMC酶(carboxymethyl cellulase,CMCase)合成模式为同步合成型。酶学性质研究表明,此CMC酶的最适反应pH为4.4,在pH 4.0～6.0保温4h仍可保持95%以上的酶活力;其最适反应温度为75℃,在50℃下保温4h,可保持87%的酶活力;60℃下保温4h,可保持65%的酶活力,具有较好的热稳定性。

纤维素降解菌的筛选与诱变育种

采用羧甲基纤维素(CMC)平板初筛和50℃培养,筛选到一株纤维素酶活力较高的耐高温霉菌MY菌株,其CMC培养基最适pH为6.0,培养温度为40℃,最佳产酶时间为5d.以MY菌株为出发菌株,分别采用紫外线和硫酸二乙酯诱变,以透明圈直径与菌落直径的比值(HC值)提高30%以上或菌落形态发生明显变异为筛选指标,共筛选到97株突变株;通过测定粗酶液CMC酶活力,从中筛选出29株CMC酶活力提高30%以上的菌株;结合突变菌株的传代稳定性实验,最后筛选得到1株性能优良的霉菌MY004突变株,其CMC酶活力比原始菌株MY提高了80.6%.

青枯菌野生型菌株和无毒突变株细胞表面的吸附特性(英文)

应用高效离子交换色谱和激光光散射仪检测器（HPLC/MALLS）研究青枯菌野生型菌株79#和无毒突变菌株RS52’对强阴离子交换树脂（SuperQ-650C）的吸附特性.结果显示,这2个菌株在色谱行为和吸附特性方面差异显著.静态吸附试验结果也表明,在相同条件下,79#菌株的吸附速率和吸附量与RS52’菌株不同,79#菌株在60min达到吸附平衡,最大吸附量为1.09×109cfu/g（干树脂）;RS52’菌株在120min达到吸附平衡,最大吸附量为2.10×10~9cfu/g（干树脂）.进一步采用Langmuir和Freundlich吸附等温线方程比较79#菌株和RS52’菌株与树脂之间的吸附能力,研究结果与静态吸附试验结果以及高效离子交换色谱的分析结果相一致,RS52’菌株与树脂之间显示出更强的吸附力;此外,用Freundlich方程拟合的效果优于Langmuir方程,拟合的曲线与实验数据更吻合.