佐剂型关节炎大鼠滑膜成纤维细胞模型建立及特征分析

目的建立佐剂型关节炎大鼠滑膜成纤维细胞(AAFLS)原代培养方法及其特性分析,探讨AA-FLS作为RA体外研究细胞模型的可行性。方法采用热杀死结核分枝杆菌H37Ra(Mtb)免疫SD大鼠,建立佐剂型关节炎大鼠模型,取大鼠双侧膝关节滑膜组织进行原代细胞培养,显微镜下观察细胞形态;免疫细胞化学方法鉴定细胞;CCK-8法检测细胞增殖活性;ELISA方法测定细胞上清中TNF-α和IL-1β水平;Hochest 33258法检测细胞凋亡状态;Western bolt方法检测AA FLS细胞线粒体凋亡通路重要调控蛋白Bcl-2和Bax及Pro-caspase-3和Cleave-caspase-3水平的表达。结果胶原酶法分离获得的滑膜成纤维细胞经传代纯化,呈梭形的细胞占0.95以上,免疫细胞化学鉴定显示滑膜成纤维细胞vimentin表达呈阳性,CD68表达为阴性;AA模型大鼠滑膜成纤维细胞增殖活性较正常大鼠滑膜成纤维细胞增殖活性明显提高,细胞凋亡率降低;在培养的细胞上清中TNF-α和IL-1β水平明显升高;线粒体凋亡通路调控蛋白Bcl-2水平明显升高,而Bax蛋白表达水平明显降低,同时AA-FLS细胞中pro-caspase-3表达量增加。结论 AA-FLS具有增殖活跃、凋亡抑制和分泌高水平促炎性细胞因子的生物特性,可作为体外筛选抗RA药物的细胞模型。

南蛇藤活性成分Nimbidiol抑制血管新生作用研究

采用化学分离、HPLC纯化等方法,从卫矛科植物南蛇藤中分离提取到一个生物活性成分,通过1H NMR和13C NMR方法鉴定为Nimbidiol。采用模式生物斑马鱼及大鼠动脉环实验,观察Nimbidiol对血管新生的影响。将12.5、25、50μmol/L终浓度的Nimbidiol与斑马鱼胚胎和大鼠动脉环共同培养,给药结束后,显微镜下拍照记录斑马鱼节间血管发育状态和动脉环周围新生血管发育情况。实验结果发现,Nimbidiol在12.5～50μmol/L剂量范围内,能够减少斑马鱼节间血管的数量,且呈剂量依赖关系（F=24.773,P〈0.05）,同时能够减少动脉环血管内皮细胞增殖,抑制新生血管的形成。综上所述,Nimbidiol具有明显的抑制血管新生活性。

过山枫中扁蒴藤素含量测定及其抑制HFLS-RA活性和迁移作用

目的建立高效液相色谱法（HPLC）测定过山枫药材中扁蒴藤素含量的方法,研究扁蒴藤素对人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞（HFLS-RA）活性和迁移能力的影响。方法采用C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,甲醇-0.1%磷酸水为流动相进行梯度洗脱,流速1.40 m L·min-1,柱温30℃,检测波长424 nm;MTT法测定HFLS-RA的活性;划痕实验观察扁蒴藤素对HFLS-RA迁移的影响。结果扁蒴藤素在浓度为0.08~0.64g·L-1呈良好的线性关系（r=0.9995）,平均回收率为101.09%,RSD=2.58%;浓度为0.50~1.0μmol·L-1的扁蒴藤素,抑制HFLS-RA活性具有剂量和时间的依赖性关系,能够明显减少血管内皮生长因子（VEGF）诱导HFLS-RA的迁移。结论所建立的扁蒴藤素含量测定方法简便、准确,可用于过山枫药材质量的控制;扁蒴藤素具有抑制HFLS-RA活性和迁移的作用。

类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞在RA病程中的作用

滑膜成纤维细胞是类风湿性关节炎发病过程中的核心细胞,其类肿瘤样的异常增殖是滑膜组织增生的主要原因,在病程中所分泌的高水平促炎性细胞因子、趋化因子和基质金属蛋白酶介导了炎症,侵蚀骨及对软骨吸收降解,最终导致骨关节的破坏.本文就滑膜成纤维细胞在类风湿性关节炎的发病过程中的作用进行综述.