模拟空间环境下低剪切力对肺炎克雷伯氏菌Ⅲ型菌毛表达调控机制的初步研究

目的:探索模拟空间环境下低剪切力对肺炎克雷伯菌Ⅲ型菌毛表达的影响及其可能机制,为空间和地面感染防控研究的靶标筛选提供新的思路和依据。方法:以肺炎克雷伯菌ATCC BAA-1705株M1亚群为研究对象,以不同的剪切力进行一系列试验,通过甘露糖抑制的酵母凝集试验、透射电镜观察对表型进行研究,通过qRT-PCR及转录组测序结果分析对表型进行验证及其可能机制探究。结果:甘露糖抑制的酵母凝集试验、透射电镜观察等表型试验表明,随着剪切力的增高,Ⅲ型菌毛的表达降低;qRT-PCR及转录组结果测序分析发现,低剪切力条件下,Ⅲ型菌毛结构基因及相应调控基因表达上调,进一步验证了以上发现。针对17个c-di-GMP表达相关的GGDEF基因进行转录组测序分析,并与qRT-PCR试验结果相比对,发现了7个差异表达较显著的基因(KPHS-06770、KPHS-17760、KPHS-29590、KPHS-38170、KPHS-39010、KPHS-39950和KPHS-47910),随着剪切力的降低,这7个基因的表达明显升高。结论:低剪切力促进肺炎克雷伯菌Ⅲ型菌毛的表达,其机制有可能是以上7个基因中的一个或多个表达上调,造成局部c-di-GMP表达水平增高,从而促进Ⅲ型菌毛的表达。以上研究提示,在低剪切力的空间环境下,肺炎克雷伯菌Ⅲ型菌毛的表达增加,可能造成其生物被膜和致病能力改变,从而潜在威胁航天员的健康。

上海市嘉定区腹泻患者沙门菌流行病学特征及耐药性分析

【目的】分析上海市嘉定区食源性腹泻患者沙门菌的流行病学特征和耐药情况。【方法】选取5家监测点医院,于2018年1月—2019年12月采集食源性腹泻患者粪便或肛拭子标本共1810份,采用微量肉汤稀释法进行药敏试验。【结果】沙门菌总检出率7.85%(142/1810),0岁~、7岁~、18岁~、41岁~和>65岁的检出率分别为8.97%(13/145)、6.94%(5/72)、7.58%(75/989)、8.69%(41/472)、6.06%(8/132)。罗森沙门菌是本地区新出现的优势血清型,出现多株对第三、四代头孢菌素和氟喹诺酮类、甚至阿奇霉素同时耐药的菌株;鼠伤寒沙门菌对头孢噻肟、头孢吡肟的敏感率为84.85%,对氟喹诺酮类药物的耐药率为12%~16%;沙门菌和肠炎沙门菌对氟喹诺酮类药物中介率分别为56%~60%和95.56%。【结论】沙门菌感染在各年龄段都有较高的检出率;需要对新的优势血清型加强关注;鼠伤寒沙门菌对第三、四代头孢菌素和氟喹诺酮类药物已产生较高耐药性,沙门菌、尤其是肠炎沙门菌对氟喹诺酮类药物的敏感性已大幅下降。

小RNA对细菌生物膜形成的调控研究进展

小RNA在细菌的生长过程中发挥重要调控作用,在感受到外界信号,如营养物浓度、温度、pH值和渗透压的改变时,小RNA可通过影响靶标基因的表达以适应环境的变化。细菌由浮游状态向固体附着生长状态的转变过程中自身会产生一种细胞外基质,即生物膜,其主要由蛋白质、多糖和DNA组成。最新研究表明,小RNA在调控细菌生物膜形成的系统中发挥着重要的作用。小RNA通过与靶标mRNA碱基配对或与调节蛋白相互作用,在细菌生物膜形成中发挥调控作用。该文综述了小RNA对细菌生物膜形成的调控机制和途径,阐述了3种经典的小RNA调控细菌生物膜形成的模型,以及小RNA调控对细菌生物膜形成的研究现状和发展方向。

鼠疫耶尔森菌中长度在100 nt以内的小RNA缺失株及过表达菌株的构建

目的构建鼠疫耶尔森菌中长度在100 nt以内的小RNA缺失株及过表达菌株的方法。方法在高拷贝质粒pBAD/HisA的基础上利用定点突变试剂盒制备一个可诱导的转录融合载体作为小RNA的过表达质粒。通过转录组测序、引物延伸并参考已有文献,预测了目的小RNA的存在、大小以及转录起始位点等,将目的小RNA的全长导入到改造后的质粒中并构建小RNA的过表达菌株。结果与结论成功构建了小RNA sR01、sR02、sR03、HmsA 4株缺失株以及小RNA MicF、HmsA、CpxQ 3株过表达菌株。建立了基于λ-Red同源重组、100 nt以内短片段小RNA敲除方法和基于定点突变试剂盒改造质粒的小RNA过表达菌株构建方法。

上海市嘉定区腹泻病例肠致病性大肠埃希菌检测及药敏结果分析

目的分析上海市嘉定区腹泻病例中肠致病性大肠埃希菌(EPEC)流行病学、血清学和耐药特征。方法2015年1月—2021年12月采集4家监测医院腹泻病例标本,开展PCR检测、血清学鉴定和微量肉汤稀释法药敏测试。结果儿童检出率为9.38%(50/533),6月(24.00%)、5月(20.45%)检出率较高;成人检出率为1.57%(13/827)。76.19%的O抗原检出,分属于31种O抗原,传统O抗原种类和菌株数量分别占19.35%、17.46%;77.78%的H抗原检出,分属于19种H抗原;60.32%的O和H抗原均检出。68.25%产生了耐药性,46.03%为多重耐药;对头孢噻肟的敏感率为90.48%,对环丙沙星和左氧氟沙星的敏感率均为77.78%,中介率分别为14.29%、15.87%。结论EPEC是儿童腹泻的常见病原体,5月—6月是儿童检出高峰;血清学种类较分散,无明显优势的O和H抗原,传统O抗原占比不高;对第三代、四代头孢菌素还保有一定敏感性,对氟喹诺酮类有一定比例的中介率且敏感性不高。