医疗机构多组学自制试剂实验室的建设实践与思考

实验室自制试剂(laboratory-developed test,LDT)是指由实验室内部开发使用、不需要经过商业注册的体外诊断试剂(in vitro diagnostic medical devices,IVDs)。自制试剂涉及技术广泛,如高通量测序技术、质谱技术、流式细胞分析技术等,能够结合基因组学、转录组学、蛋白质组学、代谢组学等多种组学技术,成为研究遗传病生理病理机制的重要技术方法。中日友好医院被指定为我国10家自行研制使用体外诊断试剂的试点医疗机构之一,率先开展多组学自制试剂实验室建设。本文对医疗机构建设多组学自制试剂实验室的必要性、建设实践和运行风险等进行阐述。

北京某三甲医院健康体检女性HPV感染情况及TCT结果分析

目的探讨北京某三甲医院健康体检女性HPV感染情况及TCT结果分析,为本地区宫颈癌防治提供参考。方法回顾分析2022年7月至2023年9月于中日友好医院进行健康体检的10124例女性HPV及TCT结果。结果健康体检女性10124例中,HPV阳性率为7.34%,不同年龄段间HPV阳性率比较差异具有统计学意义(χ^(2)=29.721,P<0.001)。高危型HPV占比前五位亚型是HPV⁃52、HPV⁃58、HPV⁃51、HPV⁃16和HPV⁃39。TCT结果阳性率为2.49%,≥61岁人群ASC和HSIL占比最高,21~岁人群LSIL组占比最高。随着宫颈病变加重,从ASC到LSIL再到HSIL,HPV的阳性率逐渐升高(51.41%,70.18%,88.89%),不同程度宫颈病变的HPV阳性率比较差异具有统计学意义(χ^(2)=485.453,P<0.001),不同程度宫颈病变之间HPV感染类型比较差异有统计学意义(χ^(2)=18.943,P<0.001)。结论宫颈病变程度加重,HPV感染率升高,应重视本地区适龄妇女宫颈癌筛查。

环磷酰胺对小鼠免疫抑制的动物模型建立

[目的 ]建立肿瘤化疗免疫抑制动物模型 ,为建立保健食品减轻化疗毒副作用功能的评价方法提供科学依据。 [方法 ]给予C57BL/6J正常小鼠和荷瘤小鼠腹腔内注射不同剂量的环磷酰胺 (CP) ,隔日连续腹腔注射 4～ 5次 ,观察对小鼠免疫学指标及肝肾功能的影响。 [结果 ]正常小鼠和荷瘤小鼠腹腔注射 2 0、5 0、10 0mg/kg体重的CP后 ,各剂量组均出现不同程度的免疫抑制和肝肾功能损伤。①正常小鼠 2 0mg/kg体重以上剂量组 ,白细胞计数、抗体生成细胞以及巨噬细胞功能显著下降 ,谷草转氨酶 (AST)升高 ;5 0mg/kg体重剂量组的脾脏指数下降 ;5 0mg/kg体重以上剂量组天然杀伤细胞(NK)细胞活性均出现显著下降 ,以及谷丙转氨酶、尿素的升高。②荷瘤小鼠 2 0mg/kg体重以上剂量组白细胞计数、巨噬细胞功能显著下降 ,5 0mg/kg体重以上剂量组脾脏指数、NK细胞活性、抗体生成细胞功能均出现显著下降 ,以及谷草转氨酶、谷丙转氨酶、尿素的升高。③正常小鼠注射 60mg/kg体重的CP后 ,血清白细胞介素 2及肿瘤坏死因子均出现显著下降 ;荷瘤小鼠注射 60mg/kg体重的CP后 ,血清白细胞介素 2出现显著下降。 [结论 ]给予C57BL/6J正常小鼠和荷瘤小鼠腹腔注射 2 0 5 0mg/kg体重的CP ,隔日连续 4 5次 ,即可建立免疫抑制动物模型。建议采?

植物甾醇酯降血脂功能实验研究

目的:探讨植物甾醇酯对金黄地鼠血脂的影响。方法:采用金黄地鼠,给于高脂饲料造成高胆固醇血症,同时给于不同剂量的植物甾醇酯(分别为0.25、0.50、1.00、2.00、4.00g/kg.BW),喂养12周后检测血清TC、LDL-C、HDL-C、TG。结果:以不同剂量的植物甾醇酯喂养金黄地鼠12周, 1.00、2.00、4.00g/kg.BW剂量组的血清TC、LDL-C、HDL-C明显低于模型对照组,差异均有显著性(P <0.05),三个剂量组血清TC抑制率分别为31.6%、40.6%、43.7%,血清LDL -C抑制分别为49.4%、54.1%、59.3%,血清HDL-C抑制率分别为14.1%、20.2%、22.7%。结论:植物甾醇酯可抑制以高脂饲料喂养的金黄地鼠血清TC、LDL-C、HDL-C升高,最低剂量是1.00g/kg.BW。

共轭亚油酸减肥作用的人体试食试验研究

[目的 ] 研究共轭亚油酸对人体的减肥作用。 [方法 ] 3 0名单纯性肥胖的志愿者连续食用共轭亚油酸胶囊 3 5d ,于试验开始及结束时均测试各项安全性指标及功效性指标。 [结果 ] 受试者连续食用共轭亚油酸胶囊 3 5d后 ,体重平均下降 1.9kg ,体脂总量平均下降 1.2kg ,体脂百分率平均下降 0 .7% ,三角肌处脂肪厚度减少 2 .1mm ,肩胛下脂肪厚度减少 4.1mm ,脐旁脂肪厚度减少 3 .5mm ,髂棘处脂肪厚度减少 3 .6mm ,腰围减少 4.3cm ,臀围减少 1.5cm。试验前、后受试者各项临床指标均未见异常 ,并且试验后运动耐力未下降。 [结论 ] 共轭亚油酸对人体具有明显的减肥作用 ,且对机体健康无明显损害。

从“风痰虚”论治咳嗽变异性哮喘经验

咳嗽变异性哮喘(CVA)是指以慢性咳嗽(>8周)为主要或唯一症状的不典型哮喘,常为刺激性咳嗽。近年来本病的全球发病率和病死率仍呈上升趋势,有研究结果显示,30%的CVA患者不经治疗或治疗不当可发展成为典型哮喘[1]。目前西医治疗本病常选用吸入糖皮质激素,同时可联合吸入β2受体激动剂或其他支气管舒张剂以缓解症状,但停药后病情易反复,难以根治,严重影响患者的肺功能和日常生活质量。

复合真菌多糖诱导肝癌Bel-7402细胞凋亡的研究

采用体外细胞培养的方法 ,观察复合真菌多糖诱导人肝癌细胞 Bel- 740 2凋亡的影响 ,利用双重免疫标记方法分析肿瘤抑制基因 P5 3在 Bel- 740 2凋亡中的表达。结果表明 :不同浓度的复合真菌多糖均能明显诱导 Bel- 740 2细胞凋亡 ,并随浓度增加而渐次出现不同时相的细胞凋亡特征性染色质凝聚 ;能明显降低G1 、S期 ,且有显著的剂量 -效应关系 ,凋亡细胞百分率亦随浓度的增加而逐渐升高 ;在高浓度组出现典型的DNA阶梯状电泳条带。证明复合真菌多糖抗肿瘤作用机理与诱导肿瘤细胞的凋亡密切相关 ,其诱导肿瘤细胞凋亡是 P5 3非依赖性。

复合真菌多糖抗肿瘤作用的免疫学研究

采用猴头菇、香菇、茯苓 3种真菌的多糖等比混合作为总多糖 ,再按一定比例配以葡萄籽多酚和甘草酸 ,制成复合真菌多糖 ,观察其抗肿瘤作用效果以及对荷瘤鼠免疫功能的调节作用。实验以 10 0、2 0 0、40 0 mg/ kg BW3个剂量 (复合多糖 、 、 组 )给小鼠灌胃 3周后右前腋下接种 S- 180 ,继续灌胃 10日后实验。同时设 2 0 0 m g/ kg BW的香菇多糖对照组和荷瘤模型对照组 ,另设正常对照组。结果显示 :该复合多糖具有明显的抗肿瘤作用 ,3个剂量组的抑瘤率分别为 37.74%、44 .73%、48.32 % ,同等剂量的复合多糖 组的抑瘤效果明显优于单味香菇多糖。荷瘤鼠 L3T4百分率和 L3T4/ L yt- 2比值明显下降 ,NK细胞活性、IL - 2、IFN-γ的诱生水平显著低于正常小鼠。复合多糖作为免疫增强剂 ,可明显提高荷瘤鼠 L3T4百分率和 L3T4/ L yt- 2 ,对 L yt-2的百分率也有一定的提高作用 ,增强 NK细胞活性 ,促进 IL - 2、IFN-γ的诱生水平。单味香菇多糖也有一定改善荷瘤鼠免疫功能的作用 ,但是不如等剂量复合多糖的效果明显 ,佐证不同来源的抗肿瘤作用有效成分的相互配伍、相互协同的重要性。

隧道围岩位移的灰色优化模型预测

传统灰色GM(1,1)模型 ,多适用于等间距和低增长序列监测数据的模拟预测 ;对非等间距和高增长序列 ,一般经过等间距处理或经过复杂的变换建立非等间距模型进行预测 ,且往往产生较大的滞后误差。在时间序列 [k ,k + 1]区间上 ,用n个小区间的梯形面积代替 [k ,k + 1]区间上GM(1,1)函数曲线对应的面积 ,以优化提高背景值z( 1) (k + 1)的精度。这种以优化灰色模型背景值为基础构建的灰色优化模型 ,普遍适用于隧道围岩位移等间距或非等间距以及低、高增长监测数据序列的位移预测 ,能很好地模拟预测隧道围岩位移的Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型时序变化特征 。

红花水提取物的安全性研究

目的 研究红花水提取物的毒性大小。方法 用红花水煎液进行了急性毒性、小鼠骨髓微核、TK基因突变、体外细胞毒性和Ames试验。结果 红花的LD50 >88 8g/kgBW ,属无毒物 ,对CHO和CHL的IC50 分别为 6 0 7mg/ml和 6 6 5mg/ml(生药终浓度 ) ,遗传毒性试验结果均为阴性 ,2 2 2 0mg/皿剂量的红花对TA98、TA10 0和TA10 2均有明显抑制细菌生长的作用。结论 红花水提取物对正常细胞有一定的毒性 ,但有抑制细菌生长的作用 。

五味子的急性毒性和遗传毒性研究

目的 研究五味子的急性毒性和遗传。 方法 将五味子干燥果实用 80 %的乙醇提取制备其粗提物。用霍恩氏法设 2 .15、4.64、10 .0、2 1.9和 46.4g/kgBW五个剂量组研究五味子乙醇粗提物对昆明种小鼠的急性毒性 ;用2 .5、5 .0和 10 .0 g/kgBW三个剂量组进行了小鼠微核试验 ;用 0 .0 4、0 .12、0 .5 8、2 .3 2、11.5 9和 5 7.97mg/皿六个剂量组进行了Ames试验 ;用 113 .2 8、2 2 6.5 6、45 3 .12和 90 6.2 5 μg/ml四个剂量组进行了TK基因突变试验。 结果 46.4g/kgBW剂量组 10只小鼠 2 4h内全部死亡 ,2 1.9g/kgBW剂量组 2 4h内死亡 8只 ;10 .0g/kgBW剂量组小鼠灌胃后出现精神萎靡、活动量减少 ,行动迟缓 ,无死亡 ;4.64 g/kgBW剂量组仅有活动量减少 ,无其它症状 ;2 .19g/kgBW剂量组无异常表现 ;其LD50 分别为雄 14 .67和雌 19.96g/kgBW。微核试验中各剂量组的雄雌小鼠均未见微核率增加 ;Ames试验中各剂量组均未见回变菌落数增加 ,其中 5 7.97mg/皿剂量组菌落数显著减少 ,五味子乙醇粗提物有明显的抑菌作用 ;TK基因突变试验中各剂量组的突变频率与对照组比较差异均无显著性。 结论 在所选试验和剂量范围内五味子的乙醇粗提物未显示致突变作用。

大鼠肾细胞分离制备及培养方法的比较

目的比较胶原酶消化法、胰蛋白酶消化法和胶原酶、胰蛋白酶两步消化法(简称两步消化法)对大鼠肾细胞分离效果及细胞产量的影响,以及不同培养基(MEM、RpMI1640)、鼠龄(乳鼠、成年鼠)对细胞产量、质量、增殖率和乳酸脱氢酶(LDH)漏出量的影响.方法分别对两组Wistar大鼠(乳鼠和成年鼠)用三种不同的消化方法制备大鼠肾组织细胞悬液,分别在MEM培养液和RPMI1640培养液中原代培养,培养48小时之后第一次传代,观察细胞质量,计算细胞产量,MTT法检测传代细胞24～48小时之间的增殖率,生化分析仪检测传代细胞第1～7天培养液中LDH漏出量.结果胶原酶消化法和两步消化法的肾细胞产量显著高于胰蛋白酶消化法(P＜0.01),两步消化法的细胞质量优于胶原酶消化法,MEM培养液和RPMI1640培养液对细胞产量、增殖率和LDH漏出量的影响均无显著性差异,乳鼠的肾细胞产量显著高于成年鼠(P＜0.01).结论两步消化法对于肾细胞的分离制备尤为适合,MEM培养液和RPMI1640培养液均适于肾细胞的培养,乳鼠比成年鼠更适合肾细胞的制备.

凝结芽孢杆菌GBI-30,6086的安全性探讨

对凝结芽孢杆菌GBI-30,6086的食用安全性进行探讨。根据凝结芽孢杆菌GBI-30,6086的毒理学、耐药性和产毒能力、食用和使用情况等数据,考虑其推荐使用量和我国人群的消费水平,对其食用健康风险进行安全性评估。已有研究未观察到凝结芽孢杆菌GBI-30,6086具有毒性、耐药性和产毒能力,临床实验未见不良临床反应报告。将中国2002年居民的食物摄入量转换为食物摄取份数(25.38份),凝结芽孢杆菌GBI-30,6086在其推荐剂量下,预估摄入量为5.1×1010CFU/d,小于每日可接受摄入量(ADI)值(8.0×1010CFU/d)。在其推荐剂量下,凝结芽孢杆菌GBI-30,6086对健康产生潜在影响的风险较低。

淫羊藿水提取物的食用安全性研究

背景与目的:淫羊藿是一种传统的中药材,但是其安全性毒理学的资料相对缺乏,故我们对其安全性进行评价,以便为淫洋霍的综合利用提供依据。材料与方法:运用急性毒性试验、细胞毒性试验、遗传毒性试验(包括小鼠骨髓微核实验、Ames实验和TK基因突变实验)对淫羊藿进行了较系统的安全性评价。结果:淫羊藿的半数致死剂量(LD50)大于80g/kg,对中国仓鼠卵巢细胞CHO和中国仓鼠肺细胞CHL的半数致死浓度(IC50)分别为55.4mg/ml和19.53mg/ml,并且小鼠骨髓微核实验、Ames实验、TK基因突变实验的结果均为阴性。结论:淫羊藿属无毒物质,在较高剂量下对CHO和CHL均表现出一定的细胞毒性,本试验条件下无致基因突变和染色体畸变作用。

循环肿瘤DNA与肿瘤精准治疗

目前治疗肿瘤的手段多种多样,已经不完全局限于传统的手术切除及放化疗等,分子靶向治疗药物的普及使"精准医学"正逐步被应用到临床肿瘤领域。随着基因组学及生物大分子技术的日渐成熟,肿瘤精准医学将个体疾病的遗传学信息、诊断、治疗三者结合,使肿瘤的诊治更具有针对性、靶向性和特异性。因此,找到一种可以实时监测肿瘤状态的标志物至关重要。循环肿瘤DNA(circulating tumour DNA,ct DNA)是肿瘤细胞在坏死、凋亡后释放的一种游离DNA,由于其在血液中循环,所以对ct DNA的检测可以及时反映肿瘤状态。目前ct DNA检测已应用于肿瘤的早期诊断、靶向治疗和预后判断等方面,由于高度特异性及灵敏性的新技术不断出现,检测ct DNA可作为一种"液体活检",具有很好的临床应用前景。

杜仲的快速毒性筛选试验

背景与目的:杜仲属于可用于保健食品的中药,但是其安全性毒理学评价的资料相对缺乏,对其安全性进行评价,以便为杜仲的综合利用提供依据。材料与方法:运用急性毒性试验、细胞毒性试验、遗传毒性试验对杜仲进行了较系统的安全性评价。结果:杜仲的LD50为160.0 g/kg;对CHO和CHL细胞的IC50均为109.38 mg/ml,并且在该剂量之下为阴性结果。结论:杜仲属无毒物,在较高剂量下对CHO和CHL细胞均表现出一定的毒性;本实验条件下无细胞染色体畸变的遗传毒性。

鹿茸人参制剂的毒理学安全性评价

[目的]了解鹿茸人参制剂的安全性。[方法]小鼠急性经口毒性试验,Ames试验,小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验,小鼠精子畸形试验,大鼠30 d喂养试验。[结果]该制剂急性经口毒性为无毒,在三项遗传毒性试验中均为阴性结果,在30 d喂养试验中也无异常发现。[结论]鹿茸人参制剂安全无毒。