猪黄体不同发育时期活性氧水平及多种抗氧化酶mRNA表达量变化规律的研究

试验旨在研究活性氧(ROS)及抗氧化酶基因表达在猪黄体组织发育及退化过程中的变化规律,为诠释猪黄体抗氧化机制补充理论基础并提供新的思路。试验所用卵巢采自延吉屠宰场,将黄体从卵巢剥离后,通过其形态大小将黄体初步分为初期、中期、后期以及白体,然后通过检测孕酮水平准确区分中期及后期黄体;通过冰冻切片及DHE荧光染色技术检测各时期黄体ROS水平,通过实时荧光定量PCR对各时期黄体内锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)、过氧化氢酶(CAT)以及谷胱甘肽过氧化氢酶(GPx)的mRNA表达量进行检测。结果表明:猪黄体内ROS水平随猪黄体周期性发育进程出现规律性升高,即后期ROS水平显著高于其他时期(P<0.05);中期显著高于初期与白体(P<0.05);而初期与白体间差异不显著(P>0.05)。Mn-SOD、GPx1及GPx4基因的表达水平随黄体的发育进程则出现规律性的下降:初期及白体中这几个基因的表达水平显著高于中期与后期(P<0.05),中期显著高于后期(P<0.05)。对于GPx3基因,其在白体的表达量显著高于其他时期(P<0.05),初期表达水平显著高于中期与后期(P<0.05),中期显著高于后期(P<0.05)。CAT基因表达量不随黄体的发育而变化(P>0.05)。综合上述试验结果,ROS、Mn-SOD及GPx与猪黄体发育及退化有关;而ROS水平与Mn-SOD及GPx的表达水平呈现出相反的规律。

亲代三硝基丙酸诱导的氧化应激对胎鼠的影响

试验旨在研究氧化应激对子代小鼠产生的影响。对亲代的公鼠和母鼠分别腹腔注射12.5μg/g三硝基丙酸(3-NPA),分为正常公鼠与正常母鼠交配的对照组(C)、正常公鼠与3-NPA处理的母鼠交配组(FM)、正常母鼠与3-NPA处理的公鼠交配组(MM)、3-NPA处理的公鼠与3-NPA处理的母鼠交配组(DM)共4组,试验重复3次。通过剖出胎鼠的方法统计子代胎鼠的数量,采集子代胎鼠的心脏、肝脏、肺脏3个器官,测定超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活力及总抗氧化能力(T-AOC)。结果显示,与对照组相比,FM组胎鼠数量下降不明显(P>0.05),MM和DM组胎鼠数量均显著减少(P<0.05);FM与DM组胎鼠肝脏、肺脏中CAT活力均显著增加(P<0.05);MM组胎鼠肝脏、肺脏中CAT活力增加,但差异不显著(P>0.05);各组心脏中CAT活力均增加,但差异均不显著(P>0.05);除MM组肺脏中T-AOC活力增加差异不显著(P>0.05),其余各组肝脏、肺脏和心脏中T-AOC活力均显著增加(P<0.05);DM组胎鼠肝脏中GSH-Px活力显著增加(P<0.05),FM和MM组胎鼠肝脏中GSH-Px活力增加,但差异不显著(P>0.05);FM与DM组胎鼠肺脏中GSH-Px活力显著升高(P<0.05);各组心脏中GSH-Px活力均差异不显著(P>0.05);DM组胎鼠肝脏、肺脏、心脏中SOD活力均显著增加(P<0.05),FM和MM组胎鼠肝脏、肺脏、心脏中SOD活力增加,但差异均不显著(P>0.05)。因此,试验成功构建3-NPA氧化应激小鼠模型,且亲代雄性小鼠氧化应激对胎鼠影响较大。

山奈酚对三硝基丙酸诱导氧化应激胎鼠的影响

试验旨在研究山奈酚对三硝基丙酸诱导亲代小鼠氧化应激从而对子代胎鼠氧化应激和抗氧化能力的作用。42只亲代小鼠分为3组:对照组、氧化应激模型组、抗氧化剂组,试验重复3次。测定妊娠20 d后的子代胎鼠肝脏、肺脏和心脏3个器官中的总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力、总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)含量和过氧化氢酶(CAT)活力。结果显示,山奈酚显著代偿降低子代胎鼠心、肝、肺相关抗氧化酶的活力(P<0.05),显著降低氧化应激产物的含量(P<0.05)。研究表明,山奈酚对于由三硝基丙酸诱导的亲代小鼠氧化应激模型的子代胎鼠氧化应激情况具有一定的抗氧化作用。

活性氧(ROS)对小鼠早期胚胎胚细胞分裂的影响

在体外CZB培养的不同时期添加过氧化氢（2．1μmol／L），发育至囊胚阶段，制作胚胎标本，观察其囊胚发育率、胚细胞数和分裂相数。结果显示：0～12h组和0～72h组的胚胎发育率显著低于其他几组（P〈0．05）．对照组、12～24h组、24～36h组、36～48h组之间均差异不显著（P〉0．05）；各组之间的胚细胞数和分裂指数均无显著差异。说明胚胎在体外培养时，2-细胞期胚胎对外源性乩0，最敏感，也最容易发生发育阻滞。但是经H2O2处理之后，度过2-细胞期发育阻滞的胚胎能在以后的发育中发生补偿性生长，其胚细胞数和分裂指数都和体外正常发育的胚胎没有差异。

羊主效多胎基因的研究现状

排卵数和每窝仔数是羊的重要繁殖性状,具有很高的经济价值。但繁殖性状是低遗传力性状,按传统方法改良和提高家畜繁殖力,遗传进展缓慢,改良效果不佳。所以将传统改良和利用遗传标记的辅助选择(MAS)结合起来,找到与繁殖性能相关的基因,并将其作为遗传标记或直接导入其他品种羊中均可以有效地提高选择效果。现已经有众多研究人员在多种羊品种中发现了多个对生殖性状(包括排卵数和每窝仔数)具有重要影响的基因,如BMPR1B、BMP15、GDF9以及B4GALNT2等。本文对这些影响不同羊品种多产性及其遗传多样性的主要基因及其突变进行了综述。

活性氧(ROS)对小鼠早期胚胎染色体相对长度的影响

通过对小鼠体内发育的囊胚、扩张囊胚和从1-细胞期取出在CZB培养液中培养的囊胚、扩张囊胚的染色体相对长度进行统计分析,在各号染色体相对长度出现显著性差异的同时,发现体外培养的比体内发育的染色体相对长度短;体外CZB培养的不同时期添加外源性过氧化氢,发育至囊胚、扩张囊胚阶段,制作胚胎标本,观察胚胎的染色体相对长度。结果表明:不同时期添加外源性过氧化氢组比对照组的染色体相对长度短。说明经过氧化氢处理之后存活下来的胚胎染色体相对长度发生了变化。

活性氧(ROS)对小鼠胚胎分裂指数的影响

小鼠体内发育的桑椹胚、早期囊胚、囊胚、扩张囊胚和从1-细胞期取出在CZB培养液中培养的桑椹胚、早期囊胚、囊胚、扩张囊胚的分裂指数分别为5．85，4．64，2．16，4．96和6．25，508，2．77，3．03．经统计分析，体内与体外CZB培养的胚胎分裂指数无显著差异，说明体内发育的胚胎和体外CZB培养胚胎的有丝分裂增殖能力没有差异．体外CZB培养的不同时期添加H2O2的胚胎，发育至桑椹胚、早期囊胚、扩张囊胚阶段，制作胚胎标本，胚胎的分裂指数显示：扩张囊胚的0～72h组的分裂指数与0～12h，24～36h组有显著差异（P〈0．05），而与其它各发育阶段的各组分裂指数均无差异，说明经H2O2处理之后存活下来的胚胎与正常体外发育胚胎的有丝分裂增殖能力没有差异．

活性氧(ROS)对小鼠早期胚胎染色体数目的影响

小鼠体内发育的囊胚、扩张囊胚和从1-细胞期取出在CzB培养液中培养的囊胚、扩张囊胚的染色体数目分别是39.00,38.43和42.47,39.56.经统计分析,体内与体外CzB培养的染色体数目无显著性差异.体外CZB培养的不同时期添加外源性H2O2,发育至囊胚、扩张囊胚阶段,制作胚胎标本,观察胚胎的染色体数目.结果显示:扩张囊胚的0～72 h组的染色体数目与对照组的染色体数目有显著性差异(P＜0.05),而其它各发育阶段的各处理组染色体数目之间均无显著性差异.说明经H2O2处理之后存活下来的胚胎与正常体外发育的胚胎染色体数目没有差异.

延边奶山羊羔羊超数排卵及体外成熟的研究

[目的]对延边奶山羊羔羊超数排卵及体外成熟进行研究。[方法]以延边奶山羊为试验对象,研究不同超排方案对羔羊卵泡发育的影响,比较了羔羊超排处理后与成年母羊卵巢内的卵母细胞体外成熟的差异。[结果]延边奶山羊的最佳超排方案为CIDR+PMSG 800 IU注射1次+FSH(加拿大)20 IU/次,间隔12 h注射6次;宁波产FSH超排效果不稳定,卵泡回收率低。成年母羊卵母细胞的体外成熟率显著高于母羔羊超排卵母细胞。[结论]该研究为建立延边奶山羊JIVET技术体系提供依据。

嘌呤核苷类核成熟抑制剂对延边奶山羊卵母细胞体外成熟的影响

[目的]提高卵母细胞体外成熟率及其后续发育能力。[方法]以延边奶山羊为试验对象,活体采卵所获得的卵母细胞为材料,利用核成熟抑制剂HX和IBMX分别进行体外成熟培养,研究嘌呤核苷类核成熟抑制剂对延边奶山羊卵母细胞体外成熟的影响。[结果]所有浓度HX和IBMX均可有效维持卵母细胞停留在GV期且呈剂量依赖性逐渐升高。最适宜延边奶山羊卵母细胞成熟的HX和IB-MX添加浓度分别为2和0.2 mmol/L。[结论]该研究可为延边奶山羊的转基因和体细胞克隆试验等提供稳定的成熟卵母细胞来源。