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机械力活化制备电解锰渣基复合充填材料的性能及其机理研究
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作者 徐中慧 宁丽萍 +3 位作者 禹云林 高诗敏 向应令 李宇 《工业安全与环保》 2024年第4期92-97,共6页
以电解锰渣为基体,外加粉煤灰、氢氧化钙及硅酸盐水泥制备电解锰渣基复合充填材料(CFM),研究了原料机械力球磨前后CFM性能的变化。机械力球磨可显著降低混合原料粒径(D_(90)降低50.92%)、增加原料间的接触面积,提升原料反应活性,使水化... 以电解锰渣为基体,外加粉煤灰、氢氧化钙及硅酸盐水泥制备电解锰渣基复合充填材料(CFM),研究了原料机械力球磨前后CFM性能的变化。机械力球磨可显著降低混合原料粒径(D_(90)降低50.92%)、增加原料间的接触面积,提升原料反应活性,使水化反应的需水量增加、反应速度加快,并促进基体中生成更多水化产物,进而提升CFM的性能。原料经球磨后制备的CFM-B2(电解锰渣掺量55%)的流动性、凝结时间、泌水率、线性收缩和抗压强度均满足充填材料使用要求,且其重金属、氨氮浸出浓度满足标准(GB 5085.3—2007和GB 31573—2015)要求。 展开更多
关键词 机械力球磨 电解锰渣 复合充填材料
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猪繁殖与呼吸综合征病毒GD-ZQ变异株的分离及遗传变异分析 被引量:5
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作者 高诗敏 王敏功 +2 位作者 邓瑞林 姚晓辉 王林川 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第5期121-125,共5页
用RT-PCR方法从某猪场病猪体内分离到1株猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV),命名为PRRSV GD-ZQ株,可致Marc-145细胞病变。细胞分离培育病毒至增殖性能稳定后,分别扩增分离病毒的Nsp2... 用RT-PCR方法从某猪场病猪体内分离到1株猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV),命名为PRRSV GD-ZQ株,可致Marc-145细胞病变。细胞分离培育病毒至增殖性能稳定后,分别扩增分离病毒的Nsp2、ORF3、ORF5基因并测序,绘制进化树比较分析遗传进化。结果显示分离毒株的Nsp2、ORF3、ORF5基因序列与美洲型VR-2332、CH-1a等毒株核苷酸序列相似性在89.0%~95.8%之间,与欧洲毒株LV的相似性在48.2%~49.3%之间,遗传进化分析显示该毒株与CH-1a株处于同一分支,分离毒株的Nsp2序列与以HEB1为代表的PRRSV变异株相似性在98.3%~99.4%之间。该病毒在细胞盲传5代能产生稳定规律细胞病变(CPE),且第5代病毒TCID50达10-5.6/0.1 mL。进化分析结果显示GD-ZQ分离株是PRRSV变异株,具有"高热病"PRRSV毒株的变异特点,为了解PRRSV在时间上和分子水平上的遗传变异规律、变异幅度和变异范围奠定基础。 展开更多
关键词 PRRSV GD-ZQ变异株 遗传变异分析 NSP2基因 ORF3基因 ORF5基因
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新形势下《动物传染病学》教学方法的思考与改革 被引量:4
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作者 高诗敏 马海利 +1 位作者 化丽珍 高文伟 《畜牧与饲料科学》 2014年第4期59-61,共3页
《动物传染病学》是农业院校动物医学的主要课程,为了适应行业要求,也为了培养能够解决实际问题的学生,探讨《动物传染病学》教学方法可以提高其教学效果。启发式教学、直观教学法、开放实验室教学法等多种教学方法的使用,可以丰富教学... 《动物传染病学》是农业院校动物医学的主要课程,为了适应行业要求,也为了培养能够解决实际问题的学生,探讨《动物传染病学》教学方法可以提高其教学效果。启发式教学、直观教学法、开放实验室教学法等多种教学方法的使用,可以丰富教学内容;多媒体、教学录像、答疑邮箱等现代教育技术教学方法,可以使原本枯燥的书本知识变得形象生动,易于学生接受。青年教师应该思考《动物传染病学》新的教学方法,接受考验,充分调动和激发学生的学习兴趣和积极性,从而提高教学水平和质量。 展开更多
关键词 动物传染病学 教学方法 教学改革 教学思考
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北朝赵郡李氏的迁徙分布及其与李唐先世之关系 被引量:10
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作者 高诗敏 《河北学刊》 CSSCI 北大核心 1996年第1期86-90,共5页
北朝赵郡李氏的迁徙分布及其与李唐先世之关系高诗敏赵郡李氏是南北朝时期著名的士族,随着时间的推移,这一宗族由于政治、经济等原因,不断以赵郡平棘为基地,向周边各地迁徙,从而促进了徙居地区经济、文化的发展;同时,对其分布地... 北朝赵郡李氏的迁徙分布及其与李唐先世之关系高诗敏赵郡李氏是南北朝时期著名的士族,随着时间的推移,这一宗族由于政治、经济等原因,不断以赵郡平棘为基地,向周边各地迁徙,从而促进了徙居地区经济、文化的发展;同时,对其分布地域的考察,也有助于对它与李唐关系进... 展开更多
关键词 李唐 关系 北朝 赵郡李氏 迁徙分布
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有关北朝博陵崔氏的几个问题 被引量:5
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作者 高诗敏 《首都师范大学学报(社会科学版)》 1998年第5期77-83,共7页
在北朝以前,博陵崔氏的社会地位与清河崔氏基本相埒。及至北朝,从人物业绩、官品、爵位和担任中正的概况等多种角度审视,其政治、社会地位已逊于清河崔氏。在婚姻关系方面,北朝博陵崔氏的国婚率虽不高,但存在异辈婚。它同汉士族的... 在北朝以前,博陵崔氏的社会地位与清河崔氏基本相埒。及至北朝,从人物业绩、官品、爵位和担任中正的概况等多种角度审视,其政治、社会地位已逊于清河崔氏。在婚姻关系方面,北朝博陵崔氏的国婚率虽不高,但存在异辈婚。它同汉士族的婚媾高居首位,特别是与赵郡李氏联姻独多,其中并未发现异辈婚现象。北朝时,博陵崔氏有两支徙居太行山麓,崔昂房支约在北魏与东魏之交举族迁至今河北平山县; 展开更多
关键词 北朝 六镇鲜卑 中正 异辈婚
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北朝范阳卢氏形成冠冕之首的诸因素 被引量:4
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作者 高诗敏 《首都师范大学学报(社会科学版)》 1997年第2期24-28,共5页
北朝范阳卢氏形成为冠冕之首,仕宦显达是必备的条件之一,但它并未起关键作用。本文认为范阳卢氏的婚姻举措是构成其冠冕之首的主要因素。当魏孝文帝改革后,范阳卢氏与皇室通婚高居首位,对提高其政治和社会地位至关重要。同时,与汉族名... 北朝范阳卢氏形成为冠冕之首,仕宦显达是必备的条件之一,但它并未起关键作用。本文认为范阳卢氏的婚姻举措是构成其冠冕之首的主要因素。当魏孝文帝改革后,范阳卢氏与皇室通婚高居首位,对提高其政治和社会地位至关重要。同时,与汉族名门联姻,亦有利于门望的提高。范阳卢氏累世以儒学作为“家学”,尤精于三礼。它利用文化上的优势,对文化发展作出了贡献,亦是构成冠冕之首的重要因素。 展开更多
关键词 郡姓 勋臣 国婚 三礼
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北朝清河崔氏的曲折发展及其特征 被引量:2
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作者 高诗敏 《首都师范大学学报(社会科学版)》 2000年第2期12-18,共7页
清河崔氏兴起于魏晋 ,到北魏前期已臻鼎盛。崔浩被诛使显赫房支惨遭重创 ,一蹶不振 ,家族重心逐渐转移至徙居青齐地区的房支。北魏后期 ,崔光、崔亮以其“家学”与身世 ,适应了魏孝文帝改革的需求 ,仕途腾达 ,致使家族重新兴旺起来。北... 清河崔氏兴起于魏晋 ,到北魏前期已臻鼎盛。崔浩被诛使显赫房支惨遭重创 ,一蹶不振 ,家族重心逐渐转移至徙居青齐地区的房支。北魏后期 ,崔光、崔亮以其“家学”与身世 ,适应了魏孝文帝改革的需求 ,仕途腾达 ,致使家族重新兴旺起来。北朝时清河崔氏尚有部分成员仕于江南宋、齐、梁三朝 ,时间跨度大 ,人员众多 ,为北方其他士族所罕有。清河崔氏在婚姻关系方面亦有别于其他北方士族 ,地缘婚比较突出。 展开更多
关键词 北朝 清河崔氏 家学 婚姻关系 土族 地缘婚
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鸭源、鸡源NDV对DF-1细胞的致病性特征 被引量:1
8
作者 高诗敏 马海利 +4 位作者 邓瑞林 化丽珍 闫芳 田文霞 高文伟 《农业科技与信息》 2016年第6期128-129,共2页
新城疫(ND)是由新城疫病毒(NDV)引起多种家禽发病的急性高度接触性疾病、为了研究鸡源和鸭源NDV体外致病特点,本研究选取鸡源GM和鸭源YC两株强毒接种于DF-1细胞,通过测定TCID50、细胞病变的程度及最大病变时细胞上清液的浓度,结... 新城疫(ND)是由新城疫病毒(NDV)引起多种家禽发病的急性高度接触性疾病、为了研究鸡源和鸭源NDV体外致病特点,本研究选取鸡源GM和鸭源YC两株强毒接种于DF-1细胞,通过测定TCID50、细胞病变的程度及最大病变时细胞上清液的浓度,结果显示鸡源NDV—GM株最早于22h检测到HA阳性,先于鸭源NDV-YC株2个小时,2株病毒接种后70h左右HA均达到峰值,其中NDV-GM株HA峰值为5log2,低于NDV-YC株6log2,实验表明鸭源病毒对鸡源细胞有致病性,为研究鸭源病毒体外致病性差异研究奠定基础. 展开更多
关键词 鸡源NDV 鸭源NDV DF-1细胞 致病性
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十六国北朝时期渤海封氏的变迁 被引量:3
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作者 高诗敏 《大同高等专科学校学报》 2000年第3期17-20,24,共5页
渤海封氏是十六国北朝时期北方的名门望族,与同时期北方士族相比,有自己家族鲜明的特点。研究封氏家族的变迁,对研究北朝历史大有裨益。
关键词 渤海封氏 变迁
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2株山西IBV分离株的生物学特性研究
10
作者 高诗敏 邓瑞林 +4 位作者 闫芳 马海利 化丽珍 田文霞 高文伟 《山西农业大学学报(自然科学版)》 CAS 2016年第7期472-476,共5页
[目的]控制地方鸡传染性支气管炎病的流行。[方法]通过IBV-21、IBV-22半数感染量(EID50)试验,鸡胚矮小化试验,干扰NDV LaSota复制试验,鸡胚气管环试验测定2毒株生物学特性。[结果]试验结果显示IBV-21的EID50为5×10-4.616·mL-1... [目的]控制地方鸡传染性支气管炎病的流行。[方法]通过IBV-21、IBV-22半数感染量(EID50)试验,鸡胚矮小化试验,干扰NDV LaSota复制试验,鸡胚气管环试验测定2毒株生物学特性。[结果]试验结果显示IBV-21的EID50为5×10-4.616·mL-1、IBV-22为5×10-6.5·mL-1;接毒胚明显病变,2株毒对鸡胚均有矮小化作用,对NDV LaSota有明显干扰,对鸡胚气管环试验病变明显,RT-PCR的方法扩增2分离株的S1基因的特异条带大小约为293bp。[结论]该生物学特性显示分离的2株病毒对鸡胚有明显致病作用且2毒株不是现存疫苗毒,为地方IBV疫苗研发奠定基础。 展开更多
关键词 IBV 生物学特性 RT-PCR 分离鉴定
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鸭源NDV103的生物学特性研究
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作者 高诗敏 马海利 +4 位作者 邓瑞林 化丽珍 闫芳 田文霞 高文伟 《甘肃畜牧兽医》 2016年第2期7-7,15,共2页
鸭源新城疫(Duck Newcastle disease)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起的一种高度接触性、急性传染病。为了对鸭源新城疫病毒进行生物学特性研究,本文选取鸭源NDV103测定其鸡胚半数感染量(EID50),脑内致病指数... 鸭源新城疫(Duck Newcastle disease)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起的一种高度接触性、急性传染病。为了对鸭源新城疫病毒进行生物学特性研究,本文选取鸭源NDV103测定其鸡胚半数感染量(EID50),脑内致病指数(ICPI),静脉致病指数(IVPI),鸡胚最小致死量平均死亡时间(MDT),分别对30只7日龄SPF鸡和30日龄SPF鸡进行攻毒实验,结果显示EID50为10-8.42/0.2 ml,MDT为58.5 h,ICPI为1.92,IVPI为1.77,该毒株对SPF鸡均有100%致死率,实验表明该毒株为强毒,且鸭源NDV对SPF鸡有致死性。 展开更多
关键词 SPF鸡 生物学特性 致病性
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鸡源大肠杆菌耐药性分析及中药对大肠杆菌耐药性消除作用的研究 被引量:57
12
作者 宁官保 牛艺儒 +11 位作者 张鼎 李宏全 马海利 高荣琨 郝卫芳 高文伟 赵宇军 高诗敏 李桂兰 李建慧 闫芳 田文霞 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期1018-1025,共8页
研究鸡源大肠杆菌耐药性及中药对大肠杆菌耐药性消除作用。选择22种抗生素采用Kirby-Bauer法对山西省部分地区分离的20株致病性鸡源大肠杆菌进行耐药性检测,对分离菌株进行质粒分析和耐药质粒转化试验,并分析多种中药对大肠杆菌耐药性... 研究鸡源大肠杆菌耐药性及中药对大肠杆菌耐药性消除作用。选择22种抗生素采用Kirby-Bauer法对山西省部分地区分离的20株致病性鸡源大肠杆菌进行耐药性检测,对分离菌株进行质粒分析和耐药质粒转化试验,并分析多种中药对大肠杆菌耐药性的消除作用。结果显示,20株试验菌对测试抗生素均存在不同程度的耐药性,其中5耐及5耐以上的菌株占分离菌株的90%,试验菌对青霉素耐药率最高(90%),其次为恩诺沙星(85%),而对黏杆菌素和呋喃妥因的耐药性最低;分离出12种质粒谱型,同一地区、同一鸡场菌株的质粒图谱相同或相似,不同地区菌株的质粒图谱不同,仅有部分相同或相近的流行质粒共存;对其中5株菌株进行耐药质粒的转化试验,发现同一质粒可编码1个至数个耐药性基因,不同质粒可以携带相同的耐药性基因;中药单剂或合剂对大肠杆菌的耐药性有一定的消除作用,其中黄芩的消除效果最好,中药处理后部分菌株质粒图谱无变化,只有黄连和双黄连造成2条质粒带丢失;对中药提取物作用后的消除子进行药敏试验,结果发现大肠杆菌对环丙沙星等多种抗生素恢复了敏感性。研究结果提示联合使用中药治疗鸡源大肠杆菌病有显著效果。 展开更多
关键词 大肠杆菌 耐药 质粒 中药
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福美双诱导的肉鸡胫骨软骨发育不良软骨细胞凋亡 被引量:9
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作者 张宁 李欣 +13 位作者 宁官保 张鼎 Ali Raza Jahejo 李宏全 马海利 郝卫芳 高文伟 赵宇军 高诗敏 李桂兰 李建慧 闫芳 高荣琨 田文霞 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期2421-2428,共8页
为研究肉鸡胫骨软骨发育不良(TD)软骨细胞的凋亡分布及凋亡相关基因的表达水平,将80羽1日龄健康AA肉鸡基础日粮饲养1周后,随机分为对照组和处理组,处理组饲喂添加100mg·kg-1福美双的日粮,采用HE染色和TUNEL法分别对肉鸡胫骨生长板... 为研究肉鸡胫骨软骨发育不良(TD)软骨细胞的凋亡分布及凋亡相关基因的表达水平,将80羽1日龄健康AA肉鸡基础日粮饲养1周后,随机分为对照组和处理组,处理组饲喂添加100mg·kg-1福美双的日粮,采用HE染色和TUNEL法分别对肉鸡胫骨生长板软骨细胞的形态学和凋亡情况进行观察,同时采用Real-time PCR方法和免疫组化技术分别对软骨细胞中凋亡相关基因的mRNA转录水平及蛋白质表达水平进行检测。结果显示,福美双诱发TD后第1、2、4和6天,肉鸡生长板软骨栓形成逐渐增大,异常软骨细胞增加,TD病变区软骨细胞,尤其是肥大区软骨细胞凋亡程度明显增加。Real-time PCR检测结果显示,与对照组比较,TD生长板促凋亡基因Bax在试验第1、2、4和6天表达量极显著上调(P<0.01);Caspase-3在第1、2和4天表达量极显著增加(P<0.01);抗凋亡基因BAG-1表达下调,在试验第1和2天差异极显著(P<0.01)。免疫组化结果显示,第1和4天处理组Bax的蛋白表达量明显高于对照组。本研究提示肉鸡TD生长板软骨细胞凋亡与促凋亡基因的表达增强和抗凋亡基因的表达下降有关。 展开更多
关键词 福美双 胫骨软骨发育不良 软骨细胞 细胞凋亡 肉鸡
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鸡毒支原体胶体金免疫层析试纸条的研制和初步应用 被引量:5
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作者 宁官保 刘国莉 +11 位作者 张鼎 李宏全 马海利 高荣琨 郝卫芳 高文伟 赵宇军 高诗敏 李建慧 李桂兰 闫芳 田文霞 《动物医学进展》 北大核心 2015年第5期25-28,共4页
为研制一种用于快速检测鸡毒支原体(MG)的胶体金免疫层析试纸条,采用直径20nm的胶体金颗粒标记纯化的MG多克隆抗体,硝酸纤维素膜检测线和质检线分别喷加纯化的MG多克隆抗体和兔抗鸡IgG抗体,制作胶体金试纸条。试纸条检测MG阳性显示两条... 为研制一种用于快速检测鸡毒支原体(MG)的胶体金免疫层析试纸条,采用直径20nm的胶体金颗粒标记纯化的MG多克隆抗体,硝酸纤维素膜检测线和质检线分别喷加纯化的MG多克隆抗体和兔抗鸡IgG抗体,制作胶体金试纸条。试纸条检测MG阳性显示两条红色反应条带;阴性为一条红色反应带。本试纸条可检测到1∶1 280倍稀释的MG抗原,即颜色变化单位为8×104 CCU/mL,具有高度的灵敏性。用试纸条检测衣原体、滑液支原体、猪肺炎支原体、鸡大肠埃希菌和鸡白痢沙门菌等均呈阴性,表明该试纸条具有较好的特异性。对试纸条检测呈MG阳性的38只病鸡进行MG培养验证,所得结果一致;同时对MG培养检测的另外95份病鸡样品进行试纸条测试比对,符合率为96.84%,证明该试纸条具有很高的准确性。该胶体金免疫层析试纸条检测MG操作简单,灵敏度、准确度、特异性等均符合要求,可以用于养殖场批量MG的检测。 展开更多
关键词 鸡毒支原体 胶体金 免疫层析 试纸条
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一株鸽源新城疫病毒的分离鉴定 被引量:4
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作者 蔡绍鑫 焦培荣 +7 位作者 高诗敏 何琴 刘大伟 薛国聪 张桂红 辛朝安 廖明 任涛 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第5期23-25,共3页
从广东发病鸽群中采集的拭子样本中分离到1株新城疫病毒,用聚合酶链反应(PCR)、血凝抑制试验(HI)及基因测序等对其进行鉴定。结果表明,此分离株具有血凝活性,且可与新城疫病毒标准阳性血清发生特异性抑制反应;用针对新城疫病毒的F基因及... 从广东发病鸽群中采集的拭子样本中分离到1株新城疫病毒,用聚合酶链反应(PCR)、血凝抑制试验(HI)及基因测序等对其进行鉴定。结果表明,此分离株具有血凝活性,且可与新城疫病毒标准阳性血清发生特异性抑制反应;用针对新城疫病毒的F基因及P基因特异性鉴定引物对该分离株进行PCR扩增,可扩增出特异性目的片段;测序及BLAST分析表明,其与美国新城疫病毒分离株Pigeon/US(TX)/98的F基因核苷酸序列相似性高达97%以上。毒株被鉴定为鸽源新城疫病毒,并命名为Pigeon/Guangdong/ZQ-17。 展开更多
关键词 新城疫病毒 分离鉴定
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1株鸭源新城疫病毒的分离鉴定及生物学特性研究 被引量:3
16
作者 刘大伟 焦培荣 +5 位作者 黎先伟 何琴 高诗敏 漆丹丹 陈德成 任涛 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第5期143-145,共3页
从广东地区发病鸭中分离到1株新城疫病毒,血凝试验、血凝抑制试验结果表明此分离株具有血凝活性,且这种血凝性可被NDV标准阳性血清抑制,而不能被AIV-H5、AIV-H7、AIV-H9、EDSV阳性血清抑制;用针对NDVF基因特异性鉴定引物对该分离株进行... 从广东地区发病鸭中分离到1株新城疫病毒,血凝试验、血凝抑制试验结果表明此分离株具有血凝活性,且这种血凝性可被NDV标准阳性血清抑制,而不能被AIV-H5、AIV-H7、AIV-H9、EDSV阳性血清抑制;用针对NDVF基因特异性鉴定引物对该分离株进行聚合酶链反应扩增,可扩增出相应的目的片段。由此,初步鉴定该分离株为鸭源新城疫病毒,并命名为NDV/DUCK/SD/2006。另外,通过毒力测定,该毒株的MDT、IVPI分别为51.75 h、2.44,判定为强毒力株。 展开更多
关键词 新城疫病毒 广东 生物学特性
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一起鸡棘沟赖利绦虫病的诊断 被引量:2
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作者 张鼎 刘晶英 +6 位作者 宁官保 高文伟 马海利 闫芳 赵宇军 高诗敏 田文霞 《动物医学进展》 北大核心 2017年第9期133-136,共4页
从临床症状、组织病理学变化、病原形态学鉴定等方面对一起鸡棘沟赖利绦虫病进行诊断。结果表明,病鸡生长缓慢,消化道增粗、肿大,肠内充满大量黄褐色液体。十二指肠有凸起的白色结节和散在出血斑,HE染色显示肠黏膜层脱落并伴有大量红细... 从临床症状、组织病理学变化、病原形态学鉴定等方面对一起鸡棘沟赖利绦虫病进行诊断。结果表明,病鸡生长缓慢,消化道增粗、肿大,肠内充满大量黄褐色液体。十二指肠有凸起的白色结节和散在出血斑,HE染色显示肠黏膜层脱落并伴有大量红细胞浸润。病鸡十二指肠、空肠和回肠发现大量绦虫虫体,体长5cm^10cm,头节四周有4个圆形吸盘,中央有1个突起的顶突,顶突上分布有两圈小钩。颈节节片生殖系统未发育成熟,染色不明显。成节节片有一组生殖系统,生殖孔交替开口于节片外缘上1/3处。雄茎囊位于排泄孔外侧,睾丸数目30个~40个。孕节子宫退化,被大量卵囊所取代,散在分布于节片中,每个卵囊内有1个已胚化的六钩蚴。综合以上结果判定病鸡所患寄生虫病为棘沟赖利绦虫病。 展开更多
关键词 肉鸡 绦虫 病理学变化 病原体形态
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新城疫病毒V和W基因在DF-1细胞中的真核表达
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作者 汪招雄 康银峰 +3 位作者 孙敏华 高诗敏 谢鹏 任涛 《长江大学学报(自科版)(中旬)》 CAS 2013年第8期37-41,7,共5页
采用2轮PCR扩增获得新城疫病毒疫苗株LaSota和强毒株GM V和W基因全长,分别克隆到pMD19-T载体上,然后亚克隆到真核表达载体pEGFP-N1,重组质粒经过酶切,PCR鉴定及测序,筛选出阳性重组质粒,分别命名为pEGFP-La V、pEGFP-La W、pEGFP-GM V和... 采用2轮PCR扩增获得新城疫病毒疫苗株LaSota和强毒株GM V和W基因全长,分别克隆到pMD19-T载体上,然后亚克隆到真核表达载体pEGFP-N1,重组质粒经过酶切,PCR鉴定及测序,筛选出阳性重组质粒,分别命名为pEGFP-La V、pEGFP-La W、pEGFP-GM V和pEGFP-GM W。将各重组质粒分别转染到DF-1细胞,于转染后12、24h和36h在荧光倒置显微镜下观察绿色荧光蛋白GFP在细胞中的表达情况。结果显示,各质粒转染DF-1细胞后在12h就可以见到绿色荧光蛋白,随着时间的延长,绿色荧光蛋白荧光强度增加,到36h后达到最强,而对照组始终没有见到GFP蛋白的表达,表明在转染的阳性细胞中融合蛋白pEGFP-La V、pEGFP-La W、pEGFP-GM V和pEGFP-GM W均能够有效的表达,该结果为新城疫病毒V和W基因的功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 新城疫病毒 V基因 W基因 鸡胚成纤维细胞 表达
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新城疫病毒V和W基因真核表达产物对DF-1细胞凋亡的影响
19
作者 汪招雄 康银峰 +3 位作者 孙敏华 高诗敏 谢鹏 任涛 《长江大学学报(自科版)(中旬)》 CAS 2014年第8期38-41,6-7,共4页
将含新城疫病毒(NDV)疫苗株LaSota和强毒株GM V和W基因的真核表达质粒pEGFP-La V、pEGFP-La W、pEGFP-GM V和pEGFP-GM W转染鸡胚成纤维细胞(DF-1)。转染24h后,用荧光显微镜观察到绿色荧光蛋白GFP在细胞中显著表达。分别于转染后24... 将含新城疫病毒(NDV)疫苗株LaSota和强毒株GM V和W基因的真核表达质粒pEGFP-La V、pEGFP-La W、pEGFP-GM V和pEGFP-GM W转染鸡胚成纤维细胞(DF-1)。转染24h后,用荧光显微镜观察到绿色荧光蛋白GFP在细胞中显著表达。分别于转染后24、36h和48h用流式细胞仪测定表达产物对DF-1细胞凋亡的影响。结果表明,随着转染时间的增加,细胞早期凋亡率逐渐上升。在质粒转染后24h , pEGFP-GM V、pEGFP-GM W、pEGFP-La V和pEGFP-La W真核表达产物诱导DF-1细胞的凋亡率在14 T.26%~17.09%之间,差异不大,但都明显高于空载体组。而在质粒转染后36h ,pEGFP-GM V、pEGFP-GM W真核表达产物诱导细胞凋亡率分别为45.05%和43.4%,明显高于pEGFP-La V 和pEG-FP-La W诱导的31.44%和38.64%的凋亡率。在质粒转染后48h ,pEGFP-GM W和pEGFP-La W真核表达产物诱导细胞凋亡率均超过50%, pEGFP-GM W 真核表达产物诱导细胞凋亡率达到了43.4%,而pEGFP-La V真核表达产物诱导细胞凋亡率最低,为33.44%。由此表明,来源于不同毒力 NDV毒株非结构蛋白V和W均能诱导早期细胞凋亡,但是诱导细胞凋亡能力存在一定的差异。 展开更多
关键词 新城疫病毒 V基因 W基因 真核表达 细胞凋亡
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重组鸡GSTA3蛋白对福美双诱导胫骨软骨发育不良肉鸡红细胞免疫相关基因转录的影响 被引量:1
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作者 贾发杰 牛胜 +14 位作者 张宁 李欣 宁官保 张鼎 李宏全 马海利 郝卫芳 高文伟 赵宇军 高诗敏 李桂兰 李建慧 闫芳 高荣琨 田文霞 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期811-817,共7页
为研究胫骨软骨发育不良(TD)肉鸡红细胞免疫相关基因转录水平的变化及重组鸡谷胱甘肽S-转移酶A3(chGSTA3)蛋白对TD肉鸡红细胞免疫相关基因转录的影响,将120只肉雏鸡饲喂一周后,随机分为基础日粮组(A、B、C组)和福美双处理组(D、E、F组)... 为研究胫骨软骨发育不良(TD)肉鸡红细胞免疫相关基因转录水平的变化及重组鸡谷胱甘肽S-转移酶A3(chGSTA3)蛋白对TD肉鸡红细胞免疫相关基因转录的影响,将120只肉雏鸡饲喂一周后,随机分为基础日粮组(A、B、C组)和福美双处理组(D、E、F组),对福美双处理组肉鸡通过饲料中添加100mg·kg^(-1)福美双诱发建立肉鸡TD模型,通过腿部肌肉注射法,对B组和E组肉雏鸡注射有活性的低剂量(20μg·kg^(-1))重组GSTA3蛋白,对C组和F组肉雏鸡注射高剂量(50μg·kg^(-1))重组GSTA3蛋白,对A和D组的肉雏鸡注射等体积的磷酸盐缓冲液(PBS);使用Real-time PCR对肉鸡红细胞中免疫基因的信使RNA(mRNA)转录水平进行检测。结果显示,Toll样受体(TLR)2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR7、TLR15、髓样分化因子88(MyD88)、主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ、核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族中的C5型受体(NLRC5)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)、白细胞介素-7(IL-7)基因可以在鸡红细胞转录;福美双处理组D与磷酸缓冲盐溶液(PBS)处理组A相对比,TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR7、TLR15、MyD88、TRAF6、MHCⅡ和NLRC5在试验的第4天显著升高,IL-7显著降低(P<0.05),在试验的第15天TD肉鸡红细胞中TLR2、TLR4、MyD88和NLRC5显著下调(P<0.05),IL-7、TLR3、TLR5、TLR7、TLR15、MHCⅡ、TRAF6变化不明显(P>0.05);E组和F组与D组相比,在试验第4天,除E组TLR4、TLR5和MyD88外,其余基因都有显著性变化(P<0.05);在第15天,E组中TLR4、TLR5、MyD88和NLRC5,及F组中TLR3、TLR5、MyD88、TRAF6和IL-7变化不显著,其他基因都有显著性差异(P<0.05)。鸡红细胞可能通过免疫相关基因TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR7、TLR15、IL-7、MyD88、TRAF6、MHCⅡ和NLRC5转录水平的变化,在早期诱导TD发生,后期减轻肉鸡TD症状;GSTA3能够对福美双诱导肉鸡TD的作用产生影响。 展开更多
关键词 福美双 胫骨软骨发育不良 红细胞 chGSTA3 TLRS
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