SF3B1敲减通过RAS等信号通路影响MDAMB-231乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡

目的:检测剪接因子3B亚基1(SF3B1)基因敲减对人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡等生物学行为的影响,并初步探讨其作用机制。方法:将SF3B1基因RNA干扰慢病毒载体(LV-SF3B1-RNAi)转染MDA-MB-231细胞,以敲减SF3B1基因。实验分为阴性对照组(转染空载体)和SF3B1敲减组(转染SF3B1-shRNA-1和SF3B1-shRNA-2)。采用qPCR和Western blot检测SF3B1的敲减效率;分别用MTT法和集落形成实验检测SF3B1敲减对细胞生长及集落形成能力的影响;Transwell小室法测定SF3B1敲减对细胞侵袭和迁移能力的影响;annexin V-APC单染法结合流式细胞术检测SF3B1敲减对细胞凋亡的影响;采用转录组测序检测SF3B1敲减后的差异表达基因及富集的信号通路。结果:MTT结果显示,SF3B1敲减组MDA-MB-231细胞的A值在96和120 h均显著低于阴性对照组(P<0.01);SF3B1敲减组的集落形成数显著低于阴性对照组(P<0.01),凋亡率显著高于阴性对照组(P<0.01),侵袭和迁移细胞数均显著低于阴性对照组(P<0.01);SF3B1敲减后差异表达基因富集的信号通路包括RAS信号通路、紧密连接、MAPK信号通路等。结论:在MDA-MB-231乳腺癌细胞中敲减SF3B1可能通过RAS等信号通路的异常抑制细胞增殖、迁移和侵袭能力,促进细胞凋亡。

TSTA3在食管鳞癌中的表达及作用

目的:探讨TSTA3在食管鳞状细胞癌(简称"鳞瘤")中的表达,并研究TSTA3对人食管鳞瘤细胞系KYSE150和KYSE450增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法:免疫组化检测45例食管鳞瘤组织和癌旁组织中TSTA3蛋白的表达情况。通过qPCR检测食管鳞瘤细胞系中TSTA3的mRNA表达。慢病毒感染KYSE150和KYSE450细胞使之过表达TSTA3。通过MTT和集落形成实验检测TSTA3对食管鳞瘤细胞活力和集落形成能力的影响;Transwell法检测TSTA3对食管鳞瘤细胞迁移和侵袭能力的影响;流式细胞术检测TSTA3对食管鳞瘤细胞核心岩藻糖基化修饰的影响。结果:食管鳞瘤组织中TSTA3的表达显著高于癌旁组织(P<0.01)。TSTA3过表达对食管鳞瘤细胞的增殖无影响(P>0.05),但可以增强食管鳞瘤细胞的迁移和侵袭能力(P<0.01),且TSTA3过表达可以提高食管鳞瘤细胞的核心岩藻糖基化修饰水平(P<0.01)。结论:TSTA3可能通过调节岩藻糖基化修饰在食管鳞瘤中发挥促侵袭和迁移的作用。TSTA3可能成为食管鳞瘤治疗的新靶点。

PLCH1基因在食管鳞状细胞癌中的表达及其对细胞增殖、迁移的影响

目的检测PLCH1基因在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)中的变异及表达情况,分析PLCH1在食管癌中的功能,并初步探讨其作用机制。方法利用GISTIC分析PLCH1在ESCC中的拷贝数变异情况,TCGA数据库及免疫组织化学法检测PLCH1在ESCC与正常食管组织中的表达情况。通过实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blot检测ESCC细胞系中PLCH1的表达情况。采用MTT、克隆形成试验、Transwell法等检测PLCH1沉默对ESCC细胞增殖及迁移能力的影响。结果PLCH1在ESCC中存在显著的拷贝数扩增(G-scores>0.1,P<0.05),ESCC中PLCH1 mRNA及蛋白表达水平均显著高于正常组织(F=36.00~1101.00,P均<0.0001)。PLCH1沉默后,ESCC细胞KYESE180和TE-9的增殖能力、克隆形成能力及迁移能力均显著降低(F=35.49~634.00,P均<0.001)。结论PLCH1在ESCC中发挥癌基因作用,对ESCC的转移和增殖具有重要意义,可作为ESCC治疗的潜在靶点。