流行性乙型脑炎高免阳性血清的制备与应用

为满足乙型脑炎活疫苗的鉴别检验及外源病毒检验需求,以乙型脑炎活疫苗和灭活疫苗为免疫原,通过对SPF鸡进行反复免疫制备乙型脑炎特异性血清。当血清效价满足要求时,以心脏采血法采集血清,经分装、冻干后,开展纯净性检验、噬斑减少中和效价测定、特异性检验、剩余水分测定和均匀性检验,并对乙型脑炎活疫苗进行鉴别检验和外源病毒检验。结果显示:制备的乙型脑炎阳性血清无菌、支原体及外源病毒检验结果均为阴性,与口蹄疫病毒、猪圆环病毒、伪狂犬病病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪细小病毒和牛病毒性腹泻病毒等均无交叉反应,噬斑减少中和效价大于1:1 000,剩余水分<3%,且10个样品的效价测定结果组内、组间均无明显差异(P<0.05)。结果表明,制备的乙型脑炎阳性血清效价高,剩余水分少,纯净性、特异性、均匀性均良好,可满足乙型脑炎活疫苗的检验需求。

猪轮状病毒阳性血清(G5型)制备及初步鉴定

采用常见猪病毒抗体阴性仔猪制备了猪轮状病毒G5型阳性血清,经冻干鉴定,其性状、无菌检验、特异性检验、剩余水分测定、真空度测定结果均符合要求,效价高达1∶11482,为我国猪轮状病毒活疫苗或其联苗成分的外源病毒检验、鉴别检验提供阳性血清,以满足疫苗检验需求。

细胞源猪瘟活疫苗E2基因遗传稳定性和免疫原性分析

测定了中国4个细胞源猪瘟活疫苗(C株)E2基因全序列,将其与GenBank上13个猪瘟病毒的E2基因序列(含C株原始毒株、7个猪瘟病毒C株以及国际上5个主要猪瘟活疫苗毒株的E2基因全序列)进行了核苷酸序列、推导的氨基酸序列进行遗传变异分析,通过生物信息学手段对预测的E2蛋白N-糖基化位点、E2蛋白磷酸化位点和理化特性以及模拟的蛋白空间结构进行了比较,并通过免疫攻毒试验对4个细胞源猪瘟疫苗(C株)的免疫效果进行了验证。结果表明,与猪瘟病毒C株原始种毒相比,尽管中国4个细胞源猪瘟活疫苗的E2基因核苷酸序列、推导的E2蛋白氨基酸序列或模拟的三维结构等发生个别核苷酸变异、个别氨基酸位点突变或缺失,但均不影响猪瘟C株的免疫原性,猪瘟疫苗C株仍然是防控猪瘟的最有效武器。

2株牛病毒性腹泻病毒的分离鉴定

牛病毒性腹泻是目前危害我国养牛业发展的重要传染病之一,在我国多个省、自治区、直辖市均有流行。对2头疑似感染牛病毒性腹泻病毒的牛血清样本进行检测、分离病原,并根据E2基因序列确定分离株的基因亚型。将2份血清样本经RT-PCR检测为阳性后,接种MDBK细胞,通过连续传代培养并进行间接免疫荧光测定,成功分离到2株非致细胞病变型(NCP)BVDV分离毒株,分别命名为HN和XJ-2。对2个毒株的E2基因进行克隆及序列测定,并与NCBI上登录的BVDV参考毒株E2基因序列进行同源性比较和遗传进化分析。结果表明,XJ-2株、HN株与BVDV1b亚型JL^(-1)株处于同一分支,核苷酸同源性分别为99.4%和99.3%,均属于BVDV1b亚型。对新疆、河南两地XJ-2和HN株的分离鉴定,可为我国BVDV的分子流行病学研究和防控提供数据参考。

小反刍兽疫病毒感染性cDNA克隆的构建与病毒拯救

小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)是影响全球畜牧业的一种重要病原。本研究旨在建立稳定可靠的PPRV反向遗传操作平台,为解析PPRV致病机理、免疫逃逸机制、病毒复制机制等基础理论研究提供有效的技术平台,同时为开发更加安全、有效的新型疫苗奠定必要的前期基础。通过提取PPRV Clone9株的RNA,采用RT-PCR分6段扩增出PPRV反基因组cDNA,通过酶切、连接出PPRV Clone9株全长反基因组,获得pB-PPRV,同时构建表达PPRV核蛋白(nucleoprotein,N)、磷蛋白(phosphoprotein,P)和大蛋白(large protein,L)的3个辅助质粒。将pB-PPRV与辅助质粒通过脂质体转染BHK-T7细胞。转染3 d后,冻融3次,感染Vero细胞。传至第二代可观察到明显的细胞病变(CPE)。经间接免疫荧光、Western blot、RT-PCR和序列测定鉴定结果表明,拯救出具有感染性的病毒。拯救病毒(rPPRV-Clone9)在Vero细胞上可稳定传代,增殖动态与亲本病毒相似。本研究成功建立了PPRV Clone9株的反向遗传系统。

猪瘟活疫苗(脾淋源)污染外源性兔出血症病毒的检测与启示

在进行2批猪瘟活疫苗(脾淋源)效力检验时,出现效力检验家兔突然死亡现象,为了查明家兔死亡原因,采用无菌检验、支原体检验、血凝试验、兔体中和试验、酶联免疫吸附试验(ELISA)对疫苗或注苗后死亡家兔肝脏、脾脏混合病料进行了检测。结果显示,疫苗的无菌检验、支原体检验结果均为阴性;疫苗及注射疫苗死亡家兔肝脏、脾脏混合病料具有较低的血凝价,血凝试验结果均为可疑;在兔体中和试验中,中和组家兔2/2健康存活,未中和的疫苗对照组家兔2/2死亡;疫苗及注射疫苗死亡后家兔肝脏、脾脏混合病料的ELISA检测结果均为阳性。检测结果证实疫苗中含有兔出血症病毒(Rabbit Haemorrhagic Disease Virus,RHDV)。猪瘟活疫苗(脾淋源)污染RHDV的现象启示:应该加强猪瘟活疫苗(脾淋源)抗原制备过程的控制;同时有必要对猪瘟活疫苗(脾淋源)质量标准进行修订使之进一步补充完善。

兔出血症病毒两种感染途径的致死性比较研究

为提高猪瘟活疫苗的外源性兔出血症病毒(RHDV)的检测敏感性,进行了RHDV对家兔感染途径的致死性比较试验,以便筛选出具有较高致死性的感染途径。将RHDV通过皮下、静脉两种途径感染家兔,比较了家兔两种感染途径的半数致死量(LD_(50)),同时对1批污染RHDV的脾淋源猪瘟活疫苗采用皮下、静脉两种途径注射家兔进行RHDV检测。结果表明,静脉途径对家兔的LD_(50)是皮下途径的126倍;污染疫苗的检测应用也表明家兔感染的静脉途径比皮下途径更加敏感,提高了猪瘟活疫苗外源性RHDV污染的检出率;RT-PCR证实了注苗死亡家兔的肝脏组织含有RHDV。本试验可为《中国兽药典》的修订提供数据参考。

猪瘟抗体阴性猪筛选方法的比较

评价ELISA法用于筛选猪瘟抗体阴性猪的可行性,分别采用两种商品化猪瘟抗体ELISA检测试剂盒检测了61份猪血清样品,并与兔体中和试验方法进行了比较。兔体中和试验法检测出4份阳性、2份可疑、55份阴性,而两种ELISA试剂盒均检测出6份阳性、55份阴性;两种ELISA方法与兔体中和试验检测结果阴性符合率均为100%(55/55)。结果表明,ELISA法更加敏感,可以替代兔体中和试验方法用于筛选猪瘟抗体阴性猪。

兔病毒性出血症灭活疫苗效力检验替代方法研究

为了采用血凝抑制(HI)试验方法替代兔病毒性出血症灭活疫苗效力检验的免疫攻毒方法,试验在制备了HI试验用兔出血症病毒血凝(HA)抗原、阳性血清、阴性血清的基础上,研究了免疫攻毒保护与免疫血清HI效价之间的平行关系,并进行了替代方法的应用。结果表明,当免疫血清HI效价不低于1∶32时,两种方法的检验结果符合率为100%,证明了该替代方法的可行性,也为下一步修订兔病毒性出血症灭活疫苗效力检验方法提供了数据支持。

达康灭毒灵对猪瘟病毒的杀灭试验

采用直接荧光法进行了达康灭毒灵对猪瘟病毒的杀灭效果试验。分别将有效氯浓度为100mg/L和50mg/L的达康灭毒灵消毒液与含有104FA TCID50猪瘟病毒Thiverval株病毒液的混合物于20℃水浴作用10min和20min,均可以完全将病毒杀灭。

猪瘟兔化弱毒毒种保存期试验

本试验对 3个代次不同冻干日期的猪瘟兔化弱毒进行了兔体最小感染量测定 ,并对经猪瘟兔化弱毒 F4 76代毒繁殖冻干的两批猪瘟兔化弱毒 F4 79代毒进行了免疫原性鉴定。结果表明 ,猪瘟兔化弱毒在 - 70℃条件下保存 1 4年、1 5年、2 9年 ,其兔体最小感染量均无明显改变 ;繁殖的两批猪瘟兔化弱毒的最小免疫量均为 1 0 -5稀释 1 ml,符合《兽用生物制品规程》

频域加权最优控制在数控系统设计中的应用

在代价函数中具有频率加权的LQ方法是一般LQ方法的推广,它比LQ方法能较好地抑制高频范围内的响应。本文介绍了采用频率加权方法设计的实验性桥式起重机数字控制系统,该系统在起重机突然起动或停止时,可以控制吊物的位置不产生严重的残留振荡。研究表明频率加权最优控制是有效的,系统成功的抑制了吊物的摆动。

兔病毒性出血症病毒毒种的保存期试验

本试验对 3个不同代次的兔病毒性出血症病毒进行了最小致死量测定 ,并对经兔病毒性出血症病毒F1代毒种繁殖冻干的 1批兔病毒性出血症病毒F3 代毒种 (1998.4 .6冻干 )进行了血凝性、特异性、最小致死量、免疫原性鉴定。结果表明 ,三个不同代次的兔病毒性出血症病毒在 -70℃条件下分别保存 15年、10年、15年 ,其最小致死量均可达到 10 - 4稀释 ,家兔 3/ 4死亡 ,符合规程要求 ;

基于小型无人机的导航控制研究

在考虑小型无人机特点和多种导航方法的基础上，研究了利用GPS／航路推算组合导航方法针对无人机进行水平导航控制的方案，以及利用优化轨迹跟踪方法进行垂直导航控制的方案，并针对一种小型我尾无人机进行了导航控制律设计。仿真结果表明，这种导航方法既简单又经济，精度高、实时性强、可靠性好，可以构成具有较强实用性的自主式导航系统。

中国部分地区2005-2007年猪繁殖与呼吸综合征病毒分离株ORF5基因和Nsp2基因遗传变异分析

【目的】为分析2005-2007年间中国部分省区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的分子生物学特征,了解其遗传演化规律,查明中国目前PRRSV流行毒株现状。【方法】应用病毒分离方法从中国4个省份在2005-2007年间采集的81份疑似蓝耳病病料中分离到36株猪繁殖与呼吸综合征病毒,应用RT-PCR方法对36株PRRSV现地分离株的ORF5基因和Nsp2基因进行扩增和序列分析。【结果】36株现地分离株均属于美洲型PRRSV,ORF5基因全长均为603bp,未发现有基因缺失或插入,编码约200个氨基酸,分离株推导氨基酸序列变异主要发生在9～39位;36个分离株中有15株PRRSVNsp2基因全长为2940bp,21株PRRSVNsp2基因全长为2850bp;发生Nsp2缺失的PRRSV在Nsp2基因第481位、532～560位发生了不连续缺失,共缺失30个氨基酸。与GeneBank中收录的14个PRRSVORF5、Nsp2基因进行核苷酸及氨基酸序列比较和分析,系统进化关系显示,除B02-2005株可能与疫苗株有关外,多数现地分离株与Ch-1a株遗传距离较近,不同年份分离到的毒株与早期PRRSV分离株的同源性逐年降低。【结论】根据氨基酸变异情况对PRRSV现地分离株进行亚群聚类分析,发现36株现地分离株分别归属于以VR-2332为代表的4亚群,以BJ-4为代表的1亚群和以Ch-1a为代表的2亚群。进化关系表明PRRSVORF5、Nsp2基因及其推导的氨基酸序列均发生了较大变异,不同地区PRRSV分离株的遗传关系存在交叉现象,地域特征不明显。

非相似余度飞控计算机

从容错的角度介绍了Boeing777和A320的数字飞行控制计算机系统。Boeing777和A320的飞控计算机都采用了非相似的余度技术,能容忍软件和硬件的共态故障,但在每个计算机的功能分配和整个飞控计算机系统的余度结构编排等方面体现了各自的特点。用广义随机Petri网描述了Boeing777余度结构和容错动态过程,并进行了系统的可靠性计算和容错度分析。针对中国“大型飞机”容错飞控系统的设计作了分析和建议。

多目标非线性控制分配方法研究

提出了一种新的多目标非线性规划控制分配方法,对其理论基础、建模与求解过程进行了详尽描述,并给出了多目标非线性控制分配的解的评价指标及评价方法。该方法不依赖于伪控制指令与广义操纵面偏转角度之间呈线性关系这一假设,直接处理非线性控制分配问题,并充分利用冗余操纵面,实现不同飞行条件和任务下对多种目标的综合权衡分配。仿真结果表明该方法具有较高的精度,能很好地处理故障情况下的控制分配问题,为控制重构提供了算法保证。

基于禁忌搜索的启发式任务路径规划算法

基于启发式搜索和禁忌搜索技术 ,提出一种用于解决有限资源、不同重要性要求的任务路径规划问题的有效算法 ,通过对不同重要程度的任务进行分层调度 ,得到较为满意的决策结果。该算法具有搜索空间小、求解速度快的优点。

满足战场需求的实时飞行路径规划

基于启发式A 搜索技术 ,给出了两种战机飞行路径实时规划算法 ,通过采用折距替代直线距离 ,达到减少扩展点和提高搜索速度的目的 ;通过添加虚拟威胁源 ,解决了飞机最小转弯半径和飞行目标进入角度限制问题 ,通过飞行速度和飞行到达时间对应的最大飞行距离来对规划过程中扩展节点的剪枝 ,可以满足飞行速度、飞行时间等战场需求 ,提出的算法还保证穿越威胁源飞行飞机的生存性达到最大 .

小型无人机水平导航控制研究

在考虑小型无人机特点和多种导航方法的基础上 ,研究了利用 GPS/航路推算组合导航方法针对无人机进行水平导航控制的方案 ,并针对一种小型无尾无人机进行了导航控制律设计。仿真结果表明 ,这种组合导航方法既简单又经济 ,精度高、实时性强、可靠性好 ,可以构成具有较强实用性的自主式导航系统。