高脂饮食诱导高脂血症大鼠及不同器官病理变化

通过高脂饮食建立高脂血症大鼠模型,观察高脂血症大鼠体内程序性死亡受体1(PD-1)的表达变化。将40只雄性SD大鼠分为2组,分别饲喂普通饲料和高脂饲料12周,计算大鼠的肝脏、脾脏和胰腺指数,测定大鼠全血血糖,检测大鼠血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(T-CHO)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量,通过HE染色检测大鼠肝脏的病理变化,同时采用RT-q PCR检测PD-1 mRNA在大鼠肝脏、脾脏和胰腺组织内的表达变化。结果表明:高脂饲料组大鼠的肝脏、脾脏和胰腺指数显著高于普通饲料组;高脂饲料组大鼠的血糖显著升高;高脂饲料组大鼠血清中的TG、T-CHO、LDL-C的含量均显著高于普通饲料组,LDLC/HDL-C的比值也显著高于普通饲料组,高脂血症大鼠造模成功。HE染色显示高脂饲料组大鼠肝脏组织内均出现明显脂肪空泡。与普通饲料组相比,高脂饲料组大鼠肝脏、脾脏和胰腺组织内PD-1 mRNA的表达均显著降低,提示PD-1可能参与了高脂血症的发生和发展。

槐耳清膏对LPS致小鼠炎症反应的调节作用

目的制备脂多糖(LPS)致炎小鼠模型,观察槐耳清膏对小鼠炎症反应的调节作用。方法ICR小鼠随机分为正常对照组、LPS组、槐耳清膏低剂量组(4mg/kg)、中剂量组(6mg/kg)和高剂量组(8mg/kg),每组10只。6d后测定小鼠脾脏指数,HE染色观察小鼠肺脏组织的病理变化;ELISA检测小鼠血清IL-6、TNF-α的表达,RT-qPCR检测小鼠脾脏IL-6、TNF-αmRNA的变化。结果与正常对照组相比,LPS组小鼠的脾脏指数(5.09±0.80)和IL-6[(52.22±8.41)pg/ml]、TNF-α[(56.40±5.97)pg/ml]、IL-6 mRNA(3.16±0.89)和TNF-αmRNA(3.02±0.84)表达水平均显著升高,小鼠肺部炎症反应增加,说明LPS致炎症模型制备成功;与LPS组相比,高剂量槐耳清膏干预后的脾脏指数(3.62±0.69)和IL-6[(37.65±6.35)pg/ml]、TNF-α[(34.94±5.12)pg/ml]、IL-6 mRNA(1.32±0.15)和TNF-αmRNA(1.29±0.19)均有显著的降低(均P<0.05)。结论槐耳清膏可抵抗由LPS所致小鼠炎症,降低炎症性细胞因子的表达,有良好的抗炎效果。

肠道菌群对知母皂苷A-Ⅲ的代谢及其药效的影响

知母皂苷A-Ⅲ (timosaponin A-Ⅲ,TA-Ⅲ)腹腔注射给药对于高脂饮食诱导的代谢相关脂肪性肝病(metabolic dysfunction-associated steatotic liver disease,MASLD)具有治疗作用,而口服给药则无效,提示肠道菌群可能影响TA-Ⅲ的口服生物利用度。代谢相关脂肪性肝炎(metabolic dysfunction-associated steatohepatitis,MASH)是MASLD发展的炎症浸润阶段。本文将探讨TA-Ⅲ不同给药方式对MASH小鼠的治疗作用差异及其与肠道菌群代谢药物的关系。本研究利用缺乏胆碱、限定L-氨基酸的高脂饮食(choline-deficient,L-amino acid-defined,high-fat diet CDAHFD)诱导MASH小鼠模型,比较TA-Ⅲ (10 mg·kg^(-1))腹腔注射(intraperitoneal injection,ip)和TA-Ⅲ (100 mg·kg^(-1))灌胃给药(intragastric administration,ig)的治疗效果,并分析两种给药方式下大鼠血清中TA-Ⅲ的浓度。在此基础上,通过小鼠肠道菌群体外代谢TA-Ⅲ实验和体内联合抗生素干预小鼠的药代动力学实验等方法验证小鼠肠道菌群对TA-Ⅲ的代谢作用;最后比较不同抗生素干预条件下,灌胃给药后小鼠血清中TA-Ⅲ的浓度,结合16S rRNA测序分析,发现可能参与TA-Ⅲ代谢的关键菌。本文动物实验过程遵循上海中医药大学动物伦理委员会的规定,动物伦理批准编号为:PZSHUTCM2307030004,PZSHUTCM2310200003。结果显示,TA-Ⅲ腹腔注射给药对MASH小鼠有明确治疗作用,而十倍剂量的口服给药无效;分析发现,TA-Ⅲ灌胃给药(100 mg·kg^(-1),ig)在小鼠血清和肝脏中原型浓度显著低于腹腔注射(10 mg·kg^(-1),ip),提示口服TA-Ⅲ后可能经肠道菌群代谢。链霉素(streptomycin,Str)干预的小鼠血清中TA-Ⅲ浓度高于正常小鼠,结合16S rRNA基因测序分析发现Akkermansia_muciniphila (A.muciniphila)丰度在Str组显著减少,且体外实验表明A.muciniphila可以代谢TA-Ⅲ。上述结果表明,肠道菌群是影响TA-Ⅲ经胃肠道给药药效的重要因素,其中A.muciniphila可能扮演了重要角色。