用单克隆抗体酶联免疫吸附测定法检测水稻种子上的白叶枯病菌

我们于1988年建立了以水稻白叶枯病菌单克隆抗体为第二抗体的酶联免疫吸附测定法,虽然具有灵敏、精确、简便、快速的优点,但用于检测水稻白叶枯病病种所带的微量细菌,灵敏度仍然不足,存在漏检现象。因而,我们对利用单克隆抗体检测水稻白叶枯病病种的方法作了进一步的改进研究。

应用电镜技术对一种丹顶鹤病毒的形态学观察

1982年,作者以3只急性死亡丹顶鹤的肝脏病料感染雏鹅和成年鹅,引起雏鹅和部份成年鹅发病,剖检发现死鹅和死鹤的病变相似。而且死鹤的肝脏病料还能使鹅胚死亡,使鹅胚原代成纤维细胞和鸭胚原代成纤维细胞产生明显的病变。本实验的目的是利用超簿切片技术对病毒讲行初步鉴定。并观察其形态及发生。

生物素—亲和素酶联免疫吸附测定法检测水稻白叶枯病菌的研究

以单克隆抗体为第二抗体的ELISA双夹心法对于检测水稻白叶枯病菌具有简便快速准确的优点,但对于检测病种所带微量细菌,其灵敏度仍嫌不足。我们在常规ELISA间接法的基础上,建立了一种亲和素—生物素化辣根过氧化物酶复合物酶联免疫吸附测定法(ABC-ELISA),并初步用于水稻白叶枯病菌的检测,取得一定效果。

水稻白叶枯病原细菌单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步应用

经水稻白叶病原细菌（Xanthomonas campestris pv.oryzae)菌株K-s-6-6免疫的BALB/C小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合，经筛选和克隆化获得3株稳定分泌抗该病原细菌单克隆抗体的杂交瘤细胞株K1,K2和K31。分泌抗体稳定性试验、封闭试验、染色体数计数、交叉后应试验等表明具有株特异性；抗体分属IgG3和IgG26亚类；腹水抗体滴度在1：10^4左右，初步用于检测白叶枯病菌菌株株，病叶和病种证明特异性高，匀质均一，在理论和生产上都有实用价值。

水稻白叶枯病菌单抗杂交瘤细胞株的建立及应用研究

经水稻白叶枯病原细菌(Xanthomonas campestris pv.oryzae)菌株Ks-6-6、Os-213、Yz-32,Yz-34,Yz-24'免疫的BALB/c小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合、筛选和克隆化,共获得12株稳定分泌该病原细菌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。其抗体分属IgG3和IgG2b亚类。抗体与其它主要病原细菌的种或致病变种无交叉反应,能区分水稻白叶枯病原细菌3个不同血清型的菌株。腹水抗体效价在1:10~3—1:10~6左右。初步用于抗原决定簇的识别,能区分出6个抗原决定簇,并能将获得的63个菌株分为9个菌株组。

生物素——亲和素酶联免疫吸附测定法检测水稻白叶枯病病菌

在以单克隆杭体为第2抗体的酶联免疫吸附测定法(ELISA)的基础上,应用生物素——亲和素系统,建立了亲和素——生物素化辣根过氧化物酶复合物——酶联免疫吸附测定法(ABC-ELISA)检测水稻白叶枯病病菌。比较了ABC-ELISA法和常规ELISA法的差异,表明ABC-ELISA法的灵敏度比常规ELISA法高10～100倍。常规ELISA双夹心法的检出量一般为10~6菌体/ml,ABC-ELISA双夹心法达10~菌体/ml;全菌包被ELISA间接法为10~5菌体/ml;而ABC-ELISA间接法为10~3个菌体/ml。ABC-ELISA法并不影响单克隆抗体的高度特异性。用ABC-ELISA法检测58份水稻白叶枯病病叶,16份病种,病叶全部表现阳性反应,病种稻壳如取样在1g以上,检出率较高。

水稻白叶枯病菌单克隆抗体酶联试剂盒的研制及其应用

利用全菌包被酶联免疫吸附试验间接法,建立了能准确快速灵敏测定不同类型的水稻白叶枯病菌的单抗酶联试剂盒。应用该试剂盒检测水稻白叶枯病病叶样品101份、病种样品10份及水稻白叶枯病病菌65个菌株,结果均为阳性,且重复性好,该试剂盒使用简便、灵敏度高、特异性强,有实用价值。