慢性间质性肾炎中NGAL的表达及其作用的研究

目的了解慢性间质性肾炎(chron ic in terstitia l nephritis,C IN)患者肾组织中NGAL的表达及NGAL与肾小管-间质病理损害程度的关系。方法免疫组化观察正常肾组织和C IN患者肾组织NGAL的表达,以及NGAL阳性强度与小管-间质病理损害程度的关系。结果C IN患者肾组织表达NGAL较正常组增强;其小管NGAL阳性强度与小管-间质病理损害程度呈负相关。结论NGAL在C IN肾小管-间质病理损害中起重要作用。

hTNFR(p75)-IgG4融合蛋白在DG44细胞中的表达

目的以pOptivec为载体,以DG44细胞为宿主细胞在贴壁培养条件下表达hTNFR(p75)-IgG4融合蛋白。方法将重组质粒hTNFR(p75)-IgG4-pOptivec线性化后转染DG44细胞,经筛选得到稳定表达hTNFR(p75)-IgG4融合蛋白的DG44细胞克隆。培养上清经ProteinG亲和层析柱纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。然后对稳定表达目的蛋白的细胞株进行不同浓度的MTX加压以扩增目的基因,检测不同MTX加压条件下目的蛋白的表达量。结果重组质粒成功转染DG44细胞,经筛选后得到稳定表达目的蛋白的细胞株。经MTX加压后最高表达量达到15μg/mL培养基左右。结论hTNFR(p75)-IgG4融合基因片段在DG44细胞中成功表达,且其表达量能够满足实验研究的需要,为下一步实验打下了良好的基础。

人IL-32-IgG4(Fc)融合蛋白在CHO/DG44细胞中的表达

【目的】构建人白细胞介素32(IL-32)和IgG4 Fc段的融合基因真核表达载体IL-32-IgG4(Fc)-pOp-tiVEC,建立稳定转染的中华仓鼠卵巢细胞(CHO/DG44)克隆,并检测其重组蛋白的表达。【方法】用PCR方法从脂多糖(LPS)激活的人CD4+T细胞cDNA中扩增出IL-32蛋白基因,并克隆到IgG4(Fc)-pOptiVEC载体上,构建重组质粒IL-32-IgG4(Fc)-pOptiVEC,并进行酶切和测序鉴定。采用脂质体法,将重组质粒线性化后转染CHO/DG44细胞,进行RT-PCR检测,筛选阳性克隆,并对筛选的阳性克隆进行氨甲喋呤(MTX)加压筛选。利用ProteinG-Agarose亲和层析纯化转染CHO/DG44细胞培养上清液中的融合蛋白IL-32-IgG4(Fc),通过SDS-PAGE、Western-blot对融合蛋白IL-32-IgG4(Fc)的表达和生物学活性进行检测。【结果】PCR扩增获得了长度为564 bp的人IL-32蛋白基因cDNA,经测序与GenBank报道的序列一致。真核表达载体IL-32-IgG4(Fc)-pOptiVEC经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切,获得了IL-32蛋白基因片段,其长度为564 bp。筛选出了能稳定表达IL-32-IgG4(Fc)融合蛋白的CHO/DG44细胞克隆。亲和纯化后的IL-32-IgG4(Fc)融合蛋白经SDS-PAGE和Western-blot鉴定,其分子质量约为50.0 ku,与预期结果一致。MTX加压后,IL-32-IgG4(Fc)融合蛋白的表达量明显升高。【结论】成功构建了人IL-32蛋白融合基因的真核表达载体IL-32-IgG4(Fc)-pOptiVEC,获得了能够表达具有生物学活性的IL-32-IgG4(Fc)融合蛋白的CHO/DG44细胞克隆。

NGAL在急性药物相关性间质性肾炎中的表达及其意义

目的了解急性药物相关性间质性肾炎(acutedruginducedinterstitialnephritis,AIN)患者肾组织中NGAL的表达及NGAL与肾小管间质病理损害程度的关系。方法免疫组化观察正常肾组织和AIN患者肾组织NGAL的表达,以及NGAL阳性强度与小管间质病理损害程度的关系。结果AIN患者肾组织表达NGAL较正常组增多、增强;其小管NGAL阳性强度与小管间质病理损害程度呈负相关。结论NGAL在AIN肾小管间质病理损害中起重要作用。

重组AdPD-L1腺病毒的构建表达及鉴定

目的 构建程序性死亡配体 1(PD L1)重组腺病毒载体,以期用于体内实验研究。方法 酶切含有小鼠全长PD L1cDNA的pcDNA3 .1 PD L1质粒,亚克隆到穿梭质粒pAdtrack CMV上,在BJ5 183细胞内和AdEasy 1同源重组,筛选阳性克隆,酶切、测序鉴定正确,线性化后脂质体法转染2 93细胞进行包装、扩增,利用报告基因EGFP对病毒滴度进行监测,氯化铯密度梯度离心纯化病毒。PCR、Westernblot鉴定AdPD L1感染2 93细胞后PD L1的表达,同时进行野生型腺病毒的检测和PD L1在混合淋巴细胞反应中的作用。结果 测序、酶切证实PD L1基因重组腺病毒载体构建成功。RT PCR、Westernblot检测AdPD L1感染的2 93细胞,均有PD L1的表达。无野生型腺病毒的产生,PD L1能显著抑制小鼠混合淋巴增殖反应。结论 成功构建了含小鼠PD L1基因的重组腺病毒载体,这种膜结合性的PD L1与其相应受体结合后,对T细胞可起到负性调控的作用,为下一步体内基因治疗实验奠定了基础。

鼠IL-6受体融合蛋白的表达及初步鉴定

目的构建以及表达鼠白介素6(IL-6)受体融合蛋白。方法采用基因重组技术将鼠IL-6受体融合基因克隆到杆状病毒质粒Bacmid上,重组杆状病毒质粒在脂质体的介导下转染昆虫细胞Sf9,转染后收集重组杆状病毒,采用空斑实验检测第3代重组杆状病毒的滴度,并通过Western blot来确定目的蛋白的表达。结果重组杆状病毒质粒在DH10Bac大肠杆菌中包装成功,并转染Sf9细胞后得到重组杆状病毒,第3代重组杆状病毒的滴度为5×107pfu/ml,Western blot表明目的蛋白在Sf9细胞中表达。结论成功表达了鼠IL-6受体融合蛋白,为进一步研究IL-6在炎症性疾病中的作用奠定了实验基础。

人BAFF-R-IgG4mut融合蛋白对BXSB狼疮鼠CD4^+T细胞增殖活性的影响

目的观察人BAFF-R-IgG4mut融合蛋白对BXSB狼疮鼠CD4+T淋巴细胞增殖活性的影响。方法体外分离、纯化BXSB狼疮鼠脾脏CD4+T细胞,流式细胞技术检测CD4+T细胞BAFF-R表达,MTT法观察不同剂量BAFF-R-IgG4mut融合蛋白对BAFF刺激的CD4+T细胞增殖活性的影响。结果台盼蓝染色分离后的BXSB狼疮鼠脾脏CD4+T细胞活性率为(93.6±3.2)%;流式细胞技术检测BXSB狼疮鼠脾脏CD4+T细胞表达BAFF-R;100ng/ml、200ng/ml、400ng/ml BAFF-R-IgG4mut蛋白作用于BAFF和CD3抗体刺激的CD4+T细胞后,CD4+T细胞增殖抑制率分别是56.24%、67.07%和75.45%,较单纯BAFF+CD3抗体组差异有统计学意义(P<0.05)。结论 BAFF-R-IgG4mut融合蛋白可体外抑制BXSB狼疮鼠CD4+T细胞增殖活性。

BAFF-R-IgG4mut融合蛋白对BXSB狼疮鼠B淋巴细胞的影响

目的研究BAFF-R-IgG4mut融合蛋白对BXSB狼疮鼠B淋巴细胞的影响。方法体外观察BAFF-R-IgG4mut融合蛋白对BAFF刺激的B细胞活性的影响;100μl的PBS、200μg人IgG4和100μg BAFF-R-IgG4mut融合蛋白分别经腹腔注射10周龄雄性BXSB狼疮鼠,每周注射3次,共注射5周。分别检测狼疮鼠外周血BAFF水平、外周血和脾脏组织中B220+CD5-、CD3+CD4-、CD8+T和CD3+、CD4+、CD8-T细胞的表达以及狼疮鼠的存活率。结果BAFF-R-IgG4mut融合蛋白组外周血BAFF以及外周血、脾脏组织中B220+CD5-细胞较对照组下降(P<0.01),实验组狼疮鼠存活率较对照组延长(P<0.01)。结论BAFF-R-IgG4mut融合蛋白可抑制BXSB狼疮鼠B细胞活性。

笋瓜籽毒蛋白Maximin──一种新的蛋白质生物合成抑制剂的分离纯化及性质

笋瓜（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｍａｘｉｍａ）种籽经去壳捣碎，乙醚脱脂，硫酸铵分级沉淀，阳离子交换层析及凝胶过滤等步骤，纯化到一种有蛋白质生物合成抑制活性的碱性蛋白，命名为Ｍａｘｉｍｉｎ，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示单一条带，其分子量约为２８ｋＤ。该蛋白对兔网织红细胞裂解液的蛋白生物合成有较强的抑制，ＩＣ_（５０）为４．０×１０^（－１０）ｍｏｌ／Ｌ，与天花粉蛋白（ＴＣＳ）毒性相似。从这些特性可见，该蛋白似为单链核糖体失活蛋白（ＲＩＰ）家族中的新成员，可望作为免疫毒素的一种新“弹头”。

特殊群体院级管理与服务模式初探

大学生在大学期间不可避免会遇到多种问题。合理定位，建立院级中观层面帮扶体系，形成内外循环的教育服务体系和监督反馈体系，促使宏观一中观一微观层面特殊学生群体的管理体系衔接，充分发挥学院是学校相关工作的直接执行者，是大学生工作的直接面对者的双重作用。

茄子和朱砂叶螨相互作用系统的研究Ⅰ.叶螨种群动态与茄子叶片丹宁酸含量变动的关系

以茄子和朱砂叶螨为对象,对叶螨种群动态与植物次生代谢物质——丹宁酸含量变动的相互关系进行了研究。发现朱砂叶螨的取食胁迫,能迅速地诱导茄子的应激反应。同时茄子以某种方式的丹宁酸含量自主调控,对叶螨种群的动态产生强烈的影响。在结合考察未受螨害植株所表现出的次生代谢准周期变动的基础上,提出了一种植物防御模式的假说。

中和性马抗体对SARS-CoV感染的防治作用

目的探讨马抗SARSCoV中和性抗体是否对SARSCoV感染有防治作用。方法用SARSCoV(BJ01株)免疫马匹,从免疫马血清中制备IgGs及其F(ab’)2片段。通过细胞病变法(CPE)、MTT法和空斑形成实验(PFU)等方法,在体外培养的VeroE6细胞中检测F(ab’)2片段对SARSCoV感染的预防性和治疗性作用。再在Balb/c小鼠体内模型中,用CPE法和定量RTPCR方法检测该抗体的保护性效应。结果CPE、MTT和PFU三种方法证实来自三匹马的血清F(ab’)2的中和滴度均达到1∶1600以上。体内实验证实,50μg的F(ab’)2片段可以完全中和1×104TCID50SARSCoV。结论马抗SARSCoV抗体在体内外均能有效地中和SARSCoV和预防其感染宿主细胞,为马抗体将来在大的灵长类动物或人体内进行实验提供实验依据。

IL-6RFP在小鼠血吸虫感染中对肝细胞的保护作用

目的探讨鼠白介素6受体融合蛋白(m IL-6RFP)在BALB/c小鼠日本血吸虫感染模型中对肝细胞的保护作用。方法通过亲和层析方法获得可阻断白介素-6(IL-6)的m IL-6RFP,经人类肝癌细胞(Hep G2)IL-6刺激及阻断实验检测纤维蛋白原(fibrinogen,FGG)和结合珠蛋白(haptoglobin,HP)的mRNA表达变化,体外验证重组蛋白m IL-6RFP的生物活性。建立BALB/c小鼠日本血吸虫感染模型,于感染第24天起经尾静脉注射m IL-6RFP,隔天注射每次100μg/只,感染第42天剖杀小鼠。HE染色法检测小鼠肝脏肉芽肿面积,荧光定量PCR法检测小鼠肝组织IL-1β、IL-13、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和趋化因子1(CXCL1)的mRNA表达,连续监测法检测小鼠肝功能指标谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)。结果 Hep G2细胞实验显示m IL-6RFP可降低IL-6对该细胞的刺激作用,显著下调FGG和HP的表达(P<0.05)。在小鼠感染模型中阻断IL-6后,肝功能指标ALT和AST与溶剂对照组相比均显著下降(P<0.05),肉芽肿病变无显著性差异。结论在BALB/c小鼠日本血吸虫感染模型中m IL-6RFP可明显改善肝细胞功能,但对肉芽肿形成未见明显作用。

人IL35-IgG4(Fc)融合蛋白在CHO／DG44细胞中的稳定表达

本研究利用基因重组技术构建人IL35-IgG4(Fc)融合基因真核表达载体,稳定转染CHO/DG44细胞并检测重组蛋白的表达。主要采用聚合酶链式反应(PCR)从脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)诱导的人髓性白血病细胞株KG-IcDNA文库中克隆EBI3和IL-12p35cDNA,重叠PCR法连接2个片段,并克隆到IgG4(Fc)-pOptiVECTM-TOPO载体上,对新构建的IL-35-IgG4(Fc)pOptiVECTM-TOPO真核表达载体并进行酶切、测序、PCR鉴定;脂质体法转染CHO/DG44细胞;RT-PCR检测转染结果,采用a-MEM-培养基筛选实验组细胞,对筛选的阳性克隆细胞再进行氨甲喋呤(Methotrexate,MTX)的加压筛选,ProteinG-Agarose纯化阳性克隆培养上清,免疫印迹检测目的蛋白表达。结果显示IL-35-IgG4(Fc)pOptiVECTM-TOPO表达载体稳定转染CHO/DG44细胞并获得阳性克隆;SDS-PAGE电泳得到一条与预期相对分子质量大小相符的蛋白条带;该蛋白能与羊抗人IgG4抗体特异结合。本实验获得了能够稳定表达具有稳定结构的IL35-IgG4(Fc)融合蛋白的CHO/DG44细胞株。

24p3及白细胞介素17A在自身免疫性肝炎中的表达

本研究以刀豆蛋白A（Con A）诱导AIH动物模型,研究24p3和IL-17A在AIH病理过程中的表达,发现24p3相对特异性地表达于炎症组织和免疫器官,证实了24p3在AIH中有特异表达并可能与免疫系统有关。

重组免疫毒素EBI3-Luffin P1原核表达质粒的构建、表达及其生物学活性

目的构建重组免疫毒素EBI3-Luffin P1的原核表达质粒,在大肠杆菌中进行表达,纯化后初步检测其生物学活性。方法从质粒pET-32a-EBI3中扩增EBI3基因,与合成的Luffin P1基因连接,克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组质粒pET-32a-EBI3-Luffin P1,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组EBI3-Luffin P1蛋白经亲和层析纯化后,Western blot检测其反应原性,体外试验初步鉴定其生物学活性。结果重组质粒pET-32a-EBI3-Luffin P1经双酶切及测序证实构建正确;表达的重组EBI3-Luffin P1蛋白相对分子质量约为50 000,主要以包涵体形式存在,诱导8 h表达量可达菌体总蛋白的44%;纯化的重组蛋白纯度约为98%,可与EBI3蛋白免疫小鼠血清发生特异性反应,并可显著抑制小鼠脾脏细胞分泌IFNγ。结论成功构建了重组免疫毒素EBI3-Luffin P1的原核表达质粒,表达并纯化了重组蛋白,为进一步研究其在缓解、治疗免疫性疾病及红白血病中的作用奠定了基础。

Luffin A 免疫毒素的构建及对人黑色素瘤细胞的体外抑制作用

近年来,免疫毒素在白血病治疗、骨髓移植等方面显示出令人鼓舞的成果,到1990年美国食品与药品管理局(FDA)已批准数种免疫毒素进行临床试验.我们已从丝瓜(Luffa cylindrica)的种籽中分离纯化了两种单链致核糖体失活蛋白(Ribosome inactivating proteins,RIPs):Luffin A,B,并测得它们对兔网织红细胞裂解液的蛋白质生物合成有强烈的抑制作用,IC_(50)分别为1.4×10^(-11)mol/L和2.0×10^(-11)mol/L,比天花粉蛋白(Trichosanthin,TCS)的2.9×10^(-10)mol/L要低一个数量级.文献[1]报道Luffins是迄今已分离到的毒性最高的单链RIPs,但未见有关Luffin的免疫毒素的报道.我们在对其理化性质进行研究的基础上,将Luffin A制成免疫毒素,并研究了它对体外培养的肿瘤细胞的杀伤作用.

B细胞刺激因子受体融合蛋白改善BXSB狼疮鼠病变的研究

目的观察腹腔注射B细胞刺激因子受体融合蛋白（BAFF—R—IgG4mut）对狼疮鼠病变的影响。方法100μl的磷酸盐缓冲液（PBS）、200μg人IgG4和100μgBAFF—R—IgG4mut融合蛋白分别经腹腔注入10周龄BXSB狼疮鼠，每周注射3次，共注射5周。分别检测狼疮鼠外周血BAFF水平、外周血和脾脏组织中B220^＋CD5^-B细胞、CD3^＋CD4^-CD8^＋T细胞和CD3^＋CD4^＋CD8^-T细胞的表达，检测尿蛋白、IgG型抗双链DNA（dsDNA）抗体、肾脏病理损伤指标和狼疮鼠的存活率。以方差分析和，检验进行数据统计。结果实验组9、10、12、15周龄鼠外周血BAFF水平分别是（2．0±1．6）ng/ml、（4．1±2．2）ng／ml、（3．7±1．9）ng／ml、（3．9±1．8）ng／ml，较对照组下降（P〈0．01）；外周血、脾脏组织中B220^＋CD5^-细胞比率较对照组下降（P〈0．01），蛋白尿、IgG型抗dsDNA抗体产生减少，IgG在肾组织沉积及肾组织病理损伤较对照组明显减轻（P〈0．01），存活率较对照组延长（P〈0．01）。结论BAFF—R～IgG4mut融合蛋白改善BXSB狼疮鼠病变。

IL-37免疫学作用研究进展

IL-37属于IL-1家族，拥有IL-1家族特有的β-barrel结构，又被称为IL-1F7。IL-37是近年来发现的一类具有炎症抑制作用的细胞因子。该文主要介绍IL-37的结构、细胞来源和免疫学功能，并就IL-37的免疫学作用机制进行了论述。

Construction of Luffin A Immunotoxin and Its in vitro Inhibition Against Human Melanoma Cell M_(21)

1 Introduction In recent years, significant progress has been made in applying immunotoxin (IT)in the therapy of leukemia and marrow transplantation. By 1990, several ITs havebeen put into clinical trials under the permission of FDA (Foodand Drug Administration, USA).