Red重组系统在克雷伯氏肺炎杆菌中的应用研究

通过改造pKD46与pCP20质粒为含四环素抗性标记的pKD46-Tc与pCP20-Tc重组质粒,初步建立了一套能在K.pneumoniae菌株中运用的Red重组系统。以荚膜基因中的高保守基因wzi为敲除对象,导入同源臂为250 bp的打靶片段△wzi::FK,转化后得到6个重组子,初步确定敲除了K.pneumoniae菌株的荚膜基因wzi。

D-乳酸合成阻断对肺炎克雷伯氏菌的1,3-丙二醇发酵的影响

利用Red同源重组技术,快速敲除肺炎克雷伯氏菌中的编码D-乳酸脱氢酶的两个基因——ldhA和dld,获得KG1-1和KG1-2两个突变株,并研究了敲除编码D-乳酸脱氢酶基因丧失合成D-乳酸的KG1-1菌株的1,3-PD产量和菌体生长变化,实验结果表明乳酸合成缺失对现有工艺1,3-丙二醇发酵无影响。

relA基因在重组大肠杆菌BL21合成嘌呤核苷磷酸化酶作用研究

利用Red同源重组技术敲除大肠杆菌BL21中relA基因,获得△relA突变株。进一步研究表明在LB复合培养中relA基因对大肠杆菌的生长几乎没有明显影响,但是对其重组蛋白的合成有着较大的影响:降低了25%。结果表明,relA基因在大肠杆菌表达重组蛋白方面有着较重要的作用。

环境及内源条件对克雷伯氏肺炎杆菌质粒消除的影响

目的:考察环境及内源条件对克雷伯氏肺炎杆菌(Klebsiella pneumoniae)质粒消除的影响。方法:采用高温、SDS等环境手段以及基因组基因敲除等分子生物学手段消除K.pneumoniae的质粒。结果:采用高温和SDS同时处理的方法,在最适的条件下质粒消除率可达41.7%。在考察荚膜基因缺失对质粒消除的影响时发现,相同的作用条件下荚膜基因的缺失降低了质粒的消除效率,并在此进一步考察了其他基因缺失对质粒消除的影响。结论:高温和SDS复合处理可以显著提高质粒消除的效果。基因组基因的缺失对质粒的消除有影响。