不育患者精子DNA链损伤类型的研究及临床意义

目的:观察精子DNA单、双链损伤(SSB、DSB)在男性不育中的特征,探讨DSB与男性不育的关系,为男性不育的诊疗提供新的观察指标与思路。方法:选择男性不育患者60例以及同期因女方因素不孕前来检查的生育力评估正常的健康男性30例作为对照组,分析两组精子DNA损伤及精液主要参数的差异。精子浓度及活力采用计算机辅助精子分析系统,精子存活率分析采用低渗膨胀试验,精子形态采用Diff-Quik染色法,精子DNA损伤采用双尾彗星实验。结果:双尾彗星实验检测精子DNA完整性共有9种彗星模型。不育患者精子DNA损伤指数(DFI)为(33.8±13.1)%,单链损伤指数(SSB-DFI)为(19.2±11.4)%、SSB占所有损伤精子的比率(SSB-DFI/DFI)为(56.8±32.4)%,双链损伤指数(DSB-DFI)为(23.9±13.4)%、DSB占所有损伤精子的比率(DSB-DFI/DFI)为(70.8±19.5)%;与对照组比较[分别为(16.3±7.9)%、(14.9±7.6)%、(91.4±27.8)%、(6.1±2.7)%、(37.4±11.3)%)],SSB-DFI无显著性差异(P>0.05),DSB-DFI、DFI和DSB-DFI/DFI显著高于对照组(P均<0.01),SSB-DFI/DFI显著降低于对照组(P<0.01)。绘制ROC曲线,DSB-DFI/DFI、DSB-DFI及DFI诊断男性不育最佳截断值分别为39.5%、15.85%和18.65%,ROCAUC、敏感度和特异性分别为(0.969,98.3%,90.0%)、(0.912,86.7%,80.0%)、(0.861,90.0%,70.0%)。不育组精子SSB-DFI及SSB-DFI/DFI与精液常规参数均无相关关系(P均>0.05),DFI与前向运动精子百分率、精子存活率及正常形态精子百分率呈负相关(P<0.05或P<0.01),与精子浓度无相关关系(P>0.05),精子DSB-DFI及DSB-DFI/DFI与精子浓度、精子存活率、前向运动精子百分率及正常形态精子百分率均呈负相关(P<0.05或P<0.01)。结论:影响男性不育的DAN损伤因素可能是DSB,而与SSB相关性不大,精子DNA链的损伤类型对男性生殖能力的评估有较大的参考价值。

多孔碳酸钙陶瓷与干细胞源性成骨细胞的相容性

背景:国内外的研究证实普通碳酸钙陶瓷作为骨替代材料时具有细胞支架作用。目的:观察多孔碳酸钙陶瓷与成骨细胞的相容性,及作为骨组织工程支架的可能性。方法:SD大鼠骨髓基质干细胞经矿化诱导培养、扩增并检测证实其已具成骨细胞表型后,分别与多孔碳酸钙陶瓷支架、普通羟基磷灰石陶瓷支架体外复合培养。结果与结论:骨髓基质干细胞经体外诱导形成成骨细胞,钙结节、Ⅰ型胶原和碱性磷酸酶免疫染色结果阳性。多孔碳酸钙陶瓷支架材料与羟基磷灰石陶瓷材料皆有细胞附着生长,但多孔碳酸钙陶瓷支架材料细胞的黏附能力、增殖活力及成骨活性均强于羟基磷灰石陶瓷材料。提示多孔碳酸钙陶瓷支架材料与SD大鼠骨髓基质干细胞源性成骨细胞有良好相容性。

膀胱癌尿沉渣RUNX3基因启动子区域CpG岛甲基化状况及意义

目的探讨膀胱癌患者尿沉渣细胞中RUNX3基因启动子CpG岛的甲基化状况及其临床意义。方法收集临床病理确诊39例膀胱癌,采用甲基化特异PCR(MSP)的方法,检测膀胱癌肿瘤组织和配对的尿沉渣RUNX3基因启动子CpG岛的甲基化异常频率,同时以45例非肿瘤性泌尿系疾病患者及14例健康志愿者作为对照。结果膀胱癌肿瘤组织和配对的尿沉渣RUNX3基因启动子甲基化阳性率分别为64.1%(25/39)和56.4%(22/39),二者密切相关(r=0.420,P=0.008)。膀胱癌组尿沉渣RUNX3基因启动子甲基化阳性率(64.1%,25/39)显著高于非肿瘤组(6.7%,3/45)(χ2=31.015,P=0.000),非肿瘤组与志愿组间(阳性率为0)并无明显差异(P>0.05);尿沉渣RUNX3基因甲基化对膀胱癌诊断的敏感性为64.1%(25/39),特异性为94.9%(56/59)。浸润性(≥pT2)和表浅性(≤pT1)膀胱癌RUNX3基因甲基化阳性率之间的差异有统计学意义(χ2=10.363,P=0.001)。性别、年龄、病理分级与RUNX3基因甲基化均无明显相关性(均P>0.05)。结论 RUNX3基因启动子异因异常甲基化可能是膀胱癌的早期事件,尿沉渣RUNX3基因启动子异常甲基化可作为非侵入性诊断膀胱癌并且判断其预后的分子标志物。

脊柱嗜酸性肉芽肿23例治疗分析

目的分析脊柱嗜酸性肉芽肿的临床治疗方法及疗效。方法脊柱嗜酸性肉芽肿患者23例,保守治疗9例,开放手术14例,其中微创手术5例。采用VAS疼痛评分及脊柱0DI评分评估手术治疗及保守治疗患者生活质量情况,并分析并发症及椎体高度恢复情况。结果患者治疗后疼痛明显缓解,脊柱功能得到改善,手术组与保守组患者0DI评分比较差异无统计学意义,但微创组椎体高度恢复值[(8.56±2.31)mm]高于开放手术组[(6.13±1.08)mm]及保守组[(6.74±0.99)mm],差异有统计学意义(P<0.05)。结论脊柱嗜酸性肉芽肿治疗方式需要遵循个体化原则,有明显神经症状及进行性畸形患者需手术治疗,微创手术更有利于椎体高度的恢复。

1,5-脱水葡萄糖醇对2型糖尿病诊断的临床意义

目的 评价1，5-脱水葡萄糖醇（5-AG）作为糖代谢指标在糖尿病诊断中的临床价值。方法 测定并比较108例非糖尿病对照者和98例2型糖尿病患者血清1，5-AG、糖基化血红蛋白（HbAlc）、果糖胺（FMN）和空腹血糖（FBG）的水平。评价各指标对糖尿病诊断的敏感性，以及1，5-AG与FBG、HbAlc和FMN的相关性。结果 1，5-AG的正常参考值为67．1～276．9μmol／L，1，5-AG表达水平在不同性别、不同年龄之间差异无统计学意义（P〉0．05）。糖尿病组1，5-AG表达水平为52．7±18．9μmol／L，明显低于非糖尿病对照组（P〈0．01）。在各标志物对糖尿病的诊断评价对比中，1，5-AG敏感度最高为82．7％，1，5-AG与FMN、HbAlc、血糖均呈负相关。结论 1，5-AG诊断糖尿病的敏感度较高，可反映近期血糖波动情况和超过肾糖阈的高血糖状况，能为临床诊断、筛查和治疗提供依据。

肌酸激酶MB同工酶与肌钙蛋白Ⅰ对急性心肌梗死诊断的对比观察

目的比较肌酸激酶MB同工酶（CK－MB）与肌钙蛋白Ⅰ（cTn－Ⅰ）对急性心肌梗塞（AMI）的敏感度与特异性。方法采用微粒子免疫发光自动分析系统定量检测各类别血清中cTn-Ⅰ与CK－MB含量。结果cTn－Ⅰ检出AMI的敏感度为92．0％，特异性为100％；CK－MB敏感度为96．0％，特异性为77．4％。结论cTn－Ⅰ与（CK－MB诊断AMI相比具有血中出现时间早，特异性高，升高持续时间长等优点。

多孔碳酸钙陶瓷细胞相容性评价

目的:探讨多孔碳酸钙陶瓷CCC的细胞相容性,为临床应用提供实验依据。方法:采用浸提法制备CCC生理盐水和培养液浸提液,浸提液体外培养L929小鼠成纤维细胞,进行细胞形态学观察,采用MTT法测定细胞增殖率并进行细胞毒性分级;采用分光光度法进行溶血试验。结果:培养期细胞大量增殖,形态良好,(CCC)的细胞毒性分级为Ⅰ级,对健康人血的溶血率<5%,存在轻微细胞毒性和溶血作用。结论:CCC细胞相容性好,符合植入人体生物材料的相关要求。

靶向干扰CDK2AP1对乳腺癌MCF-7细胞体外迁移和侵袭的影响

目的探讨靶向干扰细胞周期调节蛋白依赖性激酶2-关联蛋白-1(CDK2AP1)对乳腺癌MCF-7胞体外迁移和侵袭的影响。方法构建重组慢病毒pGCLV-CDK2AP1-shRNA及重组空病毒pGCLV-GFP,分别稳定转染乳腺癌细胞系MCF-7,获得乳腺癌细胞株MCF-7/RNAi-NC和MCF-7/RNAi-CDK2AP1。采用定量PCR法检测两组MCF-7细胞株的CDK2AP1mRNA表达,xCELLigence/RT-CIM实时细胞电子分析系统检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞的侵袭能力。结果成功构建乳腺癌细胞株MCF-7/RNAi-NC和MCF-7/RNAi-CDK2AP1,相比MCF-7/RNAi-NC细胞组,MCF-7/RNAi-CDK2AP1细胞组的CDK2AP1mRNA表达受到明显抑制,其细胞迁移和侵袭能力均显著下降(P<0.05)。结论乳腺癌细胞MCF-7中CDK2AP1低表达能有效抑制细胞的体外迁移和侵袭能力。

女贞子多糖在脂多糖诱导大鼠睾丸支持细胞炎性损伤中保护作用的研究

目的:探究女贞子多糖(LLP)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠睾丸支持细胞炎性损伤的影响。方法:体外分离和培养大鼠支持细胞,分对照组、LPS组、LPS+低剂量LLP组、LPS+中剂量LLP组和LPS+高剂量LLP组,处理细胞48 h。CCK-8检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,紫外分光光度法检测细胞培养液上清中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)浓度; ELISA检测各组细胞培养液上清中IL-1α,IL-6和TGF-β含量后,去除LPS继续培养48 h,再次检测各组细胞培养液上清中IL-1α,IL-6和TGF-β含量。结果:各组细胞增殖组间差异有统计学意义(F=153. 93,P <0. 01),LPS组与对照组相比细胞增殖率明显降低(P <0. 01),而中剂量和高剂量LLP+LPS组与LPS组相比细胞增殖率明显增高(P <0. 01);各组细胞凋亡率组间差异有统计学意义(F=64. 06,P <0. 01); LPS组与对照组相比细胞凋亡率明显增高(P <0. 05),而与LPS组相比,中剂量和高剂量LLP+LPS组细胞凋亡率有不同程度的下降(P <0. 01)。各组细胞SOD、CAT、GSH-Px和MDA组间差异均有统计学意义(F值分别为56. 07、41. 57、238. 46、285. 31,P <0. 01),LPS组与对照组相比SOD、CAT和GSH-Px活性均明显降低(P <0. 01),MDA浓度明显增加(P <0. 01);中剂量和高剂量LLP+LPS组与LPS组相比,SOD和CAT活性均有不同程度升高,而3种剂量LLP+LPS组与LPS组相比,GSH-Px活性逐渐升高,MDA浓度逐渐下降(P <0. 01)。去除LPS前,LPS组与对照组相比IL-1α、IL-6和TGF-β浓度明显增加(P <0. 01),中剂量和高剂量LLP+LPS组与LPS组相比IL-1α浓度逐渐增加(P <0. 05或<0. 01),而3种剂量LLP+LPS组与LPS组相比,IL-6和TGF-β浓度变化不明显(P> 0. 05)。去除LPS后LPS组IL-1α、IL-6明显降低,而TGF-β明显增加(t值分别为25. 26、61. 43和-18. 16,P <0. 01); LLP+LPS组IL-1α和IL-6较LPS组下降更明显,TGF-β浓度增加更显著(P <0. 01)。结论:LLP在LPS诱导大鼠睾丸支持细胞炎性损伤中具有保护作用,可降低细胞凋亡,并在炎症过程中对睾丸支持细胞分泌的IL-1β、IL-6和TGF-β具有调节作用。

后路寰枢椎椎弓根螺钉内固定植骨融合治疗成人不稳定性寰椎骨折的效果

目的:探讨后路寰枢椎椎弓根螺钉内固定并植骨融合治疗成人不稳定性寰椎骨折的效果。方法:对2014年1月~2018年8月我院收治的27例不稳定性寰椎骨折的患者进行回顾性研究,其中女性7例,男性20例,年龄29~78岁(54.1±10.8岁)。以横韧带断裂作为不稳定的标准,其中单纯不稳定性寰椎骨折16例,寰椎骨折合并枢椎齿状突骨折10例,合并枢椎Hangman骨折1例。致伤因素为交通伤6例,高处坠落伤20例,重物砸伤1例。均行寰枢椎椎弓根螺钉内固定并植骨融合手术,记录患者术前和术后的临床资料与影像学资料,比较术前与术后的颈部疼痛视觉模拟评分(VAS评分)、日本骨科协会(JOA)评分,随访观察骨折愈合和植骨融合情况、有无内固定物松动和/或断裂以及伤口感染等情况。结果:所有患者手术顺利,手术时间89~125min(103.7±9.3min),术中出血90~180ml(135.6±24.2ml),未出现椎动脉损伤、脊髓损伤或脑脊液漏等手术并发症。所有患者均获随访,随访时间12~30个月(21.6 3±4.64个月),随访期内未出现内固定物松动、断裂和伤口感染等情况,所有患者骨折均愈合,植骨均获得骨性融合。术前颈部疼痛VAS评分6.70±0.70分,术后3个月随访时为1.59±0.61分,差异有统计学意义(P<0.05);术前JOA评分为10.85±1.11分,术后3个月随访时JOA评分为15.96±0.84分,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:后路寰枢椎椎弓根螺钉内固定并植骨融合手术对成人不稳定性寰椎骨折能重建良好的上颈椎稳定性,可获得满意的临床疗效。

TGF-β1在大鼠睾丸支持细胞的作用及对紧密连接的影响

目的:探讨TGF-β1在大鼠睾丸支持细胞增殖和凋亡中的作用以及对紧密连接相关蛋白基因表达的影响。方法:体外分离和培养大鼠睾丸支持细胞,分空白对照组、TGF-β1受体阻滞剂组、TGF-β1刺激组和TGF-β1+受体阻滞剂组共4组。CCK-8检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;建立支持细胞原代双室培养模型,应用跨上皮电阻测定法(TER)检测单层细胞两侧跨细胞电阻值;RT-PCR和Western印迹检测支持细胞闭合蛋白(Occludin)、闭锁小带蛋白1(ZO-1)和紧密连接蛋白Ⅱ(ClaudinⅡ)的相对表达量。结果:各组细胞增殖组间差异有统计学意义(F=5.05,P<0.05),TGF-β1刺激组与空白对照组相比细胞增殖率增加(P<0.05),而TGF-β1+受体阻滞剂组与TGF-β1刺激组相比细胞增殖率降低(P<0.05)。各组细胞凋亡率组间差异无统计学意义(F=1.13,P>0.05);各组细胞间TER差异有统计学意义(F=38.99,P<0.01),与空白对照组比较TGF-β1刺激组TER降低(P<0.01),与TGF-β1刺激组比较,TGF-β1+受体阻滞剂组和TGF-β1受体阻滞剂组细胞TER升高(P均<0.01);各组支持细胞中ZO-1、ClaudinⅡmRNA及蛋白在各组中的表达量差异均无统计学意义(F_(mRNA)=0.49,0.93,P均>0.05;F_(蛋白)=0.28,1.31,P均>0.05),而Occludin mRNA及蛋白在各组中的表达量差异均有统计学意义(F_(mRNA)=6.86,F_(蛋白)=6.87,P均<0.05);与空白对照组相比,TGF-β1刺激组Occludin mRNA及蛋白表达明显降低(P均<0.01),而加入受体阻滞剂后,Occludin mRNA及蛋白表达明显回升(P均<0.05)。结论:TGF-β1对睾丸支持细胞的增殖有促进作用,并能通过调节Occludin蛋白的表达而影响大鼠支持细胞间的紧密连接。

膀胱癌尿沉渣PTEN基因启动子CpG岛异常甲基化研究

目的探讨膀胱癌患者尿沉渣细胞中PTEN基因启动子CpG岛的甲基化状况及其临床意义。方法收集临床病理确诊39例膀胱癌,采用甲基化特异PCR(MSP)的方法,检测膀胱癌肿瘤组织和配对的尿沉渣PTEN基因启动子CpG岛的甲基化异常频率,同时以45例非肿瘤性泌尿系疾病患者及14例健康志愿者作为对照。结果膀胱癌肿瘤组织和配对的尿沉渣PTEN基因启动子甲基化阳性率分别为53.8%(21/39)和48.7%(19/39),两者密切相关(r=0.381,P=0.017)。膀胱癌组尿沉渣PTEN基因启动子甲基化阳性率(48.7%,19/39)显著高于非肿瘤组(11.1%,5/45)(2χ=15.37,P=0.000),非肿瘤组与志愿组间(阳性率为0)并无明显差异(P>0.05);尿沉渣PTEN基因甲基化对膀胱癌诊断的敏感性为48.7%(19/39),特异性为91.5%(54/59)。性别、年龄、病理分级及临床分期与PTEN基因甲基化均无明显相关性(P均>0.05)。结论 PTEN基因启动子异因异常甲基化可能是膀胱癌的早期事件,尿沉渣PTEN基因启动子异常甲基化可能是膀胱癌早期诊断分子标志物之一。

亮氨酸氨基肽酶等4项指标在肝病诊断中的意义和临床评价

目的:探讨@-岩藻糖苷酶(AFU)、前白蛋白(PAB)、亮氨酸氨基肽酶(LAP)、腺苷脱氨酶(ADA)等4项指标在肝病诊断中的不同意义。方法:使用全自动生化分析仪测定了536例各种肝病患者和130例正常人血清中4项指标的表达水平并同时测定肝功常规项目,对检测结果进行统计学分析。结果:各肝病组待评价4项指标分别与正常对照组相比,表达均异常升高或下降(P<0.01或P<0.05);但不同指标在不同肝病中异常的规律和程度各不相同,比较各指标在各肝病组的阳性发生率和用于诊断各肝病时的AUC,发现LAP在肝癌时升高幅度及阳性率均最高,与其他各肝病组比较有统计学意义(P<0.01或P<0.05);AFU在肝癌时升高幅度及阳性率均最高,与慢性肝炎、淤胆性肝炎和肝硬化组比较有统计学意义(P<0.01或P<0.05);ADA在肝硬化时升高幅度最大,且阳性率最高,与其他各肝病组比较差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05);PAB在肝硬化组下降幅度及阳性率最大,其次为肝癌组,但各组之间比较无统计学意义;LAP、AFU对原发性肝癌诊断意义最大,AUC分别为0.751和0.817,而其他各组AUC均<0.65;ADA和PAB对肝硬化诊断意义最大,AUC分别为0.881和0.817,而在其他各组AUC均<0.69。结论:肝硬化时,ADA具有较高的应用价值;肝癌时LAP和AFU应用价值较高;PAB是一能更好地反映肝脏合成功能和储备能力的良好指标。

PKP术对于17例Kummell病短期疗效分析

目的探究经皮球囊扩张椎体后凸成形术(PKP)对于胸腰椎椎体压缩性骨折后不愈合(Kummell病)的短期疗效。方法选取自2016年12月至2017年12月间在我院脊柱外科病区就诊的17例Kummell病患者,收集患者资料,予以双侧椎弓根入路PKP术治疗,比较患者术前与术后VAS评分,ODI评分,以及伤椎Cobb角差异变化,以此分析PKP术对于Kummell病的临床疗效。结果患者接受PKP手术治疗后,术后一月内疼痛明显缓解,日常生活能力明显提高,VAS分及ODI评分术前术后具有统计学差异(P<0.05);患者椎体高度明显恢复,没有患者发生骨水泥渗漏,术后Cobb角恢复较术前有统计学差异(P<0.05)。结论 PKP术治疗Kummell病在短期内具有明显的临床疗效,对于改善患者生活状态有重大意义。

全身多处自发性气性坏疽一例

患者，男，79岁。因“间断发热1个月余”入院，1个月前胸片提示“慢性支气管肺炎”，给予相应治疗。近4d无明显诱因出现双下肢肿胀。既往有直肠癌手术史。入院查体提示：心动过速，心律不齐，双下肢浮肿，左侧明显，WBC：18．7g/L。入院诊断：①发热原因待查：肿瘤？结核？免疫系统疾病？②高血压2级，极高危，高血压肾病，肾功能不全。③直肠癌术后。

脱敏煎治疗男性免疫性不育疗效分析及对外周血T细胞亚型的影响

目的分析脱敏煎治疗男性免疫性不育患者前后AsAb、精液常规参数、外周血T细胞及Th细胞亚型分布的变化情况,探讨脱敏煎对男性免疫性不育患者的精液常规参数及机体免疫状态的影响。方法收集男性免疫性不育患者50例,在脱敏煎治疗前后检测患者AsAb;计算机辅助精子分析仪检测精子浓度及前向运动精子(PR);低盐膨胀实验检测精子存活率,Diff-Quick染色法检测正常精子形态百分率;流式细胞术检测患者外周血T细胞亚型分布;RT-PCR检测IFN-γ、IL-4 mRNA表达情况。结果经脱敏煎治疗后,患者AsAb转阴率达76.00%,精子浓度明显升高(P<0.05),精子活率及PR亦明显升高(P均<0.01),而正常精子形态百分率无明显变化(P>0.05)。患者外周血CD3^+T和CD8^+T细胞数明显降低,CD4^+T细胞数明显升高(P均<0.01)。IFN-γmRNA表达量显著下调(P<0.05),IL-4 mRNA的表达量显著上调(P<0.05)。结论脱敏煎治疗可明显改善男性免疫性不育患者T淋巴细胞功能失调,提高精子浓度/精子存活率和活力,降低AsAb阳性率。

男性免疫性不育患者外周血T细胞亚型分布

目的分析男性免疫性不育患者外周血T细胞及Th细胞亚型分布情况,揭示男性免疫性不育者的机体免疫状态。方法采用流式细胞术检测男性免疫性不育患者外周血T细胞亚型分布,采用实时荧光定量PCR检测Th1和Th2的效应因子γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)和白细胞介素-4(Interleukin-4,IL-4)在基因转录水平的表达。结果流式细胞术检测结果显示,与正常对照相比,免疫性不育患者CD3+T细胞占淋巴细胞百分比明显升高,CD8+T细胞占淋巴细胞百分比明显升高,CD4+T细胞占淋巴细胞百分比明显降低,免疫性不育者CD4/CD8比值下降并倒置,差异均具有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR检测结果显示,与正常对照相比,IFN-γ mRNA在免疫性不育组的表达量显著上调,IL-4 mRNA的表达量显著下调,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论男性免疫性不育患者免疫系统出现T淋巴细胞功能失调及Th细胞分化向Th1细胞方向极化偏移。