人外周血淋巴细胞体外诱导培养前后的差异蛋白组学研究

目的研究人外周血淋巴细胞(PBMCs)体外诱导前后的蛋白质组表达变化,进一步探讨其抗肿瘤机制。方法收集培养前后的细胞提取总蛋白,定量、双向电泳和银染后,利用ImageMasterTM软件对表达异同的蛋白质点进行分析及质谱鉴定。结果培养前后细胞相似的蛋白主要与基因转录因子和细胞骨架相关,差异蛋白主要与细胞凋亡和代谢相关。结论 CIK细胞的扩增及表型变化与细胞内蛋白表达改变相关。

CIK细胞治疗泌尿系统肿瘤的临床疗效分析

目的观察细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)体外细胞毒活性,并观察CIK细胞治疗泌尿系统肿瘤的近期临床疗效、免疫学活性及副反应.方法 2007年7月至2010年3月共收录10例泌尿系统肿瘤患者进行CIK细胞治疗,经标准治疗方案治疗的患者,取外周血分离单个核细胞(PBMC),体外诱导出CIK细胞培养后,观察CIK细胞表型,用MTT法测体外细胞毒活性.结果当效靶比为16:1、8:1时,CIK细胞体外细胞毒活性杀伤率分别(93.59±6.69)%和(76.78±14.23)%.前列腺癌2例,病情有较好的缓解,其中1例前列腺特异抗原和游离抗原治疗后均下降;4例肾癌完全缓解,1例SF,AFP和CEA在CIK治疗3个疗程后降至正常值.膀胱癌4例,部分缓解3例;与CIK细胞回输前相比,患者CD3+、CD4+、CD8+均有显著升高(P<0.05),这表示可以诱导患者产生特异性的免疫反应.10例患者在输注CIK过程中未出现不良反应.结论 CIK细胞在泌尿系统肿瘤免疫治疗中能诱导机体产生特异性的免疫反应,亦是新的杀伤肿瘤细胞的效应细胞,有较好的临床疗效.

人脐带间充质干细胞的培养鉴定及其向神经元细胞分化的研究

目的研究脐带间充质干细胞(UC-MSCs)在体外分离、培养、扩增和鉴定以及向神经元分化的方法.方法 30例符合入选标准的脐带采用贴壁法分离得到UC-MSCs,选用20%FBS血清培养液进行原代培养,再选用10%FBS扩增培养液进行一般传代.用神经分化培养基诱导UC-MSCs向神经细胞分化,在荧光显微镜下观察细胞形态,透射电镜观察UC-MSCs超微结构,用流式细胞仪分析其表面特性,采用直接和间接免疫荧光法检测细胞悬浮液的表型特征,用抗人神经纤维M、突触素、微管蛋白、半乳糖神经酰胺的单克隆抗体检测各代之间神经诱导形成率.结果 12 h后细胞开始贴壁生长,超微结构观察表现出未分化细胞的特征,CD123、CD49、CD29、CD73和CD166均为阳性,免疫荧光检测人UC-MSCs分化成神经细胞.结论 UC-MSCs长期传代培养,生物学特性稳定,具有向神经细胞分化的潜能.

CIK细胞杀瘤实验前后细胞表型与细胞毒性相关性研究

目的为了分析体外细胞因子诱导培养CIK细胞在体外杀瘤实验中的细胞表型变化与其杀瘤活性的相关性及为临床过继免疫治疗提供实验依据。方法采用体外诱导方法扩增培养正常人外周血淋巴细胞及单个核细胞,用CCK-8试剂检测培养14d的CIK细胞对SPC-A-1和BGC-823肿瘤细胞的细胞毒活性,应用流式细胞术测定杀瘤实验前后CD3+等6种不同表型细胞百分率的变化。结果在与效靶比成正比的条件下,体外实验CIK细胞对两种肿瘤细胞的杀伤率都与CD3+CD4+,CD3+CD4-CD8-细胞比例变化呈正相关(P<0.05),都与CD3+CD25+,CD3+CD28+,CD3+CD25+CD28+细胞比例变化呈负相关(P<0.05),对SPC-A-1细胞的杀瘤率与CD3+CD16+CD56+呈正相关(P<0.05)。结论本研究表明靶细胞抗原在活化细胞中起重要作用,测定培养细胞活化相关表型可以间接监测其杀瘤能力,为临床CIK细胞过继免疫治疗的应用提供实验依据。

CIK细胞治疗消化系统肿瘤患者的效果观察和护理体会

目的总结CIK细胞免疫治疗消化系统肿瘤临床疗效及心理护理经验。方法 2007年7月至2010年3月昆明医学院附属延安医院收治97例消化系统恶性肿瘤患者进行192次CIK细胞免疫治疗,对CIK细胞免疫治疗前的细胞制备、治疗时、治疗后不良反应观察进行记录,对疗效进行跟踪随访,同时对患者进行心理护理。结果 97例患者中,3例食管癌,治疗后主观症状改善明显。胰腺癌6例,有近期疗效4例。肝癌6例,有近期疗效5例。胆囊癌5例,有近期疗效4例。在CIK细胞免疫治疗的18例胃癌、41例结肠癌、18例直肠癌中,近期有效率分别为77.78%、65.8%和72.22%。患者能积极配合进行CIK细胞免疫治疗,使治疗获得满意的效果。结论 CIK细胞免疫治疗为综合治疗的有效手段之一,对提高疗效、改善生活质量有重要意义。

CIK细胞治疗妇科肿瘤的临床研究

目的观察细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)体外细胞毒活性,并观察CIK细胞治疗妇科肿瘤的近期临床疗效、免疫学活性及副反应.方法共收录2007年7月至2010年3月22例妇科肿瘤患者进行CIK细胞治疗,其中卵巢癌11例,子宫癌11例.经标准治疗方案治疗的患者,取外周血分离单个核细胞(PBMC),体外诱导出CIK细胞培养后,观察CIK细胞表型,用MTT法测体外细胞毒活性.所有患者均接受一定剂量的CIK细胞过继免疫治疗,观察其近期临床疗效、免疫反应、不良反应.结果当效靶比为16:1、8:1时,CIK细胞体外细胞毒活性杀伤率分别(82.33±9.35)%和(61.59±13.59)%.卵巢癌11例,近期疗效评价中,部分缓解4例,近期有效率为66.67%,疾病控制率为66.67%.子宫癌11例,近期疗效评价中,部分缓解6例,近期有效率为100%,无肿瘤进展时间为4～26个月,中位无肿瘤进展时间为13个月.与CIK细胞回输前相比,患者CD3+、CD4+、CD8+均有明显的升高(P<0.05),这表示可以诱导患者产生特异性的免疫反应.22例患者在输注CIK过程中未出现不良反应.结论 CIK细胞对妇科肿瘤有较好的临床疗效.

白细胞介素6启动子区域基因多态与复发性自然流产相关性的研究进展

复发性自然流产(RSA)是多基因遗传变异和环境等多重因素共同作用的结果。成功的妊娠依赖于Th1和Th2的免疫平衡,白细胞介素6(IL-6)作为Th2型细胞因子,是维持Th1/Th2平衡的重要因素之一。IL-6基因启动子区-174G/A和-572G/C与IL-6表达水平相关,从而影响流产的发生。该文就IL-6启动子区域基因多态性与RSA的相关性予以综述。

装配式预制混凝土楼梯裂缝原因与控制措施

装配式建筑在我国进入快速发展时期,大量预制混凝土构件、部品被用于工程,本文结合两例预制混凝土楼梯裂缝质量事故检测鉴定过程,分析两类楼梯裂缝产生原因,提出质量控制措施,希望生产单位进入工业化生产模式,从生产工艺、管理、监督等环节提高技术水平,把装配式预制混凝土构件、部品打造成高精度高质量的工业制造品。

民房质量问题及解决方法

近年民房质量问题非常突出,质量事故频发,本文结合工程实例分析民房质量问题产生原因,结合目前农村实际情况提出以村为单位的民房质量管理办法,希望能对减少民房质量事故有所帮助。

细胞因子诱导外周血单个核细胞的转录和蛋白表达研究

采用干扰素-γ、抗CD3单克隆抗体和IL-2体外诱导扩增外周血单个核细胞成为CIK细胞,并于诱导培养前及培养第15 d时分别收集细胞样本。在对培养前后细胞的增殖、形态及表面标志变化检测的同时,提取总蛋白进行定量、双向电泳和银染。利用ImageMasterTM软件对培养前后表达相同和不同的蛋白质点进行分析,并选择其中24个蛋白质点进行质谱鉴定。对于部分培养前后具有代表性的蛋白,进一步采用qPCR技术分析其的转录情况。结果表明,培养前后细胞的蛋白质组学特征是完全不同的,相同表达蛋白点主要与基因的转录因子和细胞骨架相关,诱导后特异表达蛋白主要与细胞生长、增殖相关。虽然在转录与蛋白水平上呈现出部分负相关现象,由于蛋白质组才是基因表达的最终形式,结合蛋白差异研究结果提示,经细胞因子诱导后,CIK细胞的大量扩增与细胞内蛋白表达改变相关。

人外周血淋巴细胞体外诱导培养前后细胞表型与细胞毒活性相关性研究

为了分析体外细胞因子诱导培养CIK细胞过程中细胞表型的变化与其杀瘤活性的相关性及为临床过继免疫治疗提供实验依据,本研究采用体外诱导方法扩增培养正常人外周血淋巴细胞及单个核细胞,应用流式细胞术测定培养前、培养第7天和第14天的CD3^+等15种不同表型细胞百分率的变化,用CCK-8试剂检测第7天和第14天的细胞毒活性。结果显示,扩增培养后T细胞活化表型的表达和细胞毒活性在第7天最强,与其细胞表型CD3^+CD25^+、CD3^+CD28^+、CD3^+CD25^+CD28^+、CD3^+CD4^+呈正相关(P<0.05),与CD3^+CD45RA^+CD45RO^+呈负相关(P<0.05)。本研究表明测定培养细胞活化相关表型可以间接监测其杀瘤能力,为临床CIK细胞过继免疫治疗的应用提供实验依据。

TLR4基因Asp299Gly、Thr399Ile错义突变与强直性脊柱炎的相关性研究

强直性脊柱炎是一种以中轴关节受累为主要病变的自身免疫性疾病.新近的研究显示,TLR4基因多态与强直性脊柱炎的发生和病情发展有关,但迄今尚未见对中国人群的研究报道.该研究以病例-对照研究策略,采用PCR-RFLP和直接测序的方法,在107名强直性脊柱炎病例和112名健康对照个体中,对TLR4基因位于第3外显子编码区的rs4986790和rs4986791位点,即Asp299Gly和Thr399Ile错义突变进行多态检测.结果显示,在病例和正常对照样本中,均未检测到这2个位点的多态性,提示这2个位点多态与强直性脊柱炎的发生无关.这是首次在中国云南汉族人群中进行的TLR4基因多态与强直性脊柱炎的关联研究.