hGM-CSF基因穿梭表达载体的构建及其在鱼腥藻7120中的克隆

人粒—巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)作为一种造血生长因子,能够刺激T细胞和巨噬细胞增殖、成熟和分化,具有极其重要的免疫调解功能。本研究运用PCR方法,从质粒pAG-MT-8中克隆该基因,并在其5′端添加有利于在蓝藻细胞中高效表达的SD序列,然后插入到表达载体(pRL-439)强启动子PpsbA的下游,进一步与穿梭表达载体pDC-08相连构建成穿梭表达载体pDC-GM。利用三亲接合转移方法将该穿梭表达载体(pDC-GM)转入丝状鱼腥藻7120,通过相应抗生素筛选后得到能稳定遗传的转基因藻。以该转基因藻的基因组DNA为模板进行PCR检测,结果表明hGM-CSF基因已转入鱼腥藻7120。这是首次尝试把蓝藻作为制备重组hGM-CSF的新宿主,具有潜在的经济价值和社会效益。

蓝藻基因转移系统的选择与建立

蓝藻是一类进行光合放氧的原核生物 ,因其结构的特殊性 ,已成为表达外源基因的理想宿主之一。然而外源基因转化系统的选择与建立一直影响着蓝藻基因工程的快速发展。总结了各类蓝藻基因转移系统的特点、影响因素、各系统间的优缺点、以及不同蓝藻株系最适基因转移系统的选择等 ,为利用蓝藻进行遗传操作提供可能 。

鱼腥藻Ⅱ型果糖-1,6-二磷酸醛缩酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的高效表达

随着更多蓝藻全基因组序列测定完成,蓝藻基因工程研究现已进入后基因组时代。2001年Kaneko等完成了鱼腥藻7120全基因组序列测定,随后人们利用生物信息学的方法对其中一些基因的功能进行了预测,包括II型果糖1,6二磷酸醛缩酶(FBA)基因,但该基因是否编码II型果糖1,6二磷酸醛缩酶及该产物的相关酶学特性至今尚未见报道。通过PCR克隆到鱼腥藻7120中预测的II型FBA基因,插入到质粒pET32a的相应位点,构建成原核表达载体pETFBAII。蛋白电泳结果显示,重组蛋白的表达量占总蛋白含量的23.4%,与蛋白分子标记相比,其分子量约为40kDa。酶学活性测定结果表明,其蛋白粗提物的比活力为11.8U(mgprotein)-1,具有标准II型FBA活性。证实了Cyanobase中关于该基因功能的预测,也为进一步研究该基因表达产物的生理生化特性及功能提供了重要资料。

环境因子对转hGM-CSF基因鱼腥藻生长与光合的调节

以转hGM-CSF基因鱼腥藻7120为对象,分别探讨了温度、pH、光强等环境因子和外加碳、氮等基本营养源对转基因藻生长与光合活性的影响.结果表明:当基本环境因子为30℃、pH9.5和90μmol·m-2·s-1光强时,转基因藻生长最快.添加10mmol·L-1的NaHCO3或5g·L-1的葡萄糖对转基因藻的光合活性促进最大;但外加氮源却抑制了转基因藻的光合活性.

启动子Pcpcβ提高鱼腥藻7120中hGM-CSF基因表达效率的研究

利用聚球藻7002中编码藻蓝蛋白基因(cpcβ)的启动子(Pcpcβ),替代穿梭表达载体pDC-GM中的启动子PpsbA,启动外源人粒巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)基因在鱼腥藻7120中的表达。蛋白免疫印迹证实,在含Pcpcβ启动子的cGM藻株中,hGM-CSF基因的表达水平比原先构建的含PpsbA启动子的GM藻株中提高了90%,且该基因的高效表达对宿主细胞的生长未产生明显影响。结果表明,对于在蓝藻中表达hGM-CSF基因而言,Pcpcβ启动子可能是较适宜的强启动子之一。

中小型高校系资料室应予撤并

中小型高校系资料室是我国高教全盘承袭前苏联模式 ,且在我国计划经济体制条件下的产物 ,现已不能完全适应高校教学体系、专业结构、课程设置急剧变化的需要 ;其在运行过程中存在的诸多弊端 ,给学校图书资料管理利用 ,经费投入等工作造成较多问题 ,因此 ,根据国家教委有关规定 ,对中小型高校系资料室应予撤销 ,合并到校图书馆。

阳澄湖中华绒螯蟹及当前它所面临的问题

本文综述了阳澄湖中华绒螯蟹的生物学特性、食用价值、药用价值和经济价值 ;同时 ,从水体富营养化、重金属污染、生态失衡及蟹疾病和性早熟等五个方面指出了当前中华绒螯蟹所面临的问题 。

滚筒式固液分离机驱动及检测控制系统

介绍了煤科总院北京建井所研制成功的滚筒式固液分离机中的驱动及检测控制系统。该机用于煤矿钻井工程,通过絮凝和机械脱水结合,实现成井后泥浆不再占地,有效地促进了钻井法的发展,并在尾矿处理试验中取得一定进展。

考察干部须掌握好的三个辩证关系

考察干部须掌握好的三个辩证关系魏兰珍考察了解干部是知人的根本环节，只有把这个环节的工作做好，才能真正做到知人善任。笔者根据多年从事组织人事工作的实践，觉得要做好干部考察工作，必须正确处理好以下三种辩证关系：一、考察标准的高与低在考察了解干部的工作中必...

增强型绿色荧光蛋白在集胞藻6803中的表达

利用聚球藻7942热休克基因groESL的启动子和报告基因egfp,构建了表达载体pUC-Tegfp并转化集胞藻6803,并通过所制备抗体对转基因藻进行蛋白免疫印迹检测.结果发现,在转基因藻株T-egfp的细胞粗提液中含有能与eGFP抗体特异结合的蛋白质,表明外源增强型绿色荧光蛋白基因(egfp)在集胞藻6803中成功表达.

利用同源重组构建蓝藻集胞藻6803ndhM基因突变株及其分子鉴定

蓝藻NADPH脱氢酶(NDH-1)是一种重要的光合膜蛋白复合体,参与CO2吸收、围绕光系统I的循环电子传递和细胞呼吸。迄今为止,人们已在蓝藻细胞中鉴定出15种NDH-1复合体亚基(NdhA-NdhO)。然而,人们对NdhM亚基的研究尚不够,至今未见有反向遗传学等方面的研究。在通过构建同源重组载体、自然转化和多次继代筛选后,对转化子进行了PCR和蛋白免疫印迹鉴定。研究结果表明,壮观霉素基因已成功地插入到ndhM基因的保守区域,并完全破坏了ndhM基因的蛋白表达,从而获得了ndhM基因缺失的突变株,为进一步研究NdhM亚基对NDH-1复合体的稳定性和生理功能等奠定了试验基础。

发菜NdhK的抗体制备与蛋白表达

发菜是一种陆生蓝藻,分布于一些干旱和半干旱区域。其NADPH脱氢酶(NDH-1)是一种重要的光合膜蛋白复合体,参与CO2吸收、围绕光系统Ⅰ的循环电子传递和细胞呼吸。为研究该物种中ndhK基因的功能,本研究利用特异性引物,通过PCR方法从发菜中扩增ndhK基因并克隆到原核表达载体pET-32a上,得到表达载体pET-32a-ndhK,将其转入大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,得到分子量大小为43 kDa的融合蛋白NdhK。随后,采用亲和层析,对融合蛋白进行纯化回收,并以此回收蛋白作为抗原进行免疫,制备NdhK的多克隆抗体。最后,利用Western blot蛋白免疫印迹对所得抗体的特异性进行验证。从而为进一步探索发菜ndhK基因的功能以及发菜中NDH-1复合体各亚基的作用进行前期准备。

集胞藻6803中ndhK基因启动子结构与功能的初步分析

ndhK是蓝藻NDH-1复合体的1个亚基编码基因,其表达受低浓度CO2和高光的诱导,对于蓝藻应对低CO2胁迫起着重要的作用。为进一步阐明ndhK基因的转录调控机制,本研究利用5′-RACE(Rapid Amplification of cDNAEnds,cDNA末端快速扩增)技术鉴定了该基因的转录起始位点,利用生物信息学预测发现ndhK基因含有4个可能的启动子,构建了含增强型黄色荧光蛋白报告基因的启动子探针型载体,并利用蛋白免疫印迹的方法进行检测。结果表明:在集胞藻6803的ndhK基因上游的-374～-274bp,-438～-374bp,-604～-543bp,+1～+52bp区域具有较高的启动子活性,而-543～-440bp区域则可能存在1个抑制ndhK基因表达的转录因子。

groESL启动子提高集胞藻6803外源egfp基因表达效率的研究

利用聚球藻7942中热激蛋白基因groESL的启动子(PgroESL)驱动外源egfp基因在集胞藻6803(Syn-echocystis sp.PCC6803)中的表达,通过蛋白免疫印迹技术研究不同温度条件下该外源基因的表达情况。结果表明,42℃诱导30min后,PgroESL启动子能显著提高转基因藻Pg中外源egfp基因的表达,使外源基因的表达量比正常温度条件下提高3.4倍。研究表明,聚球藻7942中groESL操纵子的启动子区域是一类可以受温度诱导的强启动子,能够显著提高宿主细胞中外源基因的表达效率。

我国经济增长方式难以转变的体制思考

长期以来,粗放型的经济增长方式已使我们吃尽了苦头。在探讨我国经济增长方式由粗放型向集约型转换这一严肃课题时,必须看到在粗放型增长方式背后,隐藏着较深的经济体制成因。因此本文将从体制角度出发,剖析我国粗放型经济增长方式的成因并提出经济增长方式转变的思路。 一、粗放型经济增长方式难以转变的体制原因 经济体制是对全社会资源配置方式的总体规定,而经济增长方式则是经济体制的具体体现。有什么样的经济体制,必然有什么样的经济增长方式。

硫酸镁在治疗急性脑梗死中的作用

为探讨硫酸镁对急性脑梗死的治疗作用，我们将64例急性脑梗死患者在综合治疗基础上加用25％硫酸镁针剂，并与同期内40例行综合治疗患者对照，结果治疗组神经功能损伤恢复程度高，时间短，总有效率95．3％，较对照组好，差异极显著（P＜0．01）。表明治疗急性脑梗死时补充镁离子是必要的。

试论市场经济体制建立过程中的人才流动

试论市场经济体制建立过程中的人才流动魏兰珍市场经济是一种以市场力量为手段配置生产要素以期经济效益最大化的经济形式。它的突出特点是：一切资源和生产要素都要在市场中流动，在流动中逐步得到科学的合理配置。人才作为社会再生产的重要资源，同样要求在市场中流动，...

谈高校校系两级文献资源共享问题

谈高校校系两级文献资源共享问题魏兰珍近几年，围绕文献资源共享问题，图书馆界探讨研究、出谋献策者甚多，见解、成果颇丰。然而，其中从定观上探讨诸如馆际间建立网络、开展协作者较多，而从微观上研究高校校内文献资源共享问题的则较少。但在现实中，高校内特别是中小...

抓住发展机遇 深化图书馆改革

抓住发展机遇 深化图书馆改革魏兰珍在江泽民同志关于“我国经济体制改革的目标是建立社会主义市经场经济体制，以利于进一步解放和发展生产力”的理论指导下，我国社会主义市场经济体制已经开始发育和运行，国家的经济建设和精神文明建设在迅速发展，这些势必对图书馆工...

装岩机隔爆兼本安型真空开关的研究

装岩机隔爆兼本安型真空开关的研究煤科总院北京建井研究所魏兰珍１概述随着掘进机械化的发展以及采煤机械化的成功，在煤矿岩巷掘进中，诸如打眼用的钻车，装岩用的装岩机、转载机及装、钻、锚机组等不断得到广泛应用，但原先配套的防爆电器基本上还停留在五、六十年代的水平上，普遍适应不了现代掘进设备的需要。侧卸装岩机是目前岩巷掘进中广泛使用的装载机，它具有插入力大、斗型大、生产率高等特点，采用履带行走，行走部靠电机驱动，经常处于频繁过载起动状态。由于井下工况恶劣，有瓦斯煤尘爆炸危险，原有电气系统（简称旧式开关）中的接触器极易烧坏、线圈易振坏、中间继电器的抗振性能差，防爆按钮和行程开关也适应不了井下频繁起动以及三防要求，从而难以正常发挥装岩机的效率。如何减少旧式开关电控系统的故障，延长电气系统元器件的使用寿命，不断提高装载机械的有效使用率，北京建井研究所等单位经过几年的努力，进行了大量的试验与实践，研究成功了侧卸装岩机隔爆兼本质安全型真空开关（简称新型开关），并已得到广泛应用，取得了良好效果。２旧式开关需要解决的问题我国煤矿机械设备，过去使用的配套防爆开关主要为隔爆型产品，存在的主要问题及其原因为：由于不能采用全密封结构。