分离自北京口岸进出口食品的大肠埃希氏菌耐药性筛查分析

为了解北京口岸进出口食品中分离的大肠埃希菌的耐药情况。采用微量肉汤稀释法,分析111株进出口食品中分离的大肠埃希菌对33种抗生素的耐药性。结果显示,在111株大肠埃希菌中,88株有耐药性,耐药率为79.3%,其中38株菌为多重耐药。头孢氨苄耐药率最高,达62.2%,四环素、萘啶酸、复方新诺明耐药率在25%~35%之间,同时检出ESBLs大肠埃希菌9株。北京口岸出口食品中分离大肠埃希氏与国内其他地区分离菌株相比菌耐药率普遍偏低,耐药谱基本一致。出口食品分离的大肠埃希菌多重耐药检出率(49.3%)远高于进口食品来源的大肠埃希菌(9.5%)。在111株大肠埃希菌中,ESBLs检出率为8.2%,产ESBLs大肠埃希菌不仅有较高的耐药率且多重耐药情况严重。应继续倡导畜牧业减少抗生素的使用,合理使用高效抑菌抗生素,避免滥用。

美国转基因植物食品监管体系介绍

美国对转基因食品的监管分工明确,权责清晰。从转基因植物的研发到商业化,再到转基因植物食品的加工和上市,不同部门分工合作。美国的转基因植物食品的监管主要由农业部和食品药品监督管理局两个部门——农业部和食品药品监督管理局协同监管。农业部负责转基因植物的监管,主要的监管部门是农业部下属的动植物安全检疫局,食品药品监督管理局负责转基因植物食品的监管。本文对美国转基因植物食品的监管体系进行分析介绍,为我国转基因食品的监管提供参考。

实时荧光定量RT-PCR法快速定量检测果蔬中星状病毒

目的:针对不同果蔬表面建立星状病毒富集与RNA提取方法,结合已报道的实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)引物和探针,实现果蔬中星状病毒的高灵敏快速定量检测。方法:利用10倍梯度稀释的星状病毒c RNA分子检测Ct值及其对应的初始浓度,构建标准曲线,为星状病毒的定量检测提供参考。将ISO/TS 15216-2:2013针对果蔬中诺如病毒和甲肝病毒RNA的提取方法用于星状病毒的检测,利用人工感染的大白菜和草莓样品,分析病毒回收率、灵敏度及检测重复性。最终通过60份果蔬样品的检测验证该方法的实用性。结果:所建立的实时荧光定量RT-PCR方法扩增效率达95.9%,检测低限为5.6拷贝/反应。人工感染的大白菜样品中病毒回收率在0.94%~9.63%之间,而人工感染草莓样品中病毒回收率最高达1.03%。对同一感染浓度的样品在不同时间的检测结果变异系数均小于2%。最终检出1份来自北京农贸市场的草莓样品为星状病毒阳性,检测阳性率达1.67%。结论:建立的果蔬中星状病毒荧光RT-PCR定量检测方法快速、高效、灵敏,在食源性病毒的日常筛查和风险评估工作中具有重要的应用价值。

2008～2017年间北京进出口水产品中副溶血性弧菌耐药性分析

目的了解北京进出口水产品中副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)的耐药情况。方法对2008~2017年间北京进出口水产品中分离出的320株副溶血性弧菌应用药敏纸片扩散法(K-B法)进行21种常用抗生素药敏测试。结果 89.1%的实验菌株同时对氨苄西林耐药,而对环丙沙星、诺氟沙星、庆大霉素、多粘菌素B、亚胺培南全部敏感;分别有高达94.7%和82.1%的菌株对红霉素和链霉素表现为中介。结论实验菌株存在大量中介耐药和异质性耐药的情况,应进一步加强水产品中副溶血性弧菌耐药性的监测工作,以期指导临床和水产养殖中抗生素的使用。

北京港口水产品中非O1/O139群霍乱弧菌MLST分型研究

为了分析2008-2011年北京港口进出口水产品中非O1/O139群霍乱弧菌的多位点序列分型(MLST)特征,为霍乱弧菌导致食品安全事件的有效溯源提供理论支持,选取2008-2011年北京港口食源性非O1/O139群霍乱弧菌分离株67株,采用毒力基因PCR检测并用MLST分析。结果:毒力基因PCR检测结果显示,所有菌株均未检出CTX、tox R、hly A 3种基因。菌株的MLST结果显示,菌株可被分为62个ST型,具有明显的多样性。其中原有STs 2个,新发现STs 60个。同ST型菌株均来源于同一国家,本实验数据同pubmlst数据库中数据进行分析,有7个STs可以归为7个克隆组,它们来源于中国和泰国,同组内STs来源于中国、澳洲、法国、泰国和非洲。表明北京港口非O1/O139群霍乱弧菌遗传特征复杂多样,MLST方法可作为可靠的食品污染溯源手段,相同地区的菌株有一定的地域特点,此研究丰富了现有霍乱弧菌MLST数据库,为其溯源提供支持。

环介导等温扩增法检测转基因玉米MON88017品系

建立了转基因玉米MON88017品系环介导等温扩增法检测方法。针对MON88017玉米基因组与外源基因结合处序列,设计5条特异引物,并对反应条件、特异性、灵敏度、稳定性、结果判断方法等参数进行研究,同时与实时荧光PCR检测方法进行比较,最终进行了5家同类型实验室的协同验证。结果表明本研究所建立的MON88017环介导等温扩增检测方法具有良好的特异性,其最低检出限为0.5%,在特异性、灵敏度和检测范围等指标上均优于传统的PCR技术,并且不依赖昂贵的大型设备,可以实现现场快速检测,检测成本与检测所需时间远低于实时荧光PCR。该方法具有快速、简便的优点,能满足实际工作要求。

RAPID'Sakazakii Agar克罗诺杆菌属显色培养基的性能评价

依据RSA快速筛选方法及GB 4789.40方法,在特异性、检测灵敏度、样品种类、培养条件等方面对伯乐公司RAPID'Sakazakii Agar克罗诺杆菌属显色培养基的性能进行评价。结果显示,该培养基特异性和选择性好,具有高检出率、易观察、易配制、使用方便等特点,可以作为一种选择性培养基在微生物检测行业推广使用。

内燃机车负荷记录仪的研制

针对按机车走行公里数确定各种修程的不合理现状 ,研制出能记录机车运行各种负荷大小及工作时间等的仪器 ,即内燃机车负荷记录仪。讲述了该仪器的功能、结构组成及性能参数等 。

乘务管理中的饮酒检测微机管理

介绍如何实现乘务管理中的饮酒检测微机化管理,并就研制中的专用传感器、计算机接口、管理控制软件等问题作了详细的探讨。

食品中Escherichia coli O157:H7微滴数字PCR绝对定量检测方法的建立

为建立食品中Escherichia coli O157:H7的微滴数字聚合酶链式反应(droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR)快速定量检测方法,针对E.coli O157:H7的特异性单拷贝基因hlyA设计引物探针,并进行特异性、灵敏度和重复性实验,同时通过人工污染三文鱼样品的检测,比较平板计数法、real-time PCR和ddPCR方法的测定值效果。结果表明,所建立的E.coli O157:H7 ddPCR检测方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性。细菌纯培养液中定量限为105 CFU/mL,检出限为25 CFU/mL,人工污染三文鱼样品中检出限为110 CFU/g。对不同人工污染水平的三文鱼样品,ddPCR与平板计数的测定值结果无显著性差异(P>0.05),比real-time PCR方法的测定值结果更加稳定、准确。因此,本研究建立的ddPCR方法能够更加快速、准确、灵敏、特异地绝对定量检测食品中E.coli O157:H7。

克罗诺阪崎肠杆菌微滴数字PCR定量方法的建立

为建立克罗诺阪崎肠杆菌的微滴式数字聚合酶链式反应(droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR)快速定量检测方法,针对克罗诺阪崎肠杆菌的特异性单拷贝PapC基因设计引物探针,进行特异性、灵敏度和重复性实验,本文通过对纯菌液进行检测,比较平板计数法、实时PCR和ddPCR方法的定值效果。结果表明,所建立的克罗诺阪崎肠杆菌ddPCR检测方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性。克罗诺阪崎肠杆菌纯菌液中最低定量限为104 CFU/mL,最低检出限为16 CFU/mL。不同浓度的纯菌液的测定,ddPCR与平板计数的测定值结果偏差小于10%,比实时PCR方法的定值结果更加准确。因此,本研究建立的ddPCR方法能够快速、准确、灵敏、特异地定量检测克罗诺阪崎肠杆菌。

3种方法检测食品中致泻大肠埃希氏菌检测能力验证结果分析

目的提高食品中致泻大肠埃希氏菌的检测能力,促进实验室检测能力的提高。方法参照GB4789.6-2016《食品微生物学致泻大肠埃希氏菌检验》方法进行检测,采用VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定系统进行生化鉴定、血清学鉴定,对可疑菌落进行普通PCR确证试验。同时使用多重实时荧光PCR法以及基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionizationtime-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)分析鉴定可疑菌落。结果国标法和多重实时荧光PCR法能准确鉴定出目标菌,MALDI-TOF-MS可以检测大肠埃希氏菌,但无法区分致泻大肠埃希氏菌和肠出血性大肠埃希氏菌。结论3种方法各有优劣,同时使用,综合判断,能确保试验结果准确快速。

基于RT-dd PCR技术的食品中诺如病毒定量检测

目的:构建基于逆转录微滴式聚合酶链式反应(reverse transcriptase droplet digital polymerase chain reaction,RT-ddPCR)技术的食品中诺如病毒(norovirus,NoV)定量检测方法。方法:筛选引物探针,建立并优化GI、GII型NoV和MS2噬菌体一步法RT-ddPCR检测体系,确定特异性。利用NoV RNA标准物质和MS2噬菌体RNA确认RT-ddPCR检测体系的定量限、准确度和重复性。制备人工阳性样品,分析MS2噬菌体对定量结果的影响。结果:3个RT-ddPCR检测体系具有良好的特异性、准确度和重复性,NoV RT-ddPCR检测体系的定量限包含10~4~10~0拷贝/μL 5个数量级,MS2噬菌体RT-ddPCR检测体系定量限与NoV相当,添加与不添加MS2噬菌体的人工阳性样品的定量结果无显著差异(P≥0.05)。结论:NoV RT-ddPCR检测体系可准确定量NoV RNA,MS2噬菌体不影响定量结果,可作为过程控制的模式病毒被添加到食品中,指示回收率,计算食品中NoV实际载量。

北京进出口水产品中259株霍乱弧菌分离株的耐药性研究

目的对北京进出口水产品中259株霍乱弧菌分离株的耐药性进行研究。方法采用纸片扩散法对259株霍乱弧菌分离株进行药敏性试验,共选择10大类21种抗生素。结果所测试的259株菌株对庆大霉素、阿米卡星、诺氟沙星、妥布霉素、强力霉素及亚胺培南的敏感率高,均在95%以上;对除亚胺培南外20种抗生素都具有不同程度的耐药性,其中对链霉素和多粘菌素B耐药率较高,分别为36.3%和54.1%。所有菌株对21种抗生素均有不同程度的中介反应,其中链霉素、卡那霉素、多粘菌素B及红霉素中介率较高,分别为50.2%、44.0%、43.2%和83.4%;其中93株表现为多重耐药性。结论北京地区水产品中霍乱弧菌分离株对所测试的抗生素存在大量的中介和耐药情况,应加强对霍乱弧菌耐药性的监测力度。

水产品中创伤弧菌ddPCR定量方法的建立

选取创伤弧菌单拷贝基因met为靶基因,设计引物探针,建立对创伤弧菌准确定量的微滴式数字聚合酶链式反应(droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR)方法,并进行特异性、灵敏度和重复性实验,同时与实时PCR(real-time PCR)方法进行比较。结果显示,所建立的ddPCR方法可以快速、高效地检测出创伤弧菌,细菌纯培养物中其定量限可达323拷贝数/mL,检测限可达61拷贝数/mL,人工污染牡蛎样品中能最低能检测到1.13×10^2拷贝数/g的目标菌。对人工污染样品中目标菌的检测,ddPCR的定量结果约为平板计数结果的1.4倍,比real-time PCR方法的检测更加稳定准确。本研究建立的ddPCR检测方法能快速准确、特异、灵敏地定量检测创伤弧菌。

叠氮溴化丙锭-qPCR法定量检测植物乳杆菌

目的将叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,PMA)与实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qPCR)相结合,建立一种活性植物乳杆菌定量检测的PMA-qPCR方法。方法首先进行引物探针特异性验证,优化PMA反应条件,建立标准曲线,验证灵敏度,然后将该方法用于检测人工添加奶粉、米粉、酸奶样品以及冻干样品中的植物乳杆菌。结果最佳PMA浓度为2μg/mL,最佳曝光时间为10 min,建立的PMA-qPCR方法可以快速、高效、特异地检测植物乳杆菌,利用细菌纯培养物与对应Ct值建立标准曲线,可以看出纯培养物浓度与Ct值之间存在对应线性关系,相关系数(r^(2))为0.9992,最低检测限为15拷贝/反应体系,人工添加样品以及冻干样品检测中PMA-qPCR和平皿计数法结果的对数值进行配对t检验,显示在不同的人工添加样本以及冻干样品中均无显著性差异(P>0.05)。结论本研究建立的PMA-qPCR检测方法能快速、准确、特异、灵敏地定量检测活性植物乳杆菌。

A群轮状病毒一步法RT-ddPCR方法的建立

目的:建立A群轮状病毒(rotavirus,RV)一步法反转录微滴式数字聚合酶链式反应(reverse transcriptase droplet digital polymerase chain reaction,RT-ddPCR)方法。方法:筛选特异性引物探针,建立并优化一步法RT-ddPCR方法,确定特异性;制备含A群RV目的片段的RNA标准物质,确定建立方法的检测限、准确度、重复性和复现性。A群RV阳性粪便样品梯度稀释后制作染毒液,制备人工染毒样品,分离病毒与食品基质,浓缩得到病毒悬液,提取RNA后,比较不同食品基质中一步法RT-ddPCR检测结果。结果:建立的一步法RT-ddPCR方法定量限为58000.00~5.80拷贝/μL,具有良好的特异性、准确性、灵敏度、重复性和复现性。各染毒水平下A群RV检出量和回收率在不同食品基质中存在显著性差异(P<0.05)。结论:研究建立的一步法RT-ddPCR方法可准确定量A群RV RNA,食品基质可影响一步法RT-ddPCR检测结果,通过病毒回收率可计算食品中A群RV的实际载量。

3M PetrifilmTM肠杆菌科测试片的评价

目的评价3M PetrifilmTM肠杆菌科测试片在食品检测中的准确性和适用性。方法以SN/T 2775—2011的要求为基础,采用3M PetrifilmTM肠杆菌科测试片法和参考方法GB 4789.41—2016进行实验评价,包括线性和准确度、包容性和排他性、耐变性、批间变异及协同实验。结果测试片方法检测结果与国家标准方法检测结果比较无显著差异,耐变性和批间结果亦无显著差异。结论3M PetrifilmTM肠杆菌科测试片能满足食品样品的检测要求,可以作为检测肠杆菌科细菌的一种有效检测方法。

食品中人星状病毒的定量检测方法

目的:应用一步法微滴数字PCR方法(RT-ddPCR),建立一种食品中人星状病毒(HAstV)定量检测方法。方法:筛选引物探针,建立HAstV RT-ddPCR方法;利用其它常见食源性病毒RNA,确定特异性;梯度稀释HAV RNA标准样品确定检测限、准确度和重复性。用已知效价的MS2噬菌体制备人工污染样品,研究RT-ddPCR方法在不同种类食品基质中的检测限和回收率,比较2种RNA提取方法的病毒检出量。结果:HAstV RT-ddPCR方法准确度、灵敏度和重复性良好,检测限105~100拷贝/μL,最低定量限5拷贝/μL;不同种类食品基质的检测限分别为7.2×106~3600拷贝(贝类消化腺),7.2×106~3600拷贝(硬表面食品),7.2×106~7200拷贝(生食蔬菜)、7.2×107~7200拷贝(软质水果);高浓度污染剂量时,Trizol裂解结合磁珠纯化方法病毒检出量显著低于Trizol裂解提取方法(P<0.05);不同种类食品基质中模拟病毒回收率存在显著差异(P<0.05)。结论:本研究建立的食品中HAstV定量检测方法可有效定量检测HAstV,可通过病毒回收率计算样品中HAstV的实际载量。

MS2噬菌体在贝类食源性病毒检测中过程质控应用

目的研究MS2噬菌体作为过程质控品在贝类食源性病毒检测中的应用。方法采用双层琼脂培养法制备MS2噬菌体悬液,计算效价;实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检验其稳定性;比较3种RNA提取方法的提取效率,确定M S2噬菌体的最适添加量范围;分析M S2噬菌体添加对贝类食源性病毒检测的影响。结果稳定性研究表明-20℃和-80℃28 d MS2噬菌体(悬液的效价浓度为7.13×1011pfu/m L)时RNA含量无明显变化[t=0.464,P=0.653(-20℃);t=0.602,P=0.561(-80℃)]。MS2噬菌体最适添加量范围为7.13×108~7.13×107pfu/m L。在最适添加范围内,试剂盒方法和Trizol裂解结合磁珠纯化方法回收率均>1%。2种阳性样品均被检出,其Ct值比较接近,M S2噬菌体对贝类食源性病毒检测无影响(t=0.170,P=0.873)。结论M S2噬菌体可作为贝类食源性病毒qRT-PCR检测的过程质控品,是监控假阴性结果的一种简便有效的方法。