呼吸道标本热灭活处理对SARS-CoV-2核酸检测结果的影响

新型冠状病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019,COVID-19)的诊断依赖于流行病学史、临床表现和实验室检查,其中呼吸道标本的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸检测在实验室诊断中起重要作用[1—2]。由于标本的强传染性,对实验人员的安全防护造成较大挑战,可靠且不影响检测结果的标本病毒灭活方法,减少实验室感染显得非常重要。相关研究提示中东呼吸综合征冠状病毒56℃灭活大约25 min能明显降低病毒载量[3],将血样热灭活后血清学检测是一种常用的实验室方法,有研究提示[4—5]将血浆经56℃热灭活30 min后进行不同感染性抗体检测,结果不尽相同。因此,传染性标本的灭活处理对于检测结果的影响可能与病原种类及检测项目有关,目前基于对其他冠状病毒理化特性的研究,56°C加热30 min可有效灭活SARS-CoV-2病毒[6],但是该灭活方案对病毒核酸检测结果的影响还不清楚。本研究利用COVID-19确诊患者的痰液和咽拭子呼吸道标本,采用热灭活处理方法,检测分析不同靶点的核酸水平变化,主要目的是了解灭活呼吸道标本病毒的方法对病毒核酸检测结果的影响,为实验室病毒灭活处理后SARS-CoV-2核酸结果的变化提供证据支持。

慢性乙型肝炎患者血脂水平的影响因素分析

目的通过多重线性回归方法探讨影响慢性乙型肝炎患者血脂水平的因素。方法慢性乙型肝炎患者323例,其中轻度患者161例、中度患者48例、重度患者77例、重症肝炎患者37例;健康者(对照组)39例。采用全自动生化分析仪检测乙型肝炎患者和对照组的肝功能、肾功能、血脂、血糖等指标,荧光定量PCR分析仪检测被测者的病毒载量,全自动血凝仪检测血浆凝血酶原活动度(PTA)。比较上述指标在各组间的差异,并采用多重线性回归分析探讨影响患者血脂水平的因素。结果慢性乙型肝炎患者血脂水平随肝脏功能的恶化逐渐下降。通过多重线性回归分析可见慢性乙型肝炎患者的血脂水平受PTA、肝功能等多因素影响,而年龄、性别、血糖、病毒载量、肾功能等因素对慢性乙型肝炎患者的血脂水平影响较小或无影响。总胆固醇、三酰甘油水平受PTA影响较大,而高密度脂蛋白、低密度脂蛋白水平受白蛋白影响较大。结论慢性乙型肝炎患者血脂水平主要与肝脏病变情况密切相关;检测慢性乙型肝炎患者血脂水平,对判断病情、估计预后有参考价值。

HBeAg阳性患者中乙型肝炎病毒基因型分布及YMDD变异位点分析

目的通过研究乙型肝炎患者HBV基因型的分布及YMDD变异位点的分布特点,了解两者之间的关系,探讨临床意义。方法选取在我院门诊和住院部就诊的HBeAg阳性并经拉米夫定治疗两年以上的慢性乙型肝炎患者137例,用实时荧光PCR方法检测HBV DNA分型情况,用LDR方法检测YMDD位点变异情况。结果 137例患者中21例未能检测出基因型,其中男性17例,女性4例;其余116例标本确定了感染病毒的基因型,包括男性94例,女性22例;其中A型2例(1.72%)、B型19例(16.38%)、C型91例(78.45%)、D型4例(3.45%);分型成功率为84.67%(116/137)。116例标本中有41例患者的感染病毒中检测到了YMDD变异位点,变异发生率为35.35%。其中B基因型中检出7例(36.84%);C基因型中检出33例(36.26%);D基因型中检出1例(25.0%);A基因型中未检测出变异位点。B、C基因型中变异位点的检出率高于D型,但各基因型之间差异无统计学意义(χ2=1.392,P>0.05)。在41例变异中,其中I突变占60.9%,V突变占31.7%,I/V共生突变占7.4%。结论兰州大学第一医院所在地区患者中HBV基因型主要以C型为主,其次是B型,也有少量D、A型存在;B、C基因型的YMDD位点发生突变的几率相近。突变几率与基因型无关。

阿德福韦酯联合拉米夫定治疗慢性乙型肝炎病毒耐药分析

目的通过研究乙型肝炎患者乙型肝炎病毒(HBV)基因型的分布特点及耐药位点的分布,了解拉米夫定联合阿德福韦酯治疗慢性HBV耐药情况的发生,以探讨其临床意义。方法选取在我院门诊和住院部就诊的曾经单用过拉米夫定或阿德福韦酯治疗失败的患者,再次使用拉米夫定联合阿德福韦酯治疗2年以上的慢性乙型肝炎患者73例,应用实时荧光聚合酶链式反应(PCR)方法检测HBV DNA分型情况,用连接酶检测反应(LDR)方法检测位点变异情况。结果 73例中14例未能检测出基因型,基因型检出率80.8%(59/73);其余59例标本检测到了基因型,其中B型11例(18.6%)、C型43例(72.9%)、非B非C型5例(8.5%)。治疗1年的59例标本中有9例患者检测到了耐药位点,耐药发生率为15.3%,其中B基因型中检出2例(18.2%),C基因型中检出7例(16.3%),非B非C型基因型中未检出;各基因型中变异位点的检出率差异无统计学意义(χ2=1.286,P>0.05)。治疗2年的59例患者中有24例患者检测到了耐药位点,耐药发生率40.7%,其中B基因型中检出4例(36.4%),C基因型中检出18例(41.9%),非B非C型基因型中检出2例(3.3%);各基因型中变异位点的检出率差异亦无统计学意义(χ2=6.578,P>0.05)。治疗2年后在24例耐药患者中发生相关阿德福韦酯耐药率33.3%(8/24),发生相关拉米夫定耐药率58.3%(14/24),发生联合耐药率8.3%(2/24)。结论兰州地区HBV基因型主要以C基因型分布为主,其次是B型,还有其他基因型存在;不同基因型耐药发生概率相近,突变概率与基因型无关。对单用拉米夫定或阿德福韦酯治疗失败后的患者再次使用两者联合治疗,亦有较高的耐药风险。

葡萄糖神经酰胺及其代谢酶与肝脏疾病的关系

真核细胞膜及细胞器膜富含脂质,脂质不仅是细胞膜和细胞器膜的结构载体,细胞的许多功能均离不开脂质。脂质是一类具有重要结构和功能的化学物质,在多种肝脏疾病中扮演重要角色。糖鞘脂是脂质中重要的一类分子,其以葡萄糖神经酰胺(GC)为代谢枢纽,而GC是由葡萄糖神经酰胺合成酶(GCS)催化神经酰胺产生。GCS作为糖鞘脂合成代谢的关键酶,其活性直接影响细胞内GC水平,进而影响体内细胞的功能,并可导致相关疾病的发生。然而,目前关于GCS在肝脏疾病中作用机制的研究较少。因此,深入了解GC及其代谢酶的生物学功能将有助于揭示相关肝脏疾病的发病机制。

乙型肝炎病毒对乙肝患者血脂水平的影响及其临床意义探讨

目的:评价不同载量的乙型肝炎病毒对乙肝患者血脂水平的影响。方法:采用全自动生化分析仪检测412例慢性乙型肝炎患者的肝功、肾功、血脂、血糖等指标,采用荧光定量PCR检测被测者的病毒载量,采用全自动血凝仪检测血浆凝血酶原活动度(PTA)。结果:协方差分析提示在轻度、中度、重度慢性乙型肝炎组中,不同病毒载量的乙型肝炎病毒对血脂水平[胆固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)]无影响或影响甚微。在慢性重型肝炎组中,不同载量的乙型肝炎病毒对血脂水平有明显影响。同时多元线性回归分析显示重型肝炎组中血脂水平主要受病毒载量(lgDNA)、PTA、白蛋白(ALB)等的影响。结论:不同载量的乙型肝炎病毒对血脂水平的影响在各个病变阶段是不同的,通过动态观察血脂水平和病毒载量,可以了解机体的免疫状况以及乙型肝炎病毒在机体病理性免疫反应中所发挥的作用。

人工肝和肝移植术后的乙肝三系统定量观察

目的观察人工肝技术和肝移植手术对重症乙肝患者乙肝病毒标志物的影响。方法乙肝三系统定量采用时间分辨免疫荧光技术，乙肝病毒DNA定量采用实时荧光定量PCR法。结果28例实施人工肝技术的重型肝炎患者治疗前后的乙肝三系统定量和HBVDNA定量结果为：HBsAg171．19±32．10ng／mL，HBeAg0．03±0．029NCU／mL，抗-HBe3．97±4．61NCU／mL，抗-HBc5．98±3．31NCU／mL，HBVDNA（1．1×10^7）±（6．81×10^6）copy／mL和HBsAg168．14±39．40ng／mL，HBeAg0．02±0．023NCU／mL，抗-HBe3．95±4．34NCU／mL，抗-HBc6．41±3．13NCU／mL，HBVDNA（1．1×10^7）±（6．23×10^6）copy／mL。P值均大于0．05，差异无统计学意义。26例施行肝移植手术的患者治疗前后的乙肝三系统定量和HBVDNA定量结果分别为HBsAg144．65±77．00ng／mL，HBeAg0．02±0．028NCU／mL，抗-HBe4．32±6．43NCU／mL，抗-HBc6．04±4．88NCU／mL，HBV DNA（1．0×10^7）±（6．89×10^6）copy／mL和HBsAg6．54±3．32ng／mL，HBeAg0．02±0．016NCU／mL，抗-HBe4．79±6．44NCU／mL，抗-HBc5．97±4．64NCU／mL，HBV DNA（1．04×10^2）±（3．40×10^2）copy／mL。除抗-HBe和抗-HBc，P值大于0．05外，其他项目P值均小于0．05，差异有统计学意义。结论肝移植手术可有效清除乙肝患者体内的乙肝病毒，人工肝支持系统虽不能有效清除乙肝患者体内的乙肝病毒，但可改善重型肝炎患者体内严重紊乱的内环境，为肝移植手术创造合适的条件和机会，赢得宝贵时间。

慢性乙肝患者血清cccDNA临床相亲性研究

目的探讨慢性乙型肝炎患者血清HBV cccDNA与血清AST、ALT及血清HBV-DNA之间关系。方法应用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测慢性乙型肝炎患者血清HBV cccDNA及HBV-DNA水平。结果91例乙肝患者中血清ALT、AST异常的分别有79例、59例,检出HBV cccDNA阳性的分别有53例、41例,检出率分别为67.09%、69.49%,检出率与正常组相比有统计学意义(P=0.001<0.05,P=0.015<0.05);血清HBV cccDNA在HBV-DNA复制水平<10~4copies/mL时检出率为11.11%,HBV-DNA复制水平10^(4～6)copies/mL时检出率为53.33%,HBV-DNA复制水平>10~6copies/mL时检出率为86.05%,以上不同的HBV-DNA复制水平血清HBV cccDNA检出率相比差异有统计学意义(P=0.000<0.05)。结论血清HBV cccDNA检出率与血清HBV-DNA水平及血清ALT、AST水平有明显正相关性,血清HBV cccDNA的动态检测可以作为临床治疗及监测的一个重要参考指标。

黄芪辅助治疗肺结核效果的系统评价

目的系统评价黄芪(Astragaulus membranaceus)辅助治疗肺结核的疗效。方法应用Cochrane协作网系统评价的方法,计算机检索Cochrane Library(2010年第3期)、CNKI(1991～2010.5)、VIP(1989～2010.5)、EMbase(1981～2010.5)以及PubMed(1981～2010.5)中黄芪辅助治疗肺结核的随机和半随机对照试验。由两位研究者对符合纳入标准的试验进行独立筛选、资料提取和质量评价,并交叉核对,而后采用RevMan 5.0软件进行Meta分析。结果最终纳入12个随机对照试验,共1 054例肺结核患者,试验地点均在中国大陆。Meta分析结果显示:①黄芪可有效辅助常规抗结核药物治疗肺结核,促进患者痰菌阴转,肺部病变吸收以及肺部空洞的吸收;②黄芪可有效降低常规抗结核药物的不良反应;③黄芪与常规抗结核药物联用,可使患者的症状和体征显著改善;④随访发现黄芪+常规药物治疗可使肺结核患者的细菌学复发率有显著下降。结论现有证据表明,黄芪治疗肺结核有一定的疗效且相对安全。但由于本系统评价纳入研究的样本量较小且方法学质量低下,现有证据尚不足以推荐临床常规应用黄芪辅助治疗肺结核。对上述结果,尚需开展更多高质量的多中心、大样本、且随访时间足够的随机双盲对照试验加以验证。

阿德福韦酯对慢性乙型肝炎患者血清ccc DNA的影响

目的探讨阿德福韦酯对慢性乙型肝炎患者血清HBV ccc DNA的影响。方法40例慢性乙型肝炎患者,按1:1随机分配接受阿德福韦酯或安慰剂治疗,所有患者均治疗52周并在停药后随访52周;应用实时荧光定量聚合酶链反应技术检测慢性乙型肝炎患者0周、26周、52周、78周、104周血清HBV ccc DNA及HBV DNA含量。结果治疗组20例患者治疗前(0周)血清HBV ccc DNA中位数水平为8.29×106拷贝/ml(与对照组相比P>0.05);接受阿德福韦酯治疗半年(26周)及1年(52周)血清HBV ccc DNA中位数水平分别为2.61×104拷贝/ml、7.78×103拷贝/ml(与治疗前相比两者P<0.05),停药半年(78周)及1年(104周)血清HBV ccc DNA中位数水平分别为3.38×104拷贝/ml、3.60×104拷贝/ml(与治疗前相比两者P<0.05);接受阿德福韦酯治疗半年及1年血清HBV ccc DNA分别下降2.502log10、3.028log10(与对照组相比两者P<0.05),停药半年及1年血清HBV ccc DNA较停药时上升0.638log10、0.665log10(与对照组相比两者P<0.05)。结论阿德福韦酯对血清HBV ccc DNA有明显抑制作用;血清HBV ccc DNA可作为阿德福韦酯抗病毒治疗的重要监测指标。

不同乙型肝炎病毒载量对慢性乙型肝炎患者红细胞系统的影响

大量资料显示，乙型肝炎（乙肝）患者中贫血发生率远高于普通人群，且存在缺铁性贫血、巨幼细胞性贫血，还有大量分类不明确的贫血。但目前鲜见有探讨HBVDNA对红细胞系统影响的报道。本研究旨在探讨不同HBV载量对乙肝患者红细胞系统各参数的影响。

血清cccDNA在阿德福韦酯治疗慢性乙型肝炎中的临床意义

目的探讨血清cccDNA在阿德福韦酯治疗慢性乙型肝炎（CHB）中的临床意义。方法选取81例CHB确诊患者，对所有病例的血清cccDNA进行检测，根据检测结果分为cccDNA阳性组和cccDNA阴性组，所有患者给予阿德福韦酯治疗口服（10mg／d），每24周随访一次，连续随访4次，治疗前及随访时检测HBVDNA、HBeAg及ALT等指标。结果cccDNA阳性与阴性两组患者的年龄及性别比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。两组在接受阿德福韦酯治疗的过程中，HBVDNA的中位数随着治疗时间的延长而下降，阴性组下降较阳性组明显。HBeAg变化，24周时两组与各自基线及两组之间比较差异无统计学意义（P〉0．05），于48、72及96周，两组HBeAg与各自基线及两组之间比较差异有统计学意义（P〈0．05）；ALT变化，两组间在基线、24和48周时比较差异无统计学意义（P〉0．05），72及96周比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论随着阿德福韦酯治疗时间的延长，cccDNA阴性组的HBVDNA载量、HBeAg滴度及ALT下降较阳性组快，即阴性组应答高于阳性组，因而说明血清cccDNA能够预测阿德福韦酯的远期疗效。