空肠弯曲菌全菌灭活疫苗免疫鸡效果评价

目的拟研制一种可降低空肠弯曲菌在鸡肠道内定植的全菌灭活疫苗。方法利用一种新的灭活剂H;O;与CuCl;混合物灭活空肠弯曲菌制备油佐剂灭活疫苗,免疫SPF鸡后测定灭活疫苗诱导产生的特异性抗体水平,通过口服攻毒评价疫苗免疫对空肠弯曲菌在鸡盲肠内定植的影响,同时测定盲肠细胞因子在转录水平的变化,以及对盲肠绒毛长度和隐窝深度的影响。结果制备的全菌灭活疫苗免疫SPF鸡后可诱导产生特异性血清IgG和胆汁IgA,但口服攻毒后不能抑制或降低空肠弯曲菌在盲肠内的定植水平,且对免疫鸡的盲肠绒毛长度和隐窝深度无明显影响。测定的鸡盲肠中多数细胞因子在空肠弯曲菌攻毒前与攻毒后1 d的转录水平差异不明显,而在攻毒后10 d明显上升;同日龄样品比较结果显示,部分细胞因子的表达量在佐剂对照组和全菌免疫组较空白对照组明显上调。结论本试验研制的全菌灭活疫苗虽可诱导产生高水平特异性抗体,但不能降低空肠弯曲菌在鸡盲肠内的定植水平,提示空肠弯曲菌在鸡盲肠内的定植机制需深入探究。

雏鸡小肠肠球菌分离鉴定及定量PCR检测方法的建立

为了确定雏鸡感染的病原菌,本试验剖检病弱雏鸡,取肝脏分离病原菌,根据菌落菌体形态及16S rRNA序列分析对分离菌株进行鉴定,并建立定量PCR检测方法。结果显示,病雏鸡肝脏充血出血,卵黄吸收不良。显微镜下,肝脏组织充血,脂肪变性。分离菌株在营养琼脂菌落细小,七叶苷培养基呈棕黑色,革兰染色阳性。16S rRNA序列比对与小肠肠球菌同源性为99.36%,鉴定为小肠肠球菌。定量PCR检测方法特异性强,只有小肠肠球菌出现扩增峰,与其他对照菌株无交叉;灵敏度高,对小肠肠球菌的最低检出量均为64CFU/mL;重复性好,Ct值变异系数在3.5%之内。因此,本试验确定了雏鸡小肠肠球菌感染,并建立了快速定量PCR检测方法,为小肠肠球菌感染诊断和防治提供了有价值的参考和有效的手段。