嗜酸乳杆菌质粒的分析和穿梭载体的构建

为分析嗜酸乳杆菌内源性质粒pDX,并基于该质粒构建大肠杆菌-嗜酸乳杆菌穿梭载体。本研究从嗜酸乳杆菌XW118中分离获得内源性的质粒pDX,对其进行序列测定及功能分析,然后利用质粒pDX的复制子构建了能在大肠杆菌和乳酸菌中穿梭的载体,并研究嗜酸乳杆菌的内源性质粒启动子在大肠杆菌中的活性和穿梭载体在乳酸菌中宿主的范围、转化效率和传代稳定性。结果显示嗜酸乳杆菌质粒pDX大小为2062 bp,GC含量为38.2%,包含4个开放阅读框(Open Reading Frame,ORF),推定为滚环复制质粒。质粒pDX在嗜酸乳杆菌中的拷贝数最高为31.05。本研究构建了基于质粒pDX复制子和启动子的大肠杆菌-乳酸菌穿梭载体。该载体可转化多种类型的乳酸菌,转化效率在0.24×10^(2)~2.75×10^(3)CFU/μg(质粒量)之间,质粒丢失率在25.45%~48.36%之间。本研究通过构建获得能在大肠杆菌-乳酸菌穿梭的载体,并获得了在大肠杆菌中具有活性的乳酸菌内源性质粒的启动子,为乳酸菌基因工程和大肠杆菌代谢工程提供了新的操作途径。

金边瑞香的扦插生根研究

研究表明金边瑞香插穗所带叶片数与生根关系极大，在插穗体内吸水与蒸腾平衡状况下，一定长度的枝条其叶片数越多，生根率及根系发达程度越高；同一枝条分３段扦插，以梢部生根率及根系发达程度最高，中部次之，基部最差；不同树龄的金边瑞香插穗以“低龄”母株生根最好。

水稻诱导抗病性研究进展

综述了近年来植物诱导抗病性研究的主要进展,介绍了生物因子和非生物因子诱导水稻对病害的作用效果和机制,简述了诱导抗性在水稻病害控制实践中的应用,同时指出了水稻诱导抗性中存在的问题和发展前景。

江西蔬菜生产现状与发展对策

分析了江西蔬菜生产状况和存在的主要问题,并据此提出了江西蔬菜生产发展对策。

保护农业知识产权促进现代农业发展

要发展现代农业,必须以农业高新技术改造传统农业。如何运用知识产权保护农业技术创新,促进农业现代化是今后提升我国农业技术创新、可持续发展的重要问题。分析了我国农业知识产权保护现状和问题,阐述了农业知识产权保护对发展现代农业的重要性,并提出加强知识产权保护工作,促进现代农业发展的几点建议。

圣诞花的化学调控及其混合营养基质的研究

本研究针对我国种植圣诞花的薄弱技术环节进行探索，结果表明：（１）嫩枝扦插圣诞花用Ｈｏｒｍｏｄｉｎ刺激切口，能显著提高其生根率；（２）从多种生长调节剂中筛选出ＰＰ＿（３３３）为圣诞花理想的矮壮剂，用７５ｐｐｍ的ｐｐ＿（３３３）２００ｍｌ灌根处理多年生圣诞花与对照比较植株矮化率达４１．７２％，迅速恢复生长的时间为药后６５ｄ左右，叶绿素含量提高１０．７８％，花期提前１０ｄ，观赏价值大为提高。处理当年扦插的植株，安全有效浓度为３７．５～２５ｐｐｍ，药后３５ｄ矮化率为８７．５０％～８２．７６％；（３）混合营养基质培植圣诞花能显著提高其移栽成活率，改善长势长相，减少成株死亡率和病虫杂草危害。

科研机构在国际科技合作中的作用及路径

在经济全球化浪潮的推动下,科技资源在全球范围内流动和配置,国际合作已成为推动科技创新的重要途径和手段。当前,重大科技活动各环节所需的要素,如人员、技术、项目、资金、设备等,需要国内外之间的相互协调与合作共同,才能实现高效、优势互补。就中国的实践来看,通过国际科技合作,有利于强化创新载体的能力、激发创新载体的动力、促进创新要素有效有序的流动,加快开放型区域创新体系建设,提高科技创新能力,加快区域经济持续健康发展。介绍了江西省科研机构的国际科技合作情况,以及下一步的合作建议,希望对促进科研机构的国际科技合作发挥一定的作用。

金边瑞香花芽形态分化研究

金边瑞香花芽由顶芽发育而成 ,花芽分化包括花序分化和小花分化两个过程 ,分为未分化、开始分化、花序原基分化、小花原基分化、花瓣分化、雄蕊分化和雌蕊分化 7个时期 ,分化的顺序是向心的 ;分化的临界期为 5月中旬 ,分化时期长达 7个月 ,花芽分化既持续又表现出两个分化高峰 ,还受温度等因素的影响。

响应面法优化包被发酵嗜酸乳杆菌的高密度培养

针对益生菌嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)包被发酵的形成特性和营养需要,采用Plackett-Burman试验设计优化其增殖培养基,获得高密度培养条件和提高菌粉存活率方法。结果表明,嗜酸乳杆菌包被发酵的增菌最佳培养基组成为:葡萄糖7.77%、蛋白胨2%、牛肉膏2%、酵母粉3%、柠檬酸氢二铵0.3%、K_2HPO_4·7H_2O 0.2%、MgSO_4·7H_2O 0.09%、MnSO_4·4H_2O 0.025%、NaAc·3H_2O0.3%、吐温-80 0.1%、海藻酸钠1.45%、纳米碳酸钙2.93%。在此优化条件下,嗜酸乳杆菌活菌数达4.32×10^(10)CFU/m L,制备成的冻干粉在37℃条件下贮藏100 d后仍保留75%以上的存活率。

加快我国绿色农业发展的对策思路

本文综合分析了发展绿色农业的重要意义,综述了我国绿色农业发展的进展情况,提出了进一步加快绿色农业发展的对策。

国内生态浮床原位修复复合强化技术研究进展

生态浮床作为一项重要的水体修复技术具有独特的优势,已被广泛应用。然而受到生态浮床本身构造的限制,浮床植物及根系微生物对水体的净化能力有限,为提高生态浮床的应用效果,国内很多学者对生态浮床进行了复合及强化改良研究。该研究对现阶段广泛应用的生态浮床复合及强化措施进行总结与比较,并对目前生态浮床改良技术存在的问题及发展方向进行阐述,以期为生态浮床技术研究及应用提供参考依据。

饲用枯草芽孢杆菌高产芽孢工艺优化及菌剂制备

为提高枯草芽孢杆菌SR096发酵液中芽孢含量,本研究通过单因素试验和响应面法试验对SR096发酵培养基中的碳源、氮源以及无机盐体系等组分进行了优化。最终确定发酵培养基组成为:葡萄糖7.5 g/L、玉米粉12.69 g/L、酵母粉10.66 g/L、黄豆粉20 g/L、柠檬酸钠4.46 g/L、碳酸钙1.5 g/L、硫酸镁2 g/L,优化后的发酵培养基在37℃、180 r/min条件下摇瓶培养48 h,枯草芽孢杆菌SR096菌株发酵液中芽孢含量可达7.978×10^9 cfu/mL,制备的益生菌剂具有耐热、耐酸、耐胆盐的优点并能在常温下长期贮存。

响应面法优化粪肠球菌包被发酵培养基

本研究旨在优化粪肠球菌包被发酵培养基,以获得高密度包被粪肠球菌。以包被培养活菌含量为检测指标,采用Plackett-Burman(PB)试验分析培养基中对粪肠球菌发酵影响最重要的主要因素,结合响应面法(RSM)对主要因素进行了优化,并研究了最优条件下包被培养的粪肠球菌冻干粉的稳定性。结果表明,最优包被发酵培养基配方为:葡萄糖4.93%、蛋白胨1%、牛肉膏0.8%、酵母粉0.6%、柠檬酸铵0.3%、K2HPO4·7H2O 0.2%、MgSO4·7H2O 0.06%、MnSO4·H2O 0.045%、NaAc·3H2O 0.6%、吐温800.1%、海藻酸钠1.87%、纳米碳酸钙3.65%。在此条件下,粪肠球菌包被活菌数达6.83×109 CFU/mL,与预测值误差仅4.12%。贮存稳定性试验表明,制备成的冻干粉在37℃条件下贮存90 d后仍保留80%以上的存活率,说明包被培养粪肠球菌冻干粉具有较高的稳定性。

饲用枯草芽孢杆菌SR096产孢培养基及培养条件的优化

试验旨在为了降低枯草芽孢杆菌SR096的工业生产成本和提高发酵液的芽孢含量,采用单因素试验和响应面法试验设计对菌株SR096的培养条件和发酵培养基组分优化,优化后的培养基组分为:葡萄糖7.5 g/L、玉米粉15.7 g/L、黄豆粉45.0 g/L、柠檬酸钠4.5 g/L、碳酸钙2.0 g/L、硫酸镁1.0 g/L,经验证在5 L发酵罐中以接种量3%、37℃、250 r/min条件下培养30 h,枯草芽孢杆菌SR096发酵液的活菌含量为1.67×10^10 CFU/mL,芽孢含量为1.56×10^10 CFU/mL,芽孢率为93.3%,为枯草芽孢杆菌SR096后期的产业化放大和推广应用奠定基础。

嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy中结构域C的环化重排及其对Gt-amy催化性能的影响

为确定嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy中结构域C对其催化性能的影响,本研究采用基于蛋白质分子结构的环化重排方法对Gt-amy的结构域C进行分子改造,获得Gt-amy环化重排突变体,并比较了突变体的生淀粉吸附率、生淀粉降解率、酶比活力以及动力学常数.与Gt-amy相比,生淀粉吸附能力提高的Gt-amy环化重排突变体,其生淀粉降解能力也得到提高;生淀粉吸附能力降低的Gt-amy环化重排突变体,其生淀粉降解能力也降低.即Gt-amy的生淀粉降解能力和生淀粉吸附能力之间存在正相关性.其中,环化重排突变体Gt-amy-S498的生淀粉吸附率由78.86%提高至93.14%,生淀粉降解率由65.80%提高至90.93%.本研究证实环化重排突变可以作为一种工程学手段改变蛋白质的结构与功能,为提高酶类蛋白质的催化性能提供了思路.

饲用粪肠球菌EXW27培养条件的响应面优化

本试验旨在通过将单因素、Plackett-Burman筛选与响应面分析3种方法相结合来优化饲用粪肠球菌EXW 27培养条件。以单因素试验为基础,采用Plackett-Burman试验设计筛选显著影响菌株EXW 27发酵活菌数的培养条件,然后用最陡爬坡路径逼近最大响应区域,最后通过响应面分析确定主要影响因素的最佳值。结果表明:菌株EXW 27发酵培养条件为:初始pH 7.7、培养温度38.3℃、装液量120 mL/250 mL、接种量6%、摇床转速210 r/min、培养时间18 h,在此最佳条件下,菌株EXW27的活菌数为3.18×1010 cfu/mL,比优化前提高了近3倍。

粪肠球菌内源性质粒的序列分析及其穿梭载体的构建

为了对粪肠球菌EXW27的内源性质粒pXW进行DNA序列的测定和分析,并基于其最小复制子构建大肠杆菌-粪肠球菌穿梭载体。本研究从具有优良益生特性的粪肠球菌EXW27中分离得到了内源性质粒pXW,对其进行了DNA序列的测定及分析,然后利用质粒pXW的复制子构建大肠杆菌-乳酸菌穿梭载体,并研究大肠杆菌-乳酸菌穿梭载体的宿主范围、转化效率和稳定性。结果表明该质粒大小为8617 bp,GC含量为33.29%,包含8个ORF,推定为θ型复制质粒。质粒pXW在粪肠球菌EXW27中拷贝数最高可达32.09±0.93,表明质粒pXW属于高拷贝数质粒。本研究确定了质粒pXW的最小复制子,并基于该复制子构建了大肠杆菌-粪肠球菌穿梭载体pXWM1。该穿梭载体具有较宽的宿主范围,可成功转化至不同类型乳酸菌,转化效率介于1.96×10^(2)~8.96×10^(4) CFU/μg (质粒DNA)之间,质粒丢失率介于28.54%~54.17%之间。本研究成功构建了一个具有宽宿主范围、高转化效率以及高稳定性的大肠杆菌-粪肠球菌穿梭载体,为乳酸菌基因操作提供了新工具。

多角体包埋异源蛋白杆状病毒表达系统的构建

[目的]探索多角体病毒的包装特性,构建能形成多角体包裹外源蛋白的polyh+Bac-to-Bac表达系统。[方法]通过酶切连接的方式,将4个元件片段:作为标记的绿色荧光基因EGFP,Bm CPV自身的多角体蛋白基因,用于基因表达的H1信号肽柔性连接肽,插入到质粒Fast Bac Dual中,利用Ac MNPV Bac-to-Bac系统,得到整合表达重组Bacmid:Ac-polyh/EGFP。将其感染Sf9细胞后,检测蛋白表达情况。[结果]利用该系统构建了一种能大量表达绿色荧光蛋白(EGFP)和能在胞质形成多角体的重组病毒v Bm Bac(polyh+)-EGFP。感染的Sf9细胞在荧光显微镜下观察发现EGFP与多角体可以在同一细胞中同时表达;从感染的Sf9细胞中收集纯化多角体,观察到多角体能被激发出绿色荧光,进一步利用Western blot证实多角体中含有EGFP。[结论]该表达系统为解决活性蛋白长期保存提供了新方法,同时拓宽了杆状病毒在开发含有毒素蛋白的新型生物杀虫剂和新型疫苗的转运载体等领域的应用前景。

警惕鄱阳湖区滨湖农田害鼠暴发成灾

2015年6月、9月和12月在鄱阳湖湖滩草洲和滨湖农田进行了鼠类密度调查,结果表明,农田总捕获率为11.22%,湖滩草洲总捕获率为3.98%,其中水稻田鼠密度非常高,6月、9月、12月合计捕获率分别为6.02%、16.73%和14.94%。尤其在本应该鼠密度较低的冬季,恒湖垦殖场水稻田生境的鼠密度却高达33.54%,说明目前鄱阳湖滨湖农田鼠密度已达较高水平,其中优势鼠种黄毛鼠(Rattus losea)和黑线姬鼠(Apodemus agrarius)的繁殖能力强,在冬季保持了较高的密度,且亚成体以下个体比例较高,如不加控制,有进一步暴发成灾的可能。从鼠种组成看,黑线姬鼠为湖滩生境第一优势种(占比为59.46%),黄毛鼠(32.43%)次之;在滨湖农田黄毛鼠(52.63%)已替代黑线姬鼠(44.41%)成为第一优势种群。由于黄毛鼠体型更大、密度高,其成为第一优势种后的发展动态需密切关注。

植酸酶YiAPPA在粪肠球菌中的 高效组成型表达研究

旨在获得强组成型启动子来实现植酸酶YiAPPA在粪肠球菌EXW27中的高效组成型表达。本研究通过对比分析粪肠球菌中16S rRNA的启动子序列,将启动子中非保守区域替换为随机化序列,获得随机的人工启动子序列。然后利用大肠杆菌-乳酸菌穿梭质粒pSIP409中酶切位点构建人工启动子文库,并结合植酸酶活性的高通量筛选技术,筛选获得启动YiAPPA在粪肠球菌EXW27中高效组成型表达的强组成型启动子,实现YiAPPA在粪肠球菌EXW27中成功表达,并研究重组YiAPPA的酶学性质。结果表明,在组成型启动子p10的控制下,重组YiAPPA在粪肠球菌EXW27中成功表达,其表达量约占细胞内蛋白总量的15%。重组YiAPPA的最适反应pH为4.5,在pH1.0~10.0的范围内具有优良的pH稳定性,于55℃的绝对酶活高达3900 U/mg。本研究构建了既具有益生特性又具有植酸酶活性的转基因粪肠球菌,为研制新型转基因微生态制剂奠定了基础。