中国新疆维吾尔族人群FUT2基因结构的研究

目的 研究中国新疆地区维吾尔族人群的FUT2基因分子结构。方法 对 4 0人份的维吾尔族人群随机供者血样进行DNA抽提 ,并进行FUT2基因测序分析。结果 共发现维吾尔族人群的FUT2有 35 7、385、4 2 8、7394处位置上存在突变 ,它们的基因频率分别为 :35 7T =71.2 5 % ,35 7C =2 8.75 % ,385A =77.5 0 % ,385T =2 2 .5 0 % ,4 2 8G =70 % ,4 2 8A =30 % ,739G =72 .5 0 % ,739A =2 7.5 0 %。结论 新疆维吾尔族人群的FUT2基因结构的特点提示新疆维吾尔族人群与台湾地区中国人和白种人间存在着一定程度的亲缘关系。

Y-STR及HLA-A、-B、-DRB1基因分型在二联体亲子鉴定中的应用

目的研究增加Y-STR位点和HLA基因座的检测后,对二联体亲子鉴定亲子关系相对机会(RCP)值的影响。方法对二联体亲子鉴定案例除常规进行ABI AmpFLSTR IdentifilerTM试剂盒中的15个常染色体STR位点检测以外,增加ABI YfilerTM系统中的17个Y-STR或HLA-A、-B、-DRB1基因座的检测,并计算增加检测位点前后的亲子关系指数(PI)和RCP。结果经ABI IdentifilerTM试剂盒检测的135例二联体亲子鉴定,RCP值>99.99%案例为109例,占80.74%,其余的26例(19.26%)RCP值均>99.73%、但<99.99%,在这26例单亲案例中,18例"母-子"单亲案例增加HLA-A、-B、-DRB1基因座检测后,其中的15例RCP值>99.99%;8例"父-子"单亲案例增加了17个Y-STR检测后,RCP值则均超过了99.99%。结论增加Y-STR或HLA-A、-B、-DRB1基因座等遗传标记物的检测,可有效提高二联体亲子鉴定的RCP值,从而提高鉴定的准确性。

Penta D、Penta E和SE33位点基因分型在二联体亲子鉴定中的应用

目的研究增加Penta D、Penta E和SE33位点基因座的检测后,对二联体亲子鉴定亲子关系概率(RCP)值的影响。方法对二联体亲子鉴定案例除了进行ABI公司提供的AmpFISTR IdentifilerTM试剂盒中的15个STR位点检测以外,增加美国Promega公司的Penta D、Penta E和SE33试剂盒复合扩增STR位点的检测,并计算增加检测位点前后的亲权指数和RCP。结果 135例二联体亲子鉴定案例中有109例常染色体RCP值大于99.99%,频率为80.74%。26例RCP值小于99.99%,频率为19.26%。增加Penta D、Penta E和SE33位点基因座检测后有83.33%的家系由原来的RCP值小于99.99%转变为RCP值大于99.99%。结论增加遗传标记物的检测可以有效提高二联体亲子鉴定的RCP值,从而提高鉴定的准确性。

中国新疆维吾尔族人群与汉族人群FUT2基因结构的比较研究

目的 探讨中国新疆地区维吾尔族和汉族人群的FUT2基因分子结构。方法 对 4 0例的维吾尔族和 4 1例汉族人群随机供者血样进行DNA抽提 ,并进行FUT2基因测序分析。结果 共发现维吾尔族人群的FUT2有 35 7,385 ,4 2 8,739四处位置上存在突变。它们的基因频率分别为 :35 7T =71 2 5 % ,35 7C =2 8 75 % ,385A =77 5 0 % ,385T =2 2 5 0 % ,4 2 8G =70 % ,4 2 8A =30 % ,739G =72 5 0 % ,739A =2 7 5 0 %。中国汉族人群的FUT2基因不存在 4 2 8和 739两处突变 ,但是存在 35 7和 385两处位置的突变。它们的基因频率分别为 :35 7T =90 2 4 % ,35 7C =9 76 % ,385A =5 8 5 4 % ,385T =4 1 4 6 %。结论 根据中国新疆维吾尔族人群的FUT2基因结构的特点 。

深圳地区无偿献血者血清中群体反应性抗体检测

目的通过对深圳地区123名无偿献血员血清中群体反应性抗体(PRA)的检测,研究无偿献血群体血清中HLA抗体的水平及分布情况。方法使用Luminex100流式磁珠仪和美国One Lambda公司的Lab-screen流式磁珠试剂盒进行PRA检测,检测标本为随机抽取的深圳地区无偿献血员的血样标本共123人份。结果 123人份标本中有10例结果为阳性,阳性率为8.13%,113例为阴性。在10例阳性标本中,7例献血者有妊娠史,2例献血者有输血史。结论在随机抽取的献血者中,有8.13%的PRA阳性率,曾有过输血史和妊娠史的献血者PRA阳性率明显高于无输血史和妊娠史的献血者,因此在临床输血中需要注意积极预防,对有输血史和妊娠史的献血者的血浆应注意配合性输注。

中国汉族人群中Dia抗原和Dib抗原的分子遗传分析

目的研究中国汉族人群Diego血型系统中Dia和Dib抗原表达的分子遗传背景。方法采用血型血清学方法对2990例非血缘关系的捐血者进行Diego血型鉴定,从中随机选择20例表现型为Di(a-b+)的样本,以及筛选到的所有Di(a+b-)稀有血型样本,采用PCR-SSP、DNA直接测序方法分析Diego血型基因的分子遗传背景。结果2990例捐血者中,发现Di(a+b-)表现型2例,Di(a+b+)167例,Di(a-b+)2821例。随机选择的20例表现型为Di(a-b+)的DNA样本,经PCR-SSP法检测的基因型为DI2DI2,对DI基因第19外显子直接测序,2561位上碱基为C。2例稀有血型Di(a+b-)的DNA序列在19外显子2561位上碱基为T,基因型为DI1DI1。结论中国汉族人群Dia和Dib抗原表达的分子遗传基础是DI基因第19外显子2561位上碱基T-C的置换,引起第854位氨基酸的改变。

中国汉族个体HLA-A、-B基因全长序列的测定及调控区多态性

文章利用20个中国汉族个体样本建立了稳定精确的HLA-A、-B基因全长序列的克隆测序方法,获得HLA-A 10个等位基因4.2 kb序列,HLA-B 6个等位基因3.7 kb序列,序列涵盖了两个基因的所有外显子、所有内含子、5′启动子区以及3′非翻译区(3′UTR)。A*1153是文章发现的一个新等位基因,B*151101的内含子序列、5个HLA-A以及2个HLA-B等位基因的5′启动子序列和3′UTR序列为国际上首次报道,其他等位基因均延伸了IMGT/HLA数据库中释放的全长序列。文章首次在中国汉族个体中测定了IMGT/HLA数据库中没有覆盖的HLA-A、-B基因的上游5′启动子以及下游3′UTR区域的多态性模式。HLA-A基因5′启动子延伸区域共发现26个SNPs和一处3 bp(AAA/-)的插入/缺失,3′UTR延伸区域共发现14个SNPs;HLA-B基因5′启动子延伸区域共发现5个SNPs和一处1 bp(T/-)的插入/缺失,3′UTR延伸区域共发现8个SNPs。通过对两个基因的5′启动子、外显子以及3′UTR的系统发育树分析,发现两个基因调控区与外显子的进化关系有所不同,HLA-A基因除A*24020101外,其他等位基因两端调控区与外显子连锁比较紧密,HLA-B基因两端调控区与外显子之间则发生了较为频繁的重组事件。

13个STR基因座在亲子鉴定案例中的基因突变观察

目的 观察美国 CODIS系统的 13个 STR基因座在532例认定亲子关系的亲子鉴定案中的基因突变情况,探讨STR基因座突变率及突变类型。方法 经“Profiler Plus”及“Cofiler”试剂盒检测的587例亲子鉴定案,对其中有1～2个STR基因座不符合遗传规律者,增加HLA等血型基因和“PowerPlex16^(TM)”试剂盒检测。必要时,还增加Y-STR基因座检测和HLA等位基因测序。结果 认定亲子关系的532例,观察1052次减数分裂,发现17例亲子鉴定中的18次基因突变事件,其中16例1个STR基因座的基因发生突变,1例2个STR基因座的基因发生突变;突变的基因座包括D5S818、D3S1358、D16S539、CSFIPO、D21S11、D13S317、D7S820、vWA、D18S51和FGA,其中以FGA和D18S51基因座的突变率最高(0.29％);18次突变事件,其中来自父亲11次,来自母亲5次,无法确定2次。结论 用美国CODIS系统的STR基因座进行亲子鉴定,在有1～2个基因座不符合遗传规律时,要综合分析,并增加其它的遗传标记进行检测。

中国汉族人FUT2基因点突变初步研究

目的 了解中国汉族人分泌型基因 (FUT2 )点突变的情况。方法 采用直接测序法及分子克隆测序法对 4 1名中国汉族个体的FUT2基因进行检测 ,并与Kelly报道的分泌型基因的序列作比较分析。 结果 4 1名中国汉族个体中未见G4 2 8A突变 ,但发现A385T和C35 7T突变 ,其中 2 4人有A385T突变 ,17人无A385T突变 ,而所有个体都有C35 7T的同义突变。结论 在 4 1名中国汉族人群中没有发现在非洲和高加索人非分泌型中常见的G4 2 8A点突变 ,但存在着A385T、C35 7T两种不同于白种人的FUT2基因点突变。

类孟买型的FUT1和FUT2等位基因突变的分析

目的分析类孟买型个体的FUT1和FUT2位点基因突变的分子生物学基础。方法采用PCR扩增产物直接测序法,对2例类孟买型个体的FUT1和FUT2位点的等位基因进行序列检测。结果1例类孟买型个体FUT1位点547～552位的3个重复连续的AG中缺失1个AG,使得氨基酸序列发生182框码移位;另1例FUT1位点880～882位3个重复连续的T中缺失2个T,使得氨基酸序列发生294框码移位,而2例类孟买型的FUT2位点均为正常野生型。结论FUT1位点的移码突变是导致H抗原缺乏,形成类孟买型的原因之一。

亲子鉴定中STR基因座的基因突变分析

目的探讨Identifiler^TM荧光标记复合扩增试剂盒15个STR基因座在亲子鉴定中的基因突变特点。方法应用Identifiler^TM荧光标记复合扩增试剂盒检测676例亲子鉴定案，对其中1～2个突变基因座加做HLA等位基因检测或Y—STR基因座检测。结果在认定亲子关系的676例中，观察1304次减数分裂，Identifiler^TM荧光标记复合扩增试剂盒中的15个基因座确定19例突变，其中D18S51基因座4例，D2S1338基因座3例，D8S1179、D16S539、vWA、D7S820、D13S317基因座各2例，D5S818和TH01基因座各1例，D21S11、FGA、D3S1358、D19S433、TPOX、CSF1P0基因座未见突变；一步突变的17例，二步突变的为1例，四步突变的1例；1个基因座发生突变的18例，2个基因座同时发生基因突变的为1例；突变来自父亲与来自母亲的比例为13：2，4例来源不能确定。结论用Identifiler^TM荧光标记复合扩增试剂盒检测到1—2个基因座发生突变，须增加对其它遗传标记的检测。

中国汉族人群A_2亚型分子遗传背景的研究

目的 研究中国汉族人群ABO血型系统A2 亚型的分子遗传背景。方法采用PCR SSP法ABO基因分型试剂盒进行ABO常规基因定型。血清学确定为A2 亚型、PCR SSP法基因定型为A2 0 1或A1 0 2基因的 2 0例样本 ,对其ABO基因的第 6、第 7外显子进行DNA直接测序。结果① 2 6 0个随机的个体 ,经PCR SSP方法ABO基因定型试剂盒检测 ,检出O1、B、A1 0 1 (A4 6 7c)和A1 0 2 /1 0 3(A4 6 7T) 4种等位基因 ,但未检出A2等位基因。②采用血清学方法从 2 4 5 2例A或AB型随机献血者中筛检出的 2 0例A2 亚型样本 ,经PCR SSP基因定型 ,仅 5例为A2 0 1O1或A2 0 1B ,而其余 1 5例为A1 0 2O1或A1 0 2B。经DNA直接测序 ,结果 5例证实为A2 1 ,1 3例为A2 4 ,1例为A1 2 ,1例不能确定 ;A2等位基因中除 1 0 6 1C缺失外 ,还存在 4 6 7C >T、1 0 0 9A >G等点突变。结论中国汉族人群A2基因呈现多样性并存在自身特点 ,各A2等位基因的频率及分布与其它人群的资料存在差异 ,中国汉族人群A 2亚型中以A2 4等位基因 (4 6 7T、1 0 0 9G)

新的HLA等位基因B^＊5610的发现和序列分析

目的 识别确认中国人群的HLA新等位基因。方法 经基因克隆和DNA测序 ,分析该基因和B 5 6 0 2基因序列的差异。结果 该基因和B 5 6 0 2基因序列的差异只是在外显子 3区域中 5 5 9C >A以及 5 6 0T >C 2个碱基取代 ,并导致相应的密码子 187由亮氨酸变为苏氨酸。结论 该基因为HLA新等位基因 ,2 0 0 2年 9月已被世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名为HLA B 5 6 10。在大约 30 0 0名随机献血者中 ,未发现其他带有B 5 6 10基因的个体。

中国人群LW血型基因多态性的研究

本研究探讨中国人群Landsteiner-Wiener(LW)血型基因的多态性。随机采集深圳市血液中心160名非血缘关系无偿志愿捐血者外周血样EDTA抗凝血标本,并提取DNA。对这160例DNA标本直接进行LW血型基因的第一外显子测序分析,同时用优化的LWa/LWb等位基因PCR-SSP方法进行了的基因分型。结果表明:在对这160例捐血者基因组DNA的分子生物学研究中发现LW血型等位基因均为LWa纯合子。结论:在中国人群中LWa等位基因更常见,本次研究中100%的献血者LW血型等位基因均为LWa,目前还未发现LWb等位基因。

南方汉族强直性脊柱炎患者及健康人群HLA-B27基因的分子多态性及分布

目的研究南方汉族强直性脊柱炎(AS)患者及健康人群HLA-B27亚型等位基因的多态性和分布特点。方法采用HLA测序分型方法,对收集到的46份B*27阳性的南方汉族AS患者血样以及随机选择的80份经rS-SOHLA流式磁珠低分辨检测为B*27阳性的造血干细胞南方汉族捐献者血样,做HLA-B基因的第2—4外显子测序分型,测序反应产物用ABI PrismTM3730测序仪检测,Assign3.5分析软件分析结果。对检出的模棱两可结果及"罕见型"等位基因,辅以PCR-SSP法HLA-B27高分辨基因分型。结果46名南方汉族AS患者中,共检出4个HLA-B*27相关的等位基因:B*2704的检出比例最高,为82.98%(39/47);其次是B*2705,为12.77%(6/47);B*2707和B*2724各为2.13%(1/47)。80名南方汉族造血干细胞捐献者中,共检出7种B*27相关等位基因:以B*2704的检出比例最高,为57.32%(47/82);其次为是B*2705,为26.83%(22/82);B*2706和B*2707各为6.10%(5/82);B*2703、B*2715和B*2724各为1.22%(1/82)。结论南方汉族AS患者HLA-B*27基因中以B*2704最为常见,健康人群以B*2704和B*2705等位基因为主要亚型。

一个新的等位基因：HLA—A^＊1114克隆和序列分析

目的 识别确认中国人群的HLA新等位基因。方法 使用PCR SSP以及以测序为基础的分型 (SBT)技术 ,在HLA分型常规工作中发现 1个与HLA A 110 2基因相关的新基因 ,以基因克隆及DNA测序 ,分析该基因和A 110 2基因序列的差异。结果 该基因和A 110 2基因序列的差异在于外显子 3区域中 ,5 2 4A >G ,5 2 6G>C以及 5 2 7C >G等 3个碱基的取代 ,使密码子 175由组氨酸变为精氨酸 ,密码子 176由丙氨酸变为精氨酸。结论该基因为HLA新等位基因 ,2 0 0 2年 9月已被世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名为HLA A 1114。用PCR SSP方法 ,在 30 0 0名随机造血干细胞供者中 ,未发现其他带有A 1114基因的个体。

全自动工作站与两种人工抽提全血基因组DNA方法的比较

目的比较全自动工作站与两种人工法抽提全血基因组DNA的质和量,总结三种方法的特点及提供一些建议。方法三种方法均选取同样36份样本抽提基因组DNA,并比较其浓度和纯度,并计算三种方法所需的费用。结果三种方法提取的基因组DNA均能达到相关分子生物学实验的要求,但在操作程序、价格和全血需要量等方面都存在较大差异。结论全自动工作站用全血量少,价格比较便宜,适合大批量全血样本抽提基因组DNA。Gentra法和胍盐酸法均适用于新鲜全血和冻融过的全血,胍盐酸法还适用于有血凝块的全血。

深圳地区2003～2012年间无偿献血者抗-HCV抗体与核酸检出情况分析

目的：调查分析深圳地区2003-2013年献血者抗-丙型肝炎病毒（HCV）抗体/病毒核酸检测（NAT）阳性检出情况。方法献血者经乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）快速试纸条初筛后,使用进口与国产两种酶联免疫吸附试验（ELISA）及血液病毒 NAT 方法检测抗-HCV 抗体、HCV RNA,对11年来献血者抗-HCV 抗体、NAT 阳性率流行趋势进行统计分析比较。结果深圳地区2003-2013年献血人数逐年增长,抗-HCV 抗体阳性率呈 M 型检出走势,于2013年达到最低。献血者抗-HCV 抗体阳性/NAT 阴性检出率与抗-HCV 抗体走势一致,而真实感染 HCV 的指标抗-HCV 抗体与 NAT 双阳性组检出率则缓慢下降；对抗-HCV 抗体阳性献血者在不同分类组别比较发现,31-45岁献血者组、初次献血者组的抗-HCV 抗体检出率分别高于其他年龄组与重复献血者（P〈0.05）；抗-HCV 抗体阴性/NAT 阳性献血者有3例（检出率为1/134518）。结论NAT 检测为常规酶联免疫方法的补充检测手段,缺一不可,能大大降低输血风险,而 NAT 阴性献血者的抗-HCV 抗体阳性占多数的检测结果应引起重视,避免因假阳性导致此类献血者资格淘汰。

中国南方汉族人群STR位点遗传多态性研究及其在亲子鉴定中的应用

目的 调查中国南方汉族人群的 D8S1179、D2 1S11、D18S5 1、D5 S818、v WA、FGA、D3S135 8、D13S317、D7S82 0等 9个短串联重复 (STR)位点多态性 ,探索 STR基因分析在亲子鉴定案例中的应用价值。方法 应用 PCR复合扩增和四色荧光自动化检测技术对 5 74名南方汉族无关个体的 9个 STR位点作基因分型。结果 获得中国南方汉族人群中 9个 STR位点的等位基因频率 ,其基因型分布符合 Hardy- Weinberg平衡。经统计分析 ,D8S1179、D2 1S11、D18S5 1、D13S317、D7S82 0、D5 S818、v WA和 FGA位点属于高鉴别力、高杂合度、高信息含量的 STR位点 ,D3S135 8属于中高度多态性位点。 9个 STR位点的累积个体识别能力 (DP)、多态信息含量 (PIC)、杂合度 (H)和非父排除率 (PE)均为 0 .9999。在 2 10例亲子鉴定案例中 ,否定亲权的 2 8个案例中均至少有 3个位点不符 ;认定亲权的 182例中 ,亲子关系指数 (RCP)大于 99.73%的有 179例 (98.35 % ,179/ 182 ) ,另外 3例 (1.6 5 % ,3/ 182 ) RCP值为 95 .0 0 %～ 99.73%。结论 研究获得了中国南方汉族人群中 9个 STR位点的等位基因频率。应用这 9个 STR位点的等位基因鉴定 ,能成功地开展亲子鉴定 。