漆酶BmLac的异源表达、酶学特性及棉酚降解的研究

为开发能高效降解游离棉酚的酶蛋白。从土壤中筛选得到一株Bacillus amyloliquefaciens XP-13,从其基因组扩增获得了基因BmLac,进而构建Ppic9k-BmLac重组质粒,将其导入毕赤酵母GS115实现了异源表达,对漆酶BmLac的酶学特性、棉酚降解效果进行研究。结果表明,以ABTS为底物时,该酶的最适反应条件为pH 4,55℃,最适条件下酶活是101.56 U/mL;在90℃下孵育1 h后,相对酶活仍保留70%以上;在pH 3-7孵育1 h,其相对酶活均保留96%以上。1 mmol/L的Cu^(2+)能使该酶酶活提高1.93倍,但高浓度(10 mmol/L)的Fe^(2+)、Fe^(3+)和Al^(3+)完全抑制该酶活性。在55℃下反应2 h后,该酶对棉酚的降解率高达94.57%(无介体)和98.73%(有ABTS)。综上,漆酶BmLac具有良好的热稳定性和广泛的pH适应性,并能有效降解棉酚,该酶为有效降解棉籽粕中的游离棉酚提供基础支撑。