鸭腺病毒3型Fiber-2蛋白单克隆抗体的制备及初步应用

为进一步研究鸭腺病毒3型(DAdV-3)Fiber-2蛋白,研究通过PCR扩增fiber-2基因,构建p ET32a-DAdV3-fiber2原核质粒,表达并纯化蛋白,以纯化的蛋白为免疫原,免疫6周龄雌性BALB/c小鼠制备抗Fiber-2单克隆抗体杂交瘤细胞,采用间接免疫荧光试验和免疫印迹试验进行鉴定,并用于DAdV-3 Fiber-2杆状病毒表达产物的鉴定。结果显示:原核表达获得1.77 mg/mL Fiber-2蛋白,筛选获得2株阳性单克隆细胞株2E10E4和4F7F10,两株单克隆抗体均为IgG 1型,轻链类型为κ;DAdV-3感染的LMH细胞中存在特异性荧光,免疫印迹试验确认在约59 ku处出现特异性条带;采用制备的单克隆抗体确认了表达Fiber-2蛋白的重组杆状病毒。研究获得了针对DAdV-3 Fiber-2蛋白的单克隆抗体,为深入探究Fiber-2在DAdV-3感染机制中的作用以及为建立DAdV-3抗原免疫测定技术奠定了基础。

非洲猪瘟病毒p30蛋白在杆状病毒表达系统中的表达与免疫检测

p30蛋白是非洲猪瘟病毒(ASFV)免疫原性最强的结构蛋白之一,由CP204L基因编码。本研究利用Bac-to-Bac昆虫杆状病毒真核表达系统将ASFV中CP204L插入p Fast Bac1载体下游,将形成的重组质粒p Fast Bac-p30以转座子的形式插入到DH10Bac中的杆状病毒穿梭质粒(Bacmid)中,筛选出重组Bacmid-p30后,将Bacmid-p30转染Sf9细胞,并继续传代3次,获得重组杆状病毒,命名为r Bac-p30。分别通过间接免疫荧光(IFA)和免疫印迹(Western blot)鉴定了ASFV阳性血清可特异性识别Sf9细胞中表达的p30。以此真核表达p30蛋白包被ELISA板,可区分ASFV阴阳性血清。以上结果表明,本研究初步建立了检测ASFV血清抗体的间接ELISA方法,为后续建立非洲猪瘟抗体检测方法和p30亚单位疫苗研究奠定基础。

非洲猪瘟病毒p54蛋白在昆虫细胞中的表达及其免疫原性分析

非洲猪瘟病毒(ASFV)p54蛋白由晚期基因E183L编码,是主要的结构蛋白之一。为了获得免疫原性强的p54蛋白,本研究将E183L基因克隆至pFastBac1载体中,取1μg重组质粒转座DH10Bac感受态细菌,经三轮蓝白斑筛选后,获得重组Bacmid-p54。将提取的Bacmid-p54质粒DNA转染Sf9细胞,出现明显病变后,收获细胞培养上清,在正常Sf9细胞中传三代,获得的杆状病毒命名为rBac-P54。利用SDS-PAGE检测rBac-P54感染后昆虫细胞的蛋白表达情况,并通过间接免疫荧光(IFA)和Western-blot鉴定p54蛋白的免疫原性。结果显示,在感染的Sf9细胞中,p54蛋白能获得高效表达,并可被ASFV阳性血清特异性识别。这表明杆状病毒系统表达的p54蛋白具有良好的免疫原性,为后续开展非洲猪瘟血清学诊断和p54功能研究奠定基础。

基于重组EP153R蛋白的检测非洲猪瘟病毒抗体的间接ELISA方法的建立

为探究非洲猪瘟病毒(ASFV)EP153R蛋白的功能和建立ASFV抗体间接ELISA方法,本试验构建了EP153R蛋白杆状病毒表达系统,采用Western blot与IFA鉴定rEP153R蛋白的表达和免疫原性。结果显示,杆状病毒能高效表达rEP153R蛋白且可被小鼠多克隆抗体识别,具有良好的免疫原性。以此重组蛋白为抗原进行间接ELISA方法的建立,经方阵ELISA确定当抗原包被量2.5μg/mL,ASFV阳性血清稀释比1∶1000时为最佳反应条件;以优化后的条件确定了抗体阳性临界值为0.259;特异性试验结果表明,该方法仅与ASFV阳性血清发生反应,具有较强的特异性;重复性试验结果显示变异率小于10%,重复性良好。利用该方法对46份猪血清进行检测,与商品化试剂盒检测结果对比显示,符合率为91.3%,能较好的区分ASFV阴性血清与阳性血清。本研究的结果为后续EP153R功能研究和ASFV临床血清学诊断奠定了基础。

浅谈无纸化办公信息化建设

在现代化、信息化建设步伐日益加快的今天,新型的网络化办公日渐走进人们的日常工作中,利用信息化技术方便、快捷的特点,无纸化办公为工作效率的增加提供了极大的助力。作为传统办公方式的纸质办公在实际的工作领域中,已经逐渐跟不上时代的步伐。本文将就信息化时代背景下的无纸化办公建设谈一下简单的认识,并对无纸化办公的未来做一个展望。

强化国土资源管理工作对促进可持续发展的意义

国土资源是社会发展的重要物质资源,在国民经济发展中占据着举足轻重的地位。文章结合工作实践体会,论述了当前我国现实国情下,强化国土资源管理工作对促进可持续发展的意义。

留置双腔气囊导尿管的并发症及处理

留置双腔气囊导尿管的并发症及处理ＣｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｏｆＦｏｌｅｙ’ｓＣａｔｈｅｔｅｒＩｎｓｅｒｔｉｏｎａｎｄＭａｎａｇｅｍｅｎｔ５１００９５广东省广州市肿瘤医院魏常青ＷｅｉＣｈａｎｇｑｉｎｇ（ＧｕａｎｇｚｈｏｕＭｕｎｉｃｉｐａｌＴｕｍｏｒＨｏ...

220例介入放射治疗的并发症及护理

采用介入放射方法治疗２２０例各种中晚期恶性肿瘤病人取得较好疗效。但也出现了穿喇部位血肿，胸腹疼痛，上消化道出血，肺栓塞，肝功能损害等并发症。本文着重论述了各种并发症的护理体会。

酸雨对种子萌发的影响

本试验模拟酸度分别为pH=5.0和pH=5.5两种酸雨,在这两种酸雨的条件下,通过测定种子的发芽率、发芽势、发芽指数、活力指数四个指标来分析酸雨对种子萌发的影响。试验结果表明:酸雨对绿豆种子萌发有一定的抑制作用。

国土资源信息系统基础平台的构建

国土资源信息管理系统是国土资源信息化的重要组成部分,对于提高国土资源管理效能和水平有重要作用。本文简述当前国土资源信息系统平台构建中存在的功能整合和数据整合问题,分析基础平台的构建。

探讨房屋建筑施工质量管理工作

房屋工程质量的好坏，直接关系到人们的生活质量。本文结合笔者实际工作，分析了房屋建筑工程质量管理的重要性以及现阶段工程质量方面存在的主要问题，并有针对性地提出了加强房屋工程施工质量管理的有效措施。

间日疟152例诊治体会

1991～1993年,我院收治疟疾病人152例,全部经血片检查确诊为间日疟。现将152例间日疟诊治的点滴体会介绍如下。1 临床资料1.1 一般资料;152例中男118例,女34例,其中合并妊娠5例.年龄最小10个月,最大54岁。以20～50岁为多,共129人。1.2 临床表现:具有寒战、高热、汗出热退典型症状的135例,占88％。不典型者17例,占12％。每天发作76例(50％),隔天发作61例(40％),不定期发作15例(10％)。伴头痛113例(74％),全身酸痛29例(19％),乏力108例(71％),纳差81例(53％).呕吐11例(7％),咳嗽10例(7％),腹泻1例。肝肿大34例(22％),脾肿大44例(29％)。

加强建设工程项目管理跟踪审计

本文对加强建设工程项目管理跟踪审计进行论述。第一部分论述了建设工程项目管理审计的涵义及必要性;第二部分论述如何加强工程项目管理跟踪审计,逐步由单纯的工程结算审计向建设工程项目管理跟踪审计进行延伸。第三部分论述建设工程项目管理审计目前存在问题及采取的相应措施。

全业务统一IP化承载技术及其发展趋势的探讨

伴随着信息技术的迅猛发展,3G通信业务、尤其是以IP业务为代表的数据、图像等传输业务的急剧增长,以及动态的数据业务特性所带来的新需求,使得IP业务承载技术的推广迫在眉睫。本文简要介绍了全业务统一IP化承载技术的背景,并对其发展趋势做了简要探讨。

An unexpected synthesis of an α,β,γ,δ-unsaturated ketone due to an abnormal opening of benzylidene acetal by bromide anion

An unexpected synthesis of an α, β, γ, δ-unsaturated ketone, which embodies a new type of oxy-carbon cyclic structure, was achieved, while we tried to construct the taxane CB-ring system. Also, a series of abnormal reaction phenomens was found to be related to the formation and reaction of seven membered cyclic benzylidene acetal.