初情期前母猪胚胎移植试验

177枚受精卵或2-细胞期胚胎,手术法移植到8头发情同期化的青年母猪体内,结果有4头妊娠,其中3头受体足月产仔22只,另一头受体在妊娠88天后宰杀,发现有6个发育正常的胎儿。移植受体妊娠率为50%,移植卵成仔(胎)率为15.8%。

转基因家畜研究概况

自从Palmiter(1982)首次取得转基因小鼠以来,不到十年的时间里,这一技术几乎在所有家畜上获得成功。本论述较详细地回顾了转基因家畜的方法,一般程序及基因整合和表达情况。在文献调研和综合分析的基础上,作者认为家畜育种方面的在分子水平上进行的这一遗传操作。

家兔去除粘蛋白层胚胎的体内外发育

104枚去除粘蛋白层的2-、8,16-细胞期和早期桑桩胚阶段的兔胚在TCM-199中体外培养120小时,结果分别有16.00％(8/50)、48.39％(15/31)和56.52％(13/23)的胚胎发育至囊胚,但无一囊胚继续发育。给10只受体移植的93枚去除粘蛋白层兔胚无一发育至胎儿,而6只受体移植的41枚未去除粘蛋白层的兔胚有3只怀孕,有4枚胚胎发育至胎儿。

初情期前小母猪的超数排卵及胚胎发育研究

对25头3～4月龄小母猪超数排卵(简称超排),平均每头供体获得24.12枚卵子,这种小母猪的超排卵能正常受精,受精率达93.1%.受精卵在体内能经历正常的发育,约有89.5%的受精卵能发育至桑椹期以上胚胎.

猪的胚胎移植

177枚受精卵或2—细胞期胚胎,手术法移植到8头发情同期化的青年母猪体内,结果有4头妊娠,其中3头受体足月产仔22只,另一头受体在妊娠88天后宰杀,有6个发育正常的胎儿。移植受体妊娠率50％(4/8),移植卵成仔(胎)率15.8％(28/177)。

家兔发情周期不同阶段超排效果试验

研究目的:目前,家兔超数排卵研究都侧重于使用不同激素、激素组合、剂量等外界因素方面。而有关影响超排效果的内因则仅限于品种,年龄诸方面,对家兔本身发情周期考虑较少。

家兔卵子体外受精研究

从供体母兔输卵管冲取成熟的卵母细胞,与体外获能的附睾精子或射出精子体外受精。三种获能方法分别是 His-DM 法、肝素法和附睾精子 DM 预培养法,获能精子与卵母细胞体外受精后的2-细胞胚胎发育率分别是36.37%(24/66)、12.57%(13/102)和35.33%(53/150)。体外受精后体外发育到2-至4-细胞期胚胎经移植给7只同期发情受体母兔,结果有2头怀孕并产仔9只,胚移产仔率为28.57%(2/7),移入胚胎成仔率为11.39%(9/79)。

猪卵子的体外成熟与体外受精研究

从屠宰猪卵巢中取出卵子,在体外培养30小时后卵丘扩散率为70.48%,第一极体释放率15.39%。卵丘层扩散的卵子用体外茯能的猪精液授精,受精率平均9.56%。将受精卵培养24小时,有51.22%卵子发育到2—细胞期,7.32%发育至4—细胞期,4.88%发育至8—细胞期。从经超数排卵的猪卵巢中取下3枚 A 级卵,用体外获能猪精液授精,培养24小时,其中2枚达到2—细胞期,再继续培养48小时,均达到16—细胞期。

猪早期胚胎体外培养和保存研究进展

早期胚胎的体外培养和保存不仅是研究胚胎生物学的基础,而且也是胚胎移殖推广和应用的先决条件。目前,家兔、牛、绵羊和山羊胚胎的体外培养与冷冻保存技术已基本成功,但猪这方面的研究却不足。

转猪生长激素基因家兔的研究

微注射法向家兔受精卵原核注入重组猪生长激素基因(pSMTPGH/BglI片段)。449枚注射卵经移植后共成胎和产仔56只。采集其中50只仔兔耳组织(约1克)提取总体DNA,用经Djgoxigenin-11-dUTP标记的3-5KbSMT-PGH探针对总体DNA斑点杂交,结果表明有15只仔兔为检测阳性。对上述阳性兔Southern印迹杂交进一步检测表明,有7只仔兔整合了导入的猪生长激素基因。出生仔兔中外源基因整合率为14％(7/50)。

精子能作为转移外源基因的载体吗?

目前,成功和高效的哺乳动物基因转移方法还不多,从近十年来报道已取得转基因动物的文献来看,主要有原核微注射法(Palmiter等,1982;Brem等,1985;Hammer等,1986;Simons等,1988;Purse(等,1990),反转录病毒为载体感染法(Jahner等,1985),胚胎干细胞转移法(Bradley等,1984)等。设想以精子为载体来转移外源基因。

转基因处理后代猪的整合检测

本研究对用猪精子电激转基因处理所获40头仔猪的总体DNA进行斑点杂交检测,结果如下:1 试验方法1.1 总体DNA的提取取0.5～1g猪尾部组织,在液氮中剪碎,加500ml消化液(10mM Tris·HCl、0.1mM EDTA,pH8.0,100μ g/ml蛋白酶K,0.5%SDS).在55℃水浴中保温消化3小时。

SMT非同位素标记探针的制备

本试验以一种核苷酸类似物Digoxigenin-11-dUTP(地高辛与dUTP的联接结构,地高辛只天然存在于毛地黄中,是理想的半抗原),用随机引物法掺入绵羊MT启动子(SMT),检测目的基因时再加入抗体一酶连接物(Anti-digoxigeninalkalinephosphatase)与地高辛发生免疫反应。

猪生长激素在养猪业上的使用

家畜内分泌研究中有关下丘脑～垂体～腺体三轴心系统相互作用与反作用机理的阐明和证实,对畜牧生产起到了现实的指导作用.在繁杂众多的各类内分泌激素中,研究得最彻底和已广泛使用的首推各种生殖激素,其次是与肉畜生产密切相关的生长激素(简称GH)及其释放和抑制因子.关于在养猪生产中使用外源GH,最早可以追溯到三十多年前Turman等(1955)对猪注射牛GH,但注射牛GH没有起到预期的促生长效果,使用人生长激素也未起显著作用.70年代,Machlin等使用从垂体提纯的猪GH,发现猪胴体品质可得以改良,日增重也得以提高.

家兔胚胎体外发育的研究

171枚2—细胞期兔胚在 TCM—199,Ham'sF—10、PBS 对照液和试验液中体外培养120小时。以在199组织培养液中的效果最佳,有65.0％(13/20)和30.0％ (6/20)的囊胚和孵出囊胚发育率。292枚2细胞兔胚在含20％FCS、兔、绵羊和猪血清及不同含量 FCS 的199液中培养。四种血清组的囊胚发育率分别为60.0％(27/45)、72.0％(18/25)、72.9％(27/37)、29.9％(7/26),孵出率分别为26.7％(12/45)、40.0％(10/25)、40.5％(15/37)、7.7％(2/26)。186枚1-、2-、4-、8-、16-细胞兔胚在相同条件下培养,结果4-、8-、16-细胞兔胚发育分别显著优于1-、2-、4-细胞兔胚(P<0.05)。72枚早期兔胚在37～38℃ PBS 中培养,平均有11.1％(8/72)胚胎可发育至囊胚,但未见孵出。

哺乳动物胚胎核移植

1981年瑞士日内瓦大学的Illmensee用受精卵核移植技术,首次制成了无性生殖小鼠,即所谓的“克隆小鼠”。随后不到10年时间,绵羊(Willadsen,1986)、牛(Prather等,1987)、家兔(Stice和Robl,1988)、猪(Prather等,1989)等家畜都成功地通过核移植方法获得了无性生殖后代。目前,哺乳动物的这一“复制”技术虽还不能即刻应用于生产,但可通过核移植来培育遗传性状完全一致的个体,这在畜牧科学或其他生命科学研究中会起举足轻重的作用。下面就此技术的一般程序和在家畜方面的成功经验作一简述。

猪源肠球菌的分离及生物特性的初报

本研究从猪粪便中分离了肠球菌两株 ,经菌种鉴定两株菌均为屎肠球菌。其生物特性的研究表明 :可耐受 1%的胆盐和 6 % Na Cl高盐 ,在 p H3.0条件下可存活 ,对绝大多数抗生素耐药。

猪生长激素基因在巴斯德毕赤酵母中的高效分泌表达及产物的N-糖基化分析

利用含有强启动子PAOX 1 和α MF信号肽序列的巴斯德毕赤酵母载体质粒pPICZαA构建出含PST基因的重组质粒pPICZαA pST。通过电击将经SacⅠ酶切后线性化的pPICZαA pST质粒转化到巴斯德毕赤酵母X 33菌中 ,并筛选Mut+ 表型的重组菌。表达产物的SDS PAGE和Westernblot结果表明 ,分泌于胞外的PST蛋白分子量比天然PST分子量稍大 ,而胞内的PST蛋白分子量与天然PST大小相同。将经SacⅠ酶切后线性化的pPICZαA pST再次转化重组酵母细胞X 33 pPICZαA pST(Mut+ ) ,所得表达产物的SDS PAGE和Westernblot结果显示 ,PST基因的表达水平明显提高 ,且表达产生的蛋白均可发生正确的抗原 抗体结合反应 ,表达量达 95 6mg L。将发酵液上清进行N 糖基化分析 ,显示rPST无N

猪维生素营养研究进展

综合评价了近几年来国内外研究较多的几种维生素 ,如维生素A、维生素D、维生素E、生物素、叶酸、烟酸、核黄素对猪的新营养作用和需要量。