程序性死亡受体1及其配体在眼睑基底细胞癌中的表达及临床意义

目的 探讨程序性死亡受体1 (programmed cell death-1,PD-1)与程序性死亡配体1(programmed cell death ligand 1,PD-L1)在眼睑基底细胞癌(BCC)中的表达及其临床意义。方法 收集2018—2021年于山西省眼科医院眼整形科行手术切除的眼睑基底细胞癌患者标本共20例作为病例组,取癌周围组织5例为对照组,采用免疫组织化学方法检测2组中PD-1、PD-L1的表达情况,利用图像分析系统测定2组中PD-1、PD-L1表达的平均阳性面积率及平均光密度。结果 在眼睑基底细胞癌组织中,PD-1、PDL1呈高表达,在癌周组织中,PD-1、PD-L1呈低表达;图像分析结果显示,PD-1、PD-L1在病例组的表达均高于对照组,2组差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PD-1/PD-L1通路在基底细胞癌的发病中起关键作用,为PD-1/PD-L1通路抑制剂在基底细胞癌患者中的作用的临床试验提供了理论基础。

人角膜缘干细胞的体外培养及鉴定

目的探讨人自体角膜缘干细胞(LSCs)体外培养及鉴定的方法。方法将供体新鲜人角膜缘组织在制备的含20%胎牛血清DMEM/F12培养基的羊膜载体上应用组织块培养法进行体外培养,对培养获得的LSCs用苏木精-伊红染色在倒置显微镜下进行形态学观察,用免疫荧光技术鉴定培养的LSCs细胞。结果组织块静置2h后贴壁良好,3～4d细胞从组织块边缘萌出,7～10d细胞出现生长高峰,12～14d形成良好的细胞单层。细胞形态呈多边形、圆形、卵圆形和梭形。第14天时行间接免疫荧光染色,可见大量细胞表达p63,呈细胞质的绿色荧光;少量细胞表达AE5,呈细胞质的绿色荧光和细胞核的红色荧光。结论组织块培养法体外培养的人LSCs具有与正常人LSCs相一致的生物学特性。

诱导性调节T细胞的体外扩增及其对小鼠角膜移植免疫排斥的抑制作用

背景 研究表明,CD4＋CD25＋自然调节性T细胞（nTregs）在维持外周免疫耐受及自身免疫平衡中起到重要作用,而体外诱导和扩增的诱导性调节性T细胞（iTregs）可通过过继转移的方式抑制器官移植的免疫排斥反应.目前iTregs的诱导方法仍在不断优化,且其对角膜移植的作用尚不明确.目的 研究iTregs的体外诱导和扩增方法,及其在体内对免疫排斥反应的抑制作用和在体外对效应T细胞（Teffs）增生的抑制作用.方法 从C57B L/6小鼠股骨骨髓组织中提取和培养骨髓来源树突状细胞（BMDCs）;取BALB/c小鼠脾脏,磁珠分选CD4＋ CD25＋T细胞和CD4＋ CD25-T细胞,将CD4＋ CD25-T细胞分为阴性对照组（单纯CD4＋CD25-T细胞）、CD3/28抗体珠组（CD4＋ CD25-T细胞＋抗鼠CD3/28抗体珠）、2.5 ng/ml转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导组和10.0 ng/ml TGF-β1诱导组.在不同质量浓度TGF-β1和抗CD3/CD28抗体珠（细胞和抗体珠比例为1：1）条件下诱导iTregs的生成,并使用抗CD3/CD28抗体珠（细胞和抗体珠比例为1：2）、白细胞介素-2（IL-2）和TGF-β1体外扩增iTregs.采用流式细胞仪检测Tregs各表面因子的表达,采用混合淋巴细胞反应分析体外扩增iTregs对Teffs的抑制能力.建立同种异体小鼠角膜移植模型（C57BL/6→BALB/c）,并将模型分为nTregs注射组、iTregs注射组和PBS组;根据分组经小鼠对侧眼球后静脉丛分别注射0.1 ml nTregs、体外扩增iTregs悬液和PBS,观察注射后3个组小鼠植片情况.结果 阴性对照组、CD3/28抗体珠组、2.5 ng/ml TGF-β1诱导组和10.0 ng/ml TGF-β1诱导组中CD4＋CD25-T细胞表达CD4＋ CD25＋T细胞的比例分别为（6±3）％、（91±4）％、（91±3）％和（86±6）％,其中CD3/28抗体珠组、2.5 ng/ml TGF-β1诱导组和10.0 ng/mlTGF-β1诱导组CD4＋CD25＋T细胞比例明显高于阴性对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.01）.CD3/28抗体珠组、2.5 ng/ml TGF-β1和10.0 ng/ml TGF-β1诱导组Foxp3＋T细胞比例分别为（1.18±0.20）％、（8.70±1.80）％和（21.80±3.36）％,其中2.5 ng/ml TGF-β1诱导组和10.0 ng/ml TGF-β1诱导组Foxp3＋T细胞比例明显高于CD3/28抗体珠组,且10.0 ng/ml TGF-β1诱导组Foxp3＋T细胞比例明显高于2.5 ng/ml TGF-β1诱导组,差异均有统计学意义（均P＜0.01）.体外扩增iTregs中CD69＋T细胞比例明显低于nTregs,PD-1＋、Foxp3＋和CD25＋T细胞比例均明显高于nTregs,差异均有统计学意义（均P＜0.01）.在1：1、1：2、1：4、1：8和1：16Tregs/Teffs比例条件下,iTregs与Teffs混合培养后Teffs的增生能力明显低于nTregs与Teffs混合培养组,差异均有统计学意义（均P＜0.01）.iTregs注射组角膜植片存活时间为4周,永久耐受者占50％,而nTreg组小鼠角膜植片的存活时间为3周,永久耐受者占17％,2个组比较差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 TGF-β1可诱导CD4＋ CD25-T细胞生成iTregs并高表达Foxp3,体外扩增iTregs较nTregs具有更强的抑制淋巴细胞增生能力,从而抑制角膜移植排斥反应的发生.

载药羊膜移植治疗感染性角膜溃疡的实验研究

背景 应用羊膜移植术治疗角膜溃疡的方法在临床上已广泛开展,但目前国内有关将羊膜作为药物载体治疗感染性眼表疾病的研究较少见. 目的 探讨载药羊膜在治疗眼表感染性疾病中的缓释性能并评价其疗效.方法 利用体外抑菌实验比较羊膜浸泡不同质量浓度（5、20、30 g/L）的左氧氟沙星不同时间（5、15、30、60 min）后平均抑菌环直径的改变.利用角膜基质层接种法将浊度为0.7麦氏单位的金黄色葡萄球菌菌悬液0.1ml自角膜近中央处注入角膜基质层,形成直径4.0～6.0 mm的混浊区,建立20只家兔单眼感染性角膜溃疡模型,采用随机数字表法将动物模型随机分为单纯羊膜移植联合点药组和载药羊膜移植组,每组各10只,两组家兔造模后24 h分别行单纯羊膜移植术或载药羊膜移植术.单纯羊膜移植联合点药组术后用质量分数0.5％左氧氟沙星滴眼液点眼,每日3次,分别于点眼后0.5、1.0、2.0、3.5、5.5h抽取房水0.1ml,载药羊膜移植组于术后1、3、7、10、14、21d抽取房水0.1ml,用高效液相色谱分析法检测各时间点兔眼房水中左氧氟沙星的质量浓度.各组大鼠在裂隙灯显微镜下观察角膜病变情况及角膜溃疡的面积变化,按照改进的McNeill角膜病变程度分级法对角膜病变进行评分,并于术后4周行兔眼角膜组织病理学检查.结果 左氧氟沙星体外抑菌实验表明,平均抑菌环直径随药物质量浓度的增加而增大,相同质量浓度左氧氟沙星浸泡15 min的羊膜与浸泡5 min相比抑菌环直径增大,差异均有统计学意义（P＜0.01）,但与浸泡30 min、60 min的羊膜相比差异均无统计学意义（P＞0.05）.单纯羊膜移植联合点药组术后房水中左氧氟沙星质量浓度随时间的延长而逐渐降低,0.5h为（0.873 ±0.264） mg/L,5.5h为（0.106±0.027） mg/L;载药羊膜移植组术后1、3、7d房水中左氧氟沙星质量浓度仍高于单纯羊膜移植联合点药组点药后0.5h,差异均有统计学意义（均P=0.00）.载药羊膜移植组家兔用药后1、2、4周角膜病变评分分别为1.7±0.6、1.3±0.5和0.2±0.4,明显低于单纯羊膜移植联合点药组的2.2±0.8、2.0±0.6和1.5±0.8,差异均有统计学意义（F分组=9.49,P=0.01；F时间=22.96,P=0.01）.术后1周载药羊膜移植组角膜溃疡面积明显小于单纯羊膜移植联合点药组,差异有统计学意义[（1.6±0.6）mm2 vs.（3.2±0.8）mm2,t=3.98,P=0.00].组织病理学检查显示,单纯羊膜移植联合点药组术后4周角膜各层排列不规则,出现1～2层新生鳞状上皮,基质层结构紊乱,可见较多炎性细胞浸润及残留血管腔；载药羊膜移植组术后4周角膜有4～5层新生鳞状上皮,排列整齐,仅见少量炎性细胞浸润及残留血管腔.结论 左氧氟沙星载药羊膜移植至角膜后具有一定的药物缓释性能,可以提高房水中的有效药物质量浓度,对金黄色葡萄球菌感染性角膜溃疡的疗效优于点眼的用药方式.

如何知道自己患了角膜炎

角膜炎及角膜溃疡是临床常见的角膜病,对眼睛危害较大。怎样预防该病呢?一般应注意以下几点:注意眼部卫生,不用脏手或脏手绢擦眼,预防沙眼及结膜炎。眼睛进了沙子,千万不能用手揉眼,

A型肉毒毒素联合手术治疗面瘫后面肌联动的效果

探讨A型肉毒毒素注射联合手术方法治疗面瘫后面肌联动的效果。2016年6月至2020年6月,山西省眼科医院整形科门诊及住院面瘫患者60例,男38例、女22例,年龄36~78(52.5±9.7)岁。病程1.2~9.5(4.9±3.5)年;均用A型肉毒毒素注射联合手术的方法治疗。患者面肌联动改善明显,治疗后Sunny-brook面部评分比治疗前显著降低,差异有统计学意义。A型肉毒毒素联合手术治疗面瘫后面肌联动是简单有效的治疗方法,患者满意度较高,经济负担小,见效快,值得临床应用。

干燥综合征患者活体角膜组织学变化的研究

目的应用共焦激光角膜显微镜观察干燥综合征（Sjogrensyndrome，SS）患者角膜上皮及上皮基底层下神经的组织学改变。方法用共焦激光角膜显微镜对22例干燥综合征患者进行检查，同时选择年龄与性别与之相匹配的15名正常人作对照，并对两组人员行角膜敏感度检查。结果（1）SS组与正常人对照组比较角膜敏感度下降（P=0．000）。（2）两组间角膜上皮基底细胞密度的变化无统计学意义（P〉0．05）。（3）关于角膜上皮基底层下神经纤维的改变：SS组神经数量比正常对照组增加（P=0．000）；神经密度比正常对照组增加（P=0．046）；神经弯曲度比正常对照组增加（P=0．001）；神经分支数也比正常对照组增加（P=0．040）。（4）神经弯曲度与角膜敏感度呈负相关（r=-0．304，P=0．029）。结论SS患者的角膜上皮、上皮基底层下神经纤维以及角膜敏感度均发生了一系列改变。

自体口腔黏膜上皮细胞培养眼表重建的实验研究

目的将自体培养的口腔黏膜上皮植片移植于重度碱烧伤后角膜缘功能完全缺乏的动物眼表，分期观察上皮恢复情况及其新生血管的生长情况。方法建立单眼重度碱烧伤模型．，随机分为对照组（不行移植）、单纯羊膜移植组、自体培养的口腔黏膜细胞移植组。术后每日在裂隙灯下观察角膜上皮染色、角膜混浊度以及新生血管生长情况并进行评分；测定角膜新生血管（CNV）长度，计算CNV面积；测量角膜微血管数量；检测血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达；利用印迹细胞技术观察角膜上皮重建情况。结果口腔黏膜上皮细胞移植组总评分、CNV面积、微血管计数、VEGF阳性表达量均最少。印迹细胞检查：口腔黏膜细胞移植组角膜上皮未发现杯状细胞。结论利用体外培养的自体口腔黏膜上皮细胞进行移植，可减少角膜新生血管的形成，其抑制新生血管的作用优于单纯羊膜移植抑制新生血管的作用。