血红素加氧酶-1对肺癌细胞失巢凋亡的影响

目的观察血红素加氧酶-1（remeoxygehase-1，HO-1）活性改变对人肺腺癌A549细胞失巢凋亡的影响。方法将野生型HO-1（wtHO-1）和失活突变体mHO-1G143H基因与质粒pcDNA3-1（＋）连接，构建野生型和突变型HO-1真核表达载体pcDNA3．1（＋）-wtHO-1和pcDNA3．1（＋）-mHO—1G143H。利用脂质体介导的方法将构建好的重组载体转染人肺腺癌A549细胞构建稳转细胞系，以空载体转染作为对照组。通过G418筛选建立稳定表达野生型和突变型HO-1的人肺腺癌A549细胞系。利用RT—PCR及Western印迹方法检测各稳转细胞系中HO-1mRNA和蛋白的表达水平。悬浮培养上述稳转细胞系，建立失巢凋亡模型：应用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果与空载体对照组相比，野生型HO-1过表达细胞系中，细胞失巢凋亡率明显下降；突变型HO-1过表达细胞系中，细胞失巢凋亡率增高。结论HO-1过表达可能抑制肺腺癌A549细胞的失巢凋亡能力，这种作用可能与HO-1催化活性相关。

以pET-SUMO质粒为载体的凋亡素组合肽基因工程菌的构建

目的构建以pET-SUMO为载体的凋亡素组合肽基因工程菌,建立简便易行、能够放大的重组凋亡素组合肽纯化方法和工序。方法以pET-SUMO质粒为表达载体,构建凋亡素组合肽基因工程菌,通过镍柱纯化、SDS PAGE、小肽电泳检测重组凋亡素组合肽表达水平,选取适合转化、生产需求的基因工程菌株。结果测序证实凋亡素组合肽与pET-SUMO成功重组,第78~209碱基为凋亡素组合肽的编码序列,200 mmol/L咪唑洗脱融合蛋白表达水平高,收率高。结论确定pET-SUMO凋亡素组合肽基因工程菌为凋亡素组合肽转化开发的备用菌株。