抗果蝇paf1复合体抗体的制备及其特性(英文)

Paf1复合体已在酵母菌被发现,并阐明了其在转录及RNA加工过程中发挥功能。我们在果蝇基因组数据库中鉴定出paf1的三个同源成分:paf1,CDC73和RTF1。应用纯化的重组蛋白,我们制备了抗果蝇paf1,CDC73和RTF1的抗体。这些抗体不但能够检测出果蝇内源性paf1成分,而且能检测出人类的paf1复合体的亚基。在多线染色体上,这些抗体所检测到的paf1复合体均位于转录的活性位点,并且与磷酸化的RNA聚合酶重合,表明果蝇paf1复合体参与了转录及其相关的分子活动。

慢性粒细胞性白血病骨髓细胞染色体期前凝集的研究

慢性粒细胞性白血病骨髓细胞染色体期前凝集的研究魏文祥谷俊侠郑斯英高锦声耿家举关键词染色体期前凝集白血病，粒细胞性，慢性细胞融合作者单位：苏州医学院生物学教研室（苏州２１５００７）１９７０年，Ｊｏｈｎｓｏｎ等［１］发现在仙台病毒作用下，分裂期与间期的Ｈ...

绒毛间期细胞期前凝集染色体的诱导及其意义

绒毛间期细胞期前凝集染色体的诱导及其意义魏文祥，郑斯英，高锦声，叶玲玲，鲍虹，潘１９７０年Ｊｏｈｎｓｏｎ等［１］发现在仙台病毒（Ｓａｎｄａｉｖｉｒｕｓ）的作用下，分裂期的ＨｅＬａ细胞和间期的ＨｅＬａ细胞发生融合，而且在间期细胞内出现一种期前凝集的染色...

医学研究生分子生物学教学体会

分子生物学是一门发展很快的新兴学科。在医学研究生分子生物学教学中,我们采取了讲授教材与新进展专题讲座相结合、使用中英文“鸡尾酒”式授课方法,教会学生利用网络资源快速获取新知识、坚持闭卷问答式考试与撰写综述和实验设计相结合的成绩考核办法等策略。这些措施对提高分子生物学教学水平和全面提高硕士研究生的分子生物学理论和实践起到良好的促进作用。

α—L岩藻糖苷酶对原发性肝癌的诊断价值

原发性肝癌患者血清α—L岩藻糖苷酶的活性明显升高,并随着病情的发展而变化,提示该酶可作为原发性肝癌诊断及监察的一个指标。

慢粒白血病骨髓细胞的染色体提前凝集的研究

本文应用细胞融合诱导染色体提前凝集(Prematurechromosomecodensation,PCC)技术,对7例慢粒患者进行间期染色体的研究。结果:7例慢粒患者的(Proliferativepotentialindex,PPI)平均值为37.3±11.5％。其中,5例临床慢性期患者PPI平均值为42.4±8.9％;2例缓解期患者PPI值分别是27.3％和21.9％。慢性期与缓解的PPI值有显著性差异(P<0.05)。而PPI值s期PCC及原始细胞数均无明显的相关性。

Ad-ING4对人前列腺癌细胞PC-3体内外抑癌效应的研究

背景与目的:腺病毒作为载体已被广泛用于肿瘤的基因治疗。ING4是生长抑制因子家族中的一个成员,是一种潜在的抑癌基因。本研究旨在探讨腺病毒介导的人ING4基因(Ad-ING4)对人前列腺癌细胞PC-3的体内外抑癌效应及其分子机制。方法:将扩增的Ad-ING4重组腺病毒感染PC-3细胞,用RT-PCR法检测ING4在PC-3细胞中的转录;MTT法检测ING4基因对PC-3细胞增殖的影响;流式细胞术和Hoechst33258染色法检测细胞凋亡的变化;半定量RT-PCR法检测ING4基因的表达对PC-3细胞中的bcl-2、bax、p53和caspase-3凋亡相关基因表达的影响。用Ad-ING4重组腺病毒在裸鼠PC-3移植瘤的瘤体内注射治疗,观察肿瘤生长变化,15d后处死裸鼠,摘除瘤体,称瘤重;用免疫组化法检测瘤组织中Bcl-2、Bax、Caspase-3和CD34蛋白的表达。结果:腺病毒介导的人ING4基因在PC-3细胞中成功转录,明显抑制PC-3细胞增殖,上调p53、bax、caspase-3基因表达和下调bcl-2基因表达,并诱导细胞凋亡。Ad-ING4重组腺病毒能显著抑制裸鼠PC-3移植瘤的生长,瘤重的抑制率达37%,与空病毒载体Ad-GFP组和细胞对照PBS组比较差异有统计学意义(P<0.05);免疫组化结果显示Ad-ING4重组腺病毒能明显上调Bax和Caspase-3蛋白的表达水平,下调Bcl-2和CD34蛋白的表达水平。结论:腺病毒介导的ING4基因在体内外均可明显抑制人前列腺癌细胞PC-3的生长,诱导其凋亡,其机制可能是上调P53、Bax、Caspase-3蛋白和下调Bcl-2蛋白表达水平。

miRNA在结肠癌早期诊断和筛选中的作用

miRNA(microRNA)是近年研究发现的存在于血液和结肠癌组织中的一类独特的小RNA,他们作为生物标志可准确地诊断结肠癌,并且能辅助预测结肠癌的复发.特异性miRNA过表达或沉默与结肠癌的发展和演进有关,肿瘤细胞的转移和耐药性涉及miRNA.组织和血液中的特异性miRNA差异表达为结肠癌早期诊断和筛选提供了应用前景.miRNA在肿瘤生成中的作用表明:miRNA在缓解和防止肿瘤复发中有着潜在的重要作用,他们可能成为肿瘤基因治疗的重要靶点.本文主要综述了特异性miRNA在结肠癌早期诊断和筛选中的作用.

RMP基因沉默对肝癌SMMC-7721细胞增殖和迁移能力的影响

目的:建立RMP(RPB5-mediating protein)基因沉默的稳定细胞株,研究RMP小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和迁移的抑制作用。方法:首先,体外合成3条RMP基因的siRNA,并转染到SMMC-7721细胞中,RT-PCR检测3条siRNA对RMP基因表达的抑制作用,筛选出最佳干扰序列;然后,pGPU6-Neo-RMP-484真核表达载体转染,G418筛选出稳定干扰RMP基因的细胞株,RT-PCR法检测该稳定细胞株中RMP基因的干扰效率,MTT法检测RMP-siRNA对SMMC-7721细胞增殖及细胞黏附能力的影响,划痕实验检测细胞迁移能力的变化。结果:利用RNA干扰技术成功建立了RMP基因下调的稳定细胞株,与SMMC-7721细胞对照组比较,其RMP mRNA表达水平下调了(83.67±2.56)%。稳定转染siRNA的细胞株细胞增殖受到抑制,增殖抑制率可达(74.33±0.58)%。稳定转染细胞株的细胞黏附能力有所增加,迁移率则相应降低。结论:成功筛选出了稳定转染RMP-siRNA重组载体的细胞株。pGPU6-Neo-RMP-484重组载体能有效抑制RMP基因在肝癌SMMC-7721细胞内的表达,可作为RMP分子机制研究的细胞模型。RMP基因的下调能有效抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖,使其黏附率增加,同时细胞的迁移率降低。

STAT4基因启动子区域单核苷酸多态性与中国汉族人群中克罗恩病的相关性

目的:分析信号转导子及转录激活因子4(STAT4)基因启动子区域单核苷酸多态性(SNP)位点rs16833431A>G的多态性与中国汉族人群克罗恩病发生的相关性.方法:选取汉族克罗恩病患者66例与健康对照者66名作为研究对象,抽提基因组DNA,采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测其STAT4基因启动子区域多态位点rs16833431A>G的基因型,计算基因型与基因频率,采用χ2检验进行组间比较.结果:STAT4基因rs16833431多态位点AA、AG和GG基因型频率在病例组中分别为0.5450.303和0.152,在对照组中分别为0.576,0.27和0.152,A和G等位基因的频率在病例组分别为0.697和0.303,在对照组分别为0.712和0.288.该位点基因型和等位基因分布在病例组与对照组均无统计学差异(P>0.05).结论:STAT4基因启动子区域rs16833431A>G位点单核苷酸多态性与中国汉族人群克罗恩病发生无明显相关性.

中国汉族人群NKX2-3基因上游区域rs10883365多态性与克罗恩病的相关性

背景:克罗恩病(CD)是一种复杂的多基因病,其病因和发病机制尚未完全阐明。最近研究显示NKX2-3基因上游区域rs10883365位点遗传变异与日本人群的CD发病呈正相关。目的:分析rs10883365位点多态性与中国汉族人群CD发病的相关性。方法:中国汉族CD患者和健康对照者各66例纳入研究,采用PCR-RFLP方法检测rs10883365位点基因型,并对酶切反应PCR产物行基因测序,比较两组间基因型和等位基因频率。结果:CD组rs10883365位点GG、AG和AA基因型频率分别为28.8%、47.0%和24.2%,G和A等位基因频率分别为52.3%和47.7%;而健康对照组相应基因型频率分别为27.3%、48.5%和24.2%,等位基因频率分别为51.5%和48.5%。两组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:NKX2-3基因上游区域rs10883365位点多态性与中国汉族人群的CD发病无明显相关性。

含静止无功补偿装置的光伏电站高频谐振分析及抑制策略研究

光伏电站汇流网络的阻抗分布复杂,与静止无功发生装置(static var generator,SVG)及电网阻抗交互作用引发的高频谐振问题机理不明,且缺乏有效的高频谐振抑制措施,频发的高频谐振问题已威胁到了光伏并网系统的安全稳定运行。论文针对含静止无功装置的光伏电站高频谐振机理及其振荡抑制措施开展研究工作。首先,建立光伏电站统一阻抗模型,分析光伏电站中各装置阻抗的高频影响因素,并建立高频特征阻抗模型;然后,通过构建光伏电站的序阻抗网络,将光伏电站等效聚合为源–载阻抗系统,分析光伏电站高频谐振的形成机理及其影响因素;提出一种基于SVG高频阻抗重塑的光伏电站谐振抑制方法,通过SVG高频相角补偿实现光伏电站高频振荡的有效抑制,并给出参数整定方法;最后,采用RT-LAB控制硬件在环完成高频振荡机理分析及其抑制控制的实验验证。

青藏高原地区日光温室的保温提温措施

随着设施蔬菜栽培的推广应用，日光节能温室在青藏高原地区设施农业中所起的作用也越来越重要，但由于设施在建设和管理中存在着许多问题，使得许多温室发挥不了应有的效益，究其原因除了栽培技术外，更重要的还是温度控制问题。因此，若要在栽培中取得可观的经济效益，必须在温室建造时和蔬菜栽培当中解决保温、提温问题。

B7-H4实时荧光定量PCR检测方法的建立及其在人胃癌组织中的初步应用

目的建立实时荧光定量PCR检测B7-H4的方法并初步应用于人胃癌组织。方法将B7-H4和内参GAPDH的PCR扩增产物经测序鉴定正确后克隆入载体pMD19－T，构建重组质粒标准品，并纯化、定量及梯度稀释，分别建立B7．H4和GAPDH的标准曲线，应用实时荧光定量PCR检测8例人胃癌组织中的B7一H4相对于GAPDH的表达情况。结果B7．H4的最低检测拷贝数为5．27拷贝，线性范围5．27×10^1～5．27×10^7拷贝，标准曲线方程Y=-3．1395X＋41．805，直线回归相关系数r=0．994904，批间变异系数范围2.39％～3．59％，扩增效率108．2％；GAPDH的最低检测拷贝数为38．6拷贝，线性范围3．86×10^2～3．86×10^7拷贝，标准曲线方程Y=-3．2436x＋41．083，直线回归相关系数r=0．998913，批间变异系数范围2．26％～3．86％，扩增效率103．4％。8例人胃癌组织的B7．H4相对于GAPDHmRNA表达水平在0．044～0．888之间。结论荧光定量PCR检测B7．H4的方法具备较高的敏感性和特异性，且系统有良好的重复性和线性范围。

25例慢性粒细胞白血病骨髓细胞的PCC研究

早熟染色体凝集（PCC）新技术是遗传学和细胞动力学的结合。它的原理是以分裂期细胞作诱导细胞,通过细胞融合,诱导间期细胞染色质提前凝集成染色体.间期细胞染色体的形态,取决于融合时间期细胞在细胞周期中所处的生长时相。分别有G1、S和G2 PCC. G1

绒毛间期细胞熟前凝聚染色体的研究

1970年,Johnson等发现,在仙台病毒的作用下,分裂期与间期的HeLa细胞发生融合,在间期细胞中出现了一种熟前凝集的染色体(prematurely condensed chromosome,PCC)。

RPB5介导蛋白与HBx蛋白共表达对肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的通过乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)与RPB5介导蛋白(RMP)在肝癌Hep G2细胞中的共表达,探索RMP与HBx对肝癌细胞凋亡的影响。方法脂质体介导瞬时转染细胞;实时荧光定量RT-PCR和western blot分别检测RMP与HBx在肝癌Hep G2细胞中的表达量;流式细胞仪检测细胞凋亡率;逆转录PCR检测细胞凋亡相关基因Bax、Caspase3、P53、Bcl-2 mRNA相对表达水平,western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达。结果与未经任何处理的Hep G2细胞比较,转染RMP质粒的稳定表达HBx的Hep G2细胞中RMP、HBx在基因及蛋白质水平表达均显著升高(P<0.01);细胞凋亡率显著降低;促凋亡基因Bax、Caspase3和P53 mRNA相对表达水平均显著下调(P<0.01),凋亡抑制基因Bcl-2 mRNA相对表达水平显著上调(P<0.01);促凋亡蛋白Bax表达量明显降低,抗凋亡蛋白Bcl-2表达量明显升高。结论 RMP与HBx共表达可降低肝癌Hep G2细胞凋亡率,提示RMP和HBx可能在肝癌发生和发展过程中起着重要的作用。

RMP与肝细胞癌的发生发展

肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是世界第六大常见癌症,也是第三大致死的癌症疾病,发病率高,发病机制不明确,复发转移早,疗效差,危害大。但是目前世界上相关的治疗手段匮乏,而且治疗效果并不显著。RPB5结合蛋白（RPB5melliating protein,RMP）,又名URI,

牛磺酸对大鼠酒精性脑损伤组织中TNF-α水平的影响

目的观察牛磺酸对大鼠酒精性脑损伤组织中TNF-α水平的影响。方法采用给予乙醇灌胃制造酒精性脑损伤模型的方法,40只雄性Wistar大鼠随机分为对照组和牛磺酸组两组。对照组仅给予500ml/L的乙醇灌胃8周,牛磺酸组给予同等量乙醇灌胃,同时给予牛磺酸8周。研究结束后,抽取大鼠腹主动脉血液,断头取脑,检测各组血浆及脑组织中内皮素(ET)、肿瘤坏死因子(TNF-α)的水平。结果牛磺酸组血浆ET([168.59±3.08)pg/mlvs(200.57±4.42)pg/ml]、脑组织匀浆TNF-α([12.03±0.26)ng/gvs(19.06±0.31)ng/g]均明显低于对照组(P<0.01)。结论牛磺酸可降低大鼠酒精性脑损伤组织中TNF-α水平。

慢性粒细胞白血病的临床与细胞遗传学的研究

慢性粒细胞白血病(慢粒)是一种造血系统的慢性恶性增殖性疾病,我室经研究10年,探讨慢粒的病因、诊断、临床分型、予测复发等工作,兹将有关资料,综合报告如下。一、109例慢粒的临床分期与Ph 染色体关联的研究总结109例大系列Ph 阳性慢粒,进行Ph 染色体的出现率与临床分期相关性的深入研究。采用骨髓短期培养G 显带染色体制备,每例慢粒患者各检查20个完整的分裂相。根据ISCN确认,计数Ph 染色体的出现率。