2株鸭甲肝病毒的分离及其全基因组序列分析

为深入研究鸭甲肝病毒(DHAV),本研究通过RT-PCR方法和血清中和法分离鉴定得到两株DHAV(命名为A株和H株)。采用RT-PCR方法分段克隆这两个分离株的全基因组序列。分析结果显示,A株的基因组全长为7 647 nt(不含polyA序列),5'和3'非编码区长度分别为583 nt和314 nt,单一ORF为6 759 nt,编码2 253个氨基酸;H株的基因组全长为7 648 nt(不含polyA序列),5'和3'非编码区长度分别为482 nt和314 nt,单一开ORF为6 852 nt,编码2 284个氨基酸。A和H分离株与DHAV-1参考株比较,其核苷酸同源性分别为93.4%～97%和92.7%～95.8%。遗传进化分析表明,DHAV-1型主要分为两个亚群,这两个病毒分离株分别属于不同的亚群。

猪繁殖与呼吸综合征病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立

根据GenBank中已登录的美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)在Nsp7基因中的保守区域设计合成了1对特异性引物,通过反应条件的优化,建立了检测美洲型PRRSV的SYBRGreenⅠ实时定量PCR检测方法,同时与商品化荧光定量PCR试剂盒进行比对分析。结果表明,该方法特异性强,灵敏度高,能很好的区分美洲型猪繁殖与呼吸道综合征病毒和其他病毒。使用该方法对14份临床样品进行检测,阳性率85.7%,与商品化试剂盒符合率100%。

鸭肝炎病毒GD株的分离与RT-PCR鉴定分析

本研究分离了1株鸭肝炎病毒(duck hepatitis virus,DHV),并对其进行了分型研究。取广东某鸭场疑似DHV致死8日龄雏鸭肝脏,肝脏组织处理后经鸭胚接种分离纯化病毒。分离毒株经动物回归试验、ELD50测定、中和试验等确定为血清Ⅰ型DHV,同时通过RT-PCR检测及序列分析,从基因分型角度也验证分离毒株为DHV-Ⅰ,并将该分离毒命名为GD株。

樱桃谷鸭感染Ⅰ型鸭肝炎病毒的病理组织学观察

鸭病毒性肝炎是由鸭肝炎病毒（DHV）引起雏鸭发生的一种急性、高度致死性传染病。剖检变化主要表现为肝脏表面不同程度的出血。鸭肝炎病毒在1949年首先发现于美国长岛[1],传统上多将该病毒分为3个血清型,分别为I型、Ⅱ型和Ⅲ型（DHV-I、DHV-Ⅱ和DHV-Ⅲ）,其中中国主要流行DHV-Ⅰ,而DHV-Ⅱ主要流行于英国,

鸭肝炎病毒GD株的全基因组序列测定与分析

为了给在分子水平上研究鸭肝炎病毒(DHV)的致病机理奠定基础,进一步丰富DHV的遗传变异和进化信息,试验采用RT-PCR方法分段克隆获得DHV-1 GD株的全基因组序列并进行序列分析。结果表明:GD株的基因组全长7 690 nt[不含Poly(A)尾],5'端和3'端非编码区长度分别为626 nt和314 nt,单一开放阅读框架(ORF)为627～7 376 nt,编码2 249个氨基酸;GD株与DHV-1参考株比较,其核苷酸和氨基酸同源性分别为94.8%～99.7%和97.7%～99.6%;与中国台湾和韩国新型DHV(DHV-N)相比同源性分别为72.7%～73.2%和81.8%～83.4%;GD株与DHV-1参考株遗传进化关系较密切,处于同一分支,而与DHV-N遗传关系较远,处于不同分支。

2株猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离、鉴定及遗传进化分析

为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行株的变异特点,本试验从广东省疑似猪繁殖与呼吸综合征发病猪场采集的血清中分离到2株PRRSV,经RT-PCR检测为阳性,通过Marc-145细胞进行传代,能产生明显细胞病变。2株病毒分别命名为LZ-GD和LB-GD株PRRSV。对2株病毒的ORF5和Nsp2高变区进行序列测定和进化分析,结果显示,LZ-GD和LB-GD株的ORF5核苷酸序列与欧洲型代表株Lelystad株的同源性相对较远,分别仅为63.5%和63.8%,与美洲株经典毒株VR-2332的同源性分别为88.7%和89.1%,与中国高致病美洲毒株JXA-1的同源性分别为99.2%和99.3%。在分离病毒的Nsp2上存在30个氨基酸的不连续缺失,与中国高致病性变异株JXA-1的缺失位置一致,且同源性为99.1%和98.9%,结果表明分离的2株PRRSV均属于美洲型的变异株PRRSV。

规模种猪场常见疾病净化的原理和方法

2018-2019年养猪业受到非洲猪瘟(African Swine Fever,ASF)的严重打击,产量大幅减少;受供求关系影响,2019年6月-2021年6月猪价上升到历史新高,其中2020年2月全国平均最高达到37.88元/kg,这个时间段只要猪只能养活出栏,都不会亏钱,除非发生ASF后清场。在猪价疯狂阶段种猪短缺,健康度差和雌性多元肉猪都被用作后备猪,猪伪狂犬病、猪蓝耳病(PRRS)、猪流行性腹泻(PED)、猪胸膜肺炎等病通过引种(精液)等方式趁虚而入,导致目前猪场健康度普遍下滑,不少疾病净化场重新转阳。

鸭肝炎病毒VP1和VP3基因的克隆及其杆状病毒表达载体的构建

为了构建鸭肝炎病毒VP1和VP3结构蛋白基因的杆状病毒表达载体,以RT-PCR方法扩增鸭肝炎病毒的VP1和VP3基因,克隆至pGEM-T载体。经筛选测序验证后,以BamHⅠ+XhoⅠ双酶切回收VP1和VP3目的片段,与经相同方法处理的杆状病毒转座载体pFastBac1连接,得到重组质粒pFastBac1-VP1和pFastBac1-VP3。将经酶切及测序鉴定的阳性重组质粒转化入含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac,发生转座作用,经抗性及蓝白斑筛选,成功获得各自携带VP1和VP3基因的重组穿梭载体,将其命名为rBacmid-VP1、rBacmid-VP3。研究结果为进一步在昆虫细胞中表达VP1或VP3基因,开发研制鸭肝炎病毒基因工程疫苗奠定了基础。