酸敏感钾通道-3真核表达载体的构建及其在SH-SY5Y细胞中的表达

目的:构建酸敏感钾通道-3(TASK3)的真核表达载体,通过转染SH-SY5Y细胞建立稳定表达的细胞株。方法:将TASK3亚克隆至p EGFP-N1质粒上,构建重组质粒p EGFP-TASK3,利用X-fect试剂盒将其转染至SHSY5Y细胞中,通过G418辅助荧光筛选建立稳定表达TASK3-e GFP的细胞株;Western blot和激光共聚焦检测TASK3-e GFP的表达及细胞内定位;不同p H值(7.0、6.7、6.4、6.1)作用稳定表达细胞株24 h后,CCK-8检查细胞活力。结果:重组真核表达载体构建正确,获得了TASK3-e GFP稳定表达细胞株。不同p H值作用野生型和稳定表达细胞株24 h后,两组细胞的存活率随着p H值降低而显著降低(P<0.05)。相同p H值下(除p H 7.0),稳定表达细胞存活率较野生型细胞显著升高(P<0.05)。结论:成功构建p EGFP-TASK3真核表达载体,建立了稳定表达TASK3-e GFP的SH-SY5Y细胞株,该细胞可为研究TASK3的功能奠定基础。

人P2X7真核表达载体的构建及稳定转染细胞株的建立

目的:构建人P2X7基因的真核表达载体,并通过转染获得稳定表达P2X7分子的HEK293细胞株。方法:以人脑组织P2X7c DNA为模板扩增出P2X7基因,插入到真核表达载体p EGFP-N1中,构建重组质粒p EGFPN1/P2X7。用X-fect试剂盒将重组质粒转染HEK293细胞,通过G418辅助荧光筛选建立稳定表达P2X7-EGFP细胞株。经流式细胞仪、Western blot和激光共聚焦显微镜检测,了解人P2X7在HEK293细胞中的表达水平及细胞内定位。结果:重组质粒p EGFP-N1/P2X7构建正确,建立了稳定表达人P2X7的HEK293细胞系。Western blot和流式细胞仪检测证实,P2X7在HEK293细胞系中成功表达,激光共聚焦显微镜检测显示P2X7-EGFP定位在细胞膜上。结论:重组载体p EGFP-N1/P2X7构建成功并建立了稳定表达人P2X7的HEK293细胞系,为进一步研究P2X7离子通道结构和功能奠定基础。

芦荟多糖对小鼠抗肿瘤作用的实验研究

目的研究中华芦荟多糖(AP)对小鼠的抗肿瘤作用。方法观察不同浓度中华芦荟多糖对移植性S180肿瘤小鼠和EAC荷瘤小鼠的抑瘤率,对EAC荷瘤小鼠肿瘤坏死因子(TNF)含量的影响,并以脾系数为指标,观察中华芦荟多糖对环磷酰胺(CTX)的增效减毒作用。结果不同浓度的中华芦荟多糖对S180荷瘤小鼠和EAC荷瘤小鼠的肿瘤均具有不同程度的抑制作用。结论中华芦荟多糖可显著改善CTX引起的机体生理机能紊乱,提高其抑瘤作用。

牛磺酸对睡眠剥夺大鼠学习记忆的影响

目的:研究牛磺酸(taurine,Tau)对睡眠剥夺(sleep deprivation,SD)大鼠学习记忆的影响。方法:用小平台水环境(flower pot)法建立SD大鼠模型,SD72h后用Morris水迷宫测定大鼠学习记忆能力。结果:SD72h后逃避潜伏期实验组显著低于对照组,穿环系数实验组显著高于对照组,且以中剂量组的效果最好。结论:牛磺酸对SD所致的大鼠学习记忆障碍有明显的改善作用。

硫化氢对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的保护作用及其机制

目的探讨硫化氢(H2S)对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的保护作用及其机制。方法♂SD大鼠随机分成3组:假手术组、脑缺血/再灌注(I/R)组和硫氢化钠(NaHS)+I/R。线栓法建立大鼠左侧大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,缺血2 h,再灌注24 h后,计算各组死亡率、Longa评分标准进行神经功能缺陷评分,2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色测量脑梗死体积,免疫荧光法检测大脑皮质和海马组织中P2X7受体蛋白表达。结果 NaHS+I/R组大鼠死亡率(27.27%)明显低于I/R组(42.86%),该组大鼠神经功能缺陷评分也明显低于I/R组(P<0.05),且脑梗死体积(21.88%±3.53%)明显低于I/R组(36.71%±3.73%)(P<0.01)。免疫荧光结果显示,与假手术组相比,I/R组大脑皮质、海马CA1区P2X7阳性表达细胞数明显增多(P<0.01);与I/R组相比,NaHS+I/R组大脑皮质、海马CA1区P2X7阳性表达细胞数明显减少(P<0.01)。结论 H2S可对局灶性脑缺血/再灌注损伤大鼠发挥脑保护作用,其机制可能与下调P2X7受体蛋白表达有关。

自噬参与低氧预处理抗PC12细胞糖氧剥夺损伤过程

目的:观察低氧预处理(HPC)对氧糖剥夺(OGD)损伤的PC12细胞的作用,同时探讨自噬在其中的作用。方法:培养的PC12细胞按照处理因素分为6组:对照组、HPC模型组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、低氧预处理后氧糖剥夺(HPC+OGD)组、3-甲基腺嘌呤预处理后行低氧预处理及氧糖剥夺(3-MA+HPC+OGD)组和OGD组。CCK-8检测细胞存活率;caspase-3活性检测试剂盒检测酶活性;TUNEL染色和流式细胞术检测细胞凋亡的情况;Western blot法检测自噬相关蛋白LC3、beclin-1和凋亡相关蛋白caspase-3的表达。结果:与对照组相比,OGD组细胞存活率明显降低;与3-MA+HPC+OGD组及OGD组相比,HPC+OGD组细胞存活率明显升高(P<0.05)。与对照组相比,OGD组细胞的caspase-3酶活性明显升高;与3-MA+HPC+OGD组及OGD组相比,HPC+OGD组的caspase-3酶活性明显降低(P<0.05)。与对照组相比OGD组细胞凋亡明显增多;HPC+OGD组与OGD组相比凋亡明显减少(P<0.05)。此外,与对照组相比,OGD组的激活型caspase-3蛋白水平明显升高(P<0.05);且HPC+OGD组与OGD组相比激活型caspase-3蛋白水平明显减少而LC3、beclin-1的蛋白水平明显升高(P<0.05)。结论:HPC抗OGD损伤的机制可能与其激活细胞自噬有关。

胞外高浓度ATP诱导SH-SY5Y细胞的自噬和凋亡

目的:观察胞外高浓度ATP损伤人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的作用,探讨损伤中自噬和凋亡发生的规律和特点。方法:培养的SH-SY5Y细胞按照加入ATP的浓度和作用时间进行分组。CCK-8法检测细胞生存率,单丹磺酰戊二胺染色检测自噬空泡的变化,Hoechst 33258染色检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞凋亡率变化,蛋白质印迹法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)及微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(microtubule-associated protein 1 light chain 3-Ⅱ,LC3-Ⅱ)的表达。结果:(1)与对照组相比,不同浓度(3、6、9、12、15 mmol/L)的ATP作用3 h均使SH-SY5Y细胞存活率明显降低,且呈剂量依赖性;不同作用时间(1、2、3、6 h)ATP(6 mmol/L)也可使SHSY5Y细胞存活率明显降低,3 h达高峰,呈时间依赖性。(2)ATP作用1 h时SH-SY5Y细胞自噬空泡显著增多(P<0.05),随时间延长,6 h时降到对照水平;ATP作用1 h时,LC3-Ⅱ表达显著增强(P<0.05),形成高峰,与自噬空泡增多的时点重合,2 h、3 h时LC3-Ⅱ表达水平逐渐减弱,6 h时降到对照水平。(3)与对照组相比,ATP作用3 h后细胞凋亡率达高峰(P<0.05),6 h时仍然保持在3 h的水平;cleaved caspase-3表达量同步增强(P<0.05),6 h时达高峰。结论:胞外高浓度ATP能够诱导SH-SY5Y细胞自噬和凋亡;自噬增强在前,凋亡高潮在后;随着ATP作用时间的延长,凋亡占主导地位。

维生素C对醋酸铅所致小鼠血中金属元素变化的干预作用

目的探讨维生素C对铅中毒小鼠血中金属元素含量变化的影响。方法健康昆明种小鼠36只随机分为对照组、模型组与观察组各12只,对照组每日给予蒸馏水(10 ml.kg-1)灌胃;模型组每日1次给予醋酸铅溶液(浓度为6 g.L-1)60 mg.kg-1灌胃;观察组先给予醋酸铅溶液(用法同模型组),1 h后给予维生素C溶液(浓度为8 g.L-1)80 mg.kg-1,连续灌胃8 d后采血,用BS微量元素分析仪测定全血中金属元素的含量。结果模型组与对照组全血铅、铜、锌含量均有显著性差异(P均<0.01)。观察组与对照组相比全血铅、锌的含量有显著性差异(P均<0.05),全血铜无显著性差异(P>0.05)。模型组与观察组相比全血铅、铜、锌的含量亦均有显著性差异(P均<0.05)。全血铁和血浆钙的含量各组间均无显著性差异(P均>0.05)。结论醋酸铅中毒可引起血锌下降和血铜升高,维生素C可使醋酸铅中毒时血锌下降程度及血铜升高程度减轻,维生素C可能具有拮抗铅的毒性作用。

低氧预处理对大鼠缺血-再灌注性脑损伤中凋亡及Fas和Fas-L蛋白表达的影响

目的押观察分析低氧预处理对大鼠缺血-再灌注性脑损伤凋亡及Fas、Fas-L蛋白表达的影响。方法押实验于2004-09/2006-04在新乡医学院神经生物学实验室完成。选择成年SD大鼠24只熏随机抽签法分为假手术组、缺血-再灌注模型组、低氧预处理组,每组8只。参照Zea-Longa改良的动脉线栓法制备脑缺血-再灌注模型熏以动物缺血侧上下肢体瘫痪,围绕缺血对侧呈逆时针绕圈穴追尾现象雪为模型制备成功表现。缺血-再灌注模型组大鼠缺血3h后再灌注24h。低氧预处理组的大鼠在以300mL/min流量灌入N2和O2混合气体的密闭容器中处理3h恢复12h后,采用动脉线栓法缺血3h再灌注24h后取材,经处理后制备切片;假手术组仅切开一侧皮肤暴露颈总动脉。各组切片标本采用苏木精-伊红染色、免疫组织化学染色及TUNEL染色,观察神经组织学特征熏Fas、Fas-L蛋白表达和细胞凋亡情况。并在不同时间(缺血1,2,3h再灌注1,4,8,24h)观察大鼠神经功能缺失情况。结果:纳入大鼠24只,均进入结果分析,无脱失值。①缺血3h再灌注8h后低氧预处理组神经行为缺失计分低于缺血-再灌注模型组眼穴0.6±0.5雪熏穴1.3±0.5雪分,t=2.546熏P=0.023演;再灌注24h后低氧预处理组神经功能缺失计分显著低于各缺血-再灌注模型组眼(1.1±0.6),(0.4±0.5)分,t=2.376熏P<0.05演。②神经组织学特征押缺血-再灌注模型组缺血区中心神经组织结构完全破坏。神经元大部分坏死,细胞间隙明显增宽。缺血边缘区神经元肿胀、形态变为角形或扇形熏神经元周神经纤维呈空泡状或海绵状熏神经胶质细胞肿胀。低氧预处理组损伤程度轻于缺血-再灌注模型组。③低氧预处理组在缺血半球亦可监测到凋亡细胞,右侧均为阴性,凋亡细胞形态与缺血-再灌注模型组相似,但数量少于缺血-再灌注模型组眼(23.1±4.4),(39.4±2.4),P<0.05演。④假手术组及非缺血侧大脑半球Fas、Fas-L蛋白表达微弱。缺血-再灌注模型组和低氧预处理组缺血侧Fas、Fas-L蛋白有明显表达,与假手术组比较差异有显著性意义眼穴27.3±2.8雪熏穴11.1±2.2雪熏穴0.8±1.2雪个/视野熏P<0.05演,眼穴24.6±3.6雪熏穴9.6±1.7雪熏穴0.5±0.8雪个/视野熏P<0.05演。低氧预处理组Fas、Fas-L蛋白表达水平显著低于缺血-再灌注模型组(P<0.05)。结论押低氧预处理可减轻局灶性缺血再灌注脑损伤,减少大鼠脑缺血-再灌注后的脑细胞凋亡和神经功能缺失。抑制Fas、Fas-L蛋白表达可能是其发挥保护作用的分子机制之一。

核因子-κB对感染性休克小鼠心肌细胞凋亡的影响

目的探讨核因子-κB(NF-κB)对感染性休克小鼠心肌细胞凋亡的影响,了解感染性休克时心功能减退的机制。方法随机将20只Wistar小鼠分为感染性休克组和对照组。感染性休克组(n=10)小鼠麻醉后固定,沿腹正中线作1.5 cm切口,结扎盲肠根部,用14号针头穿刺盲肠4次,之后将盲肠还纳腹腔,逐层缝合腹壁切口,于12 h后断头取血,分离血清,并留取其心脏组织标本。对照组小鼠(n=10)除不进行盲肠结扎穿孔外,其余操作均同感染性休克组。均采用免疫组织化学法测定二组心肌组织NF-κB蛋白表达及心肌细胞凋亡情况。结果感染性休克组心肌细胞内NF-κB抗原表达明显上调,其中强阳性9例,中等阳性1例;对照组呈阴性8例,弱阳性2例,二组阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)。感染性休克组心肌细胞凋亡指数(5.33±0.49)明显增加,与对照组心肌细胞凋亡指数(0.65±0.08)比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论小鼠感染性休克过程中,NF-κB蛋白表达升高,心肌细胞凋亡增加,可能是感染性休克时NF-κB通过心肌细胞凋亡信号转导的作用,导致心肌细胞凋亡增加,以致心功能减退。

脂多糖刺激N9小胶质细胞释放炎性因子的时间和剂量效应

目的研究脂多糖刺激N9小胶质细胞释放炎性因子的时间和剂量效应。方法不同剂量脂多糖刺激N9小胶质细胞,在不同时间点,酶联免疫吸附试验检测培养基中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,硝酸还原酶法检测培养基中一氧化氮(NO)水平,Western blot检测细胞质和细胞核中核转录因子-κB(NF-κB)蛋白水平。结果刺激6、12 h后,各脂多糖组培养基中IL-1β和NO水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),刺激24 h后1 000、10 000μg.L-1脂多糖组培养基中的IL-1β和NO水平均较对照组升高(P<0.01)。刺激30 min后,各脂多糖组培养基中TNF-α水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),刺激6、24 h后,各脂多糖组培养基中TNF-α水平均较对照组升高,差异有统计学意义(P<0.01),且1 000μg.L-1脂多糖组TNF-α水平最高。Westernblot检测结果显示,各脂多糖组细胞质和细胞核内NF-κB蛋白水平较对照组显著增多(P<0.01),其中1 000μg.L-1脂多糖组细胞质和细胞核中NF-κB蛋白水平最高。结论 1 000μg.L-1脂多糖是激活N9小胶质细胞诱发其炎症反应的最佳剂量,脂多糖作用6 h主要促进TNF-α的释放,作用24 h后则IL-1β和NO的释放明显增加。

三磷酸腺苷对N9小胶质细胞的损伤作用及其机制

目的:研究三磷酸腺苷(ATP)对N9小胶质细胞的损伤作用及其机制。方法:取对数生长期N9小胶质细胞,随机分为3组:(1)正常对照组:常规培养,不进行ATP处理;(2)ATP组:接种24 h后行ATP处理;(3)KN-62(P2X7受体阻断剂)干预组:KN-62孵育30 min后行ATP处理,且KN-62存在于ATP作用整个过程。XTT法测各组N9小胶质细胞的活力;倒置相差显微镜观察细胞形态变化;流式细胞术检测细胞周期及凋亡;细胞免疫荧光检测P2X7受体表达;Western blotting检测细胞P2X7受体蛋白水平;ELISA检测细胞上清液中白细胞介素1β(IL-1β)含量。结果:500μmol/L ATP和1 mmol/L ATP对细胞活力损伤程度较小,作用24 h后,细胞活力仍可达88.5%±5.5%和88.2%±8.4%。当ATP浓度达到或高于2 mmol/L时,细胞活力迅速降低,细胞发生皱缩,且随ATP作用时间延长,细胞活力逐渐降低,细胞密度逐渐减少,细胞皱缩程度加重,而KN-62干预后细胞活力较ATP组明显增多,细胞密度及形态明显好于ATP组。细胞周期及凋亡检测结果显示,ATP可使细胞周期阻滞于S期,细胞凋亡比例明显较对照组增多(P<0.01),KN-62干预可显著减轻ATP引起的细胞周期阻滞,细胞凋亡比例显著减少(P<0.01)。免疫荧光显示,ATP及KN-62干预对N9小胶质细胞上P2X7受体的表达分布没有影响。Western blotting显示,正常对照组、ATP组及KN-62干预组间P2X7受体蛋白水平没有明显差异(P>0.05)。ELISA结果显示,ATP及KN-62干预对IL-1β的释放没有作用。结论:高剂量ATP可诱发N9小胶质细胞损伤,其机制可能与P2X7受体介导的细胞周期阻滞和细胞凋亡有关,而与小胶质细胞的炎症反应无关。

孕酮对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的神经保护作用及其机制

目的:观察孕酮(PROG)对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤后的神经保护作用,并探讨其作用机制。方法:120只雄性SD大鼠随机分为:假手术组、大脑中动脉栓塞(MCAO)组和PROG+MCAO组(n=40)。线栓法建立大鼠右侧MCAO模型,PROG+MCAO组于建模型前30 min按8 mg/kg腹腔内注射PROG。大鼠脑缺血2 h再灌注0、24、48、72 h,通过Longa评分标准进行神经功能缺陷评分;实时荧光定量聚合酶链反应技术检测大鼠脑组织中双孔道结构域钾离子通道3(TASK3)mRNA的表达。结果:PROG(8 mg/kg)可显著降低大鼠脑缺血2 h再灌注24、48、72 h时的神经功能缺陷评分(P<0.05)。与假手术组相比,MCAO组再灌注各时间点脑组织TASK3 mRNA的表达均显著降低(P<0.05);与MCAO组相比,PROG+MCAO组再灌注各时间点大鼠脑组织中TASK3 mRNA的表达均显著增多(P<0.05)。结论:PROG可改善局灶性脑缺血/再灌注损伤后大鼠神经功能缺陷症状,其作用机制可能与上调脑组织中TASK3 mRNA的表达有关。

低氧预适应对脑缺血-再灌注大鼠神经元凋亡及P53蛋白表达的影响

目的:探讨低氧预适应对局部缺血-再灌注大鼠脑的保护作用及其分子机制。方法:24只大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注(I/R)组、低氧预适应(HP+I/R)组。用线穿法建立大鼠局灶脑缺血-再灌注模型,脑缺血前12h将HP+I/R组大鼠放在8%低氧舱中完成低氧预适应。分别用免疫组化、原位末端标记法检测P53的表达和神经元凋亡,并进行神经体征观察。结果:缺血3h再灌注24h后HP+I/R组神经行为缺陷计分明显低于I/R组(P<0.05);HP+I/R组凋亡细胞数明显少于I/R组(P<0.05);HP+I/R组P53蛋白阳性细胞数明显低于I/R组(P<0.05)。结论:低氧预适应可降低大鼠脑缺血再灌注后的神经功能缺陷和神经元凋亡。下调神经元中P53蛋白表达可能是低氧预适应脑保护作用的分子机制之一。

建设立体化神经生物学教材的探索

神经生物学的基本任务在于阐明学习与记忆、语言与思维、动机与行为的分子与细胞机制;预防和治疗神经疾患,抑制脑老化;最终目标是揭开脑活动奥秘,提高人类的聪明才智。这门新兴的课程在新乡医学院开设已有10a,建设适于本科生的神经生物学教材就成了作者孜孜不倦的追求。作者不但编写了主教材《基础神经生物学》,还有与之配套的素材库、课件、视频,建设课程网站、创建网络探究教学栏目。这些立体化的教学资源既是观念创新、内容创新和模式创新的成果;又表现出"面对本科生,医学特色鲜明,坚持少而精,基础特色突出,弘扬立体化,实用特色显著",为教和学神经生物学提供全方位解决方案,为普通医学院校开好神经生物学课程积累了可借鉴的经验。

雷帕霉素减轻氧糖剥夺对SH-SY5Y细胞的损伤

目的:观察雷帕霉素(Rapa)对氧糖剥夺(OGD)的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的影响,并探讨自噬在其中的作用。方法:SH-SY5Y细胞随机分为4组:正常对照组(常规培养,不进行OGD处理)、Rapa组、OGD组(无糖培养基、1%O_2的三气培养箱内孵育细胞12 h)和Rapa+OGD组。进行形态学观察;MTT法检测细胞活力;乳酸脱氢酶(LDH)漏出率判断细胞损伤的程度;caspase-3活性检测试剂盒检测酶活性;原位末端标记(TUNEL)法检测凋亡水平;Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2、自噬标志蛋白LC3B-Ⅱ及自噬调控蛋白beclin-1的表达。结果:与OGD组相比,Rapa+OGD组的细胞存活率明显升高(P<0.05),LDH漏出率及caspase-3酶活性明显降低(P<0.05)。TUNEL染色观察结果显示,与OGD组相比,Rapa+OGD组的细胞凋亡明显减少(P<0.05);Western blot实验结果显示Rapa+OGD组的Bcl-2、beclin-1及LC3B-Ⅱ蛋白的表达水平显著高于OGD组(P<0.05),而Bax蛋白水平明显低于OGD组(P<0.05)。结论:Rapa对OGD损伤的SH-SY5Y细胞具有保护作用,其机制可能与上调beclin-1蛋白、激活自噬有关。

黄皮酰胺对糖尿病大鼠海马HO-1和HO-2表达的影响

目的探讨黄皮酰胺(Clausenamide,Clau)对糖尿病大鼠海马血红素加氧酶1和2(HO-1和HO-2)表达的影响。方法♂Wistar大鼠腹腔注射链脲佐菌素(48mg·kg-1)建立糖尿病模型,给予不同药物治疗3mon后,分别以RT-PCR法和免疫组织化学法观察大鼠海马HO-1和HO-2 mR-NA和蛋白质的表达。结果①RT-PCR结果显示,糖尿病大鼠海马的HO-1和HO-2 mRNA表达水平明显增加(P<0.01);而Clau(50,25mg·kg-1)治疗组大鼠海马的HO-1和HO-2 mRNA的表达水平明显降低(P<0.01),表明Clau可明显抑制糖尿病大鼠海马HO-1和HO-2 mRNA的表达水平;②免疫组化结果表明,糖尿病大鼠海马HO-1和HO-2的蛋白质表达明显升高(P<0.01),表明HO-1和HO-2蛋白质的异常表达参与了糖尿病障碍的过程,而Clau通过抑制HO-1和HO-2的蛋白质表达对糖尿病大鼠起到保护作用的。结论黄皮酰胺可能通过抑制海马的HO-1和HO-2 mRNA及蛋白质表达起到糖尿病大鼠的海马保护作用的。

孕酮和孕酮受体拮抗剂米非司酮对K562白血病细胞系增殖和分化的影响

目的:观察孕酮和孕酮受体拮抗剂米非司酮(RU486)对K562白血病细胞增殖和分化的影响。方法:用10-5 mol/L孚酮分别联合10-5 mol/L、10-6 mol/L和10-7 mol/L RU486共同作用K562白血病细胞5 d,采用液体培养,XTT实验和集落培养实验观察K562细胞增殖能力;用流式细胞术检测K562细胞周期;通过Wright-Giemsa染色、联苯胺染色和表面分化抗原CD71表达观察孕酮和RU486对K562细胞分化的作用。结果:液体培养,XTT实验和集落形成抑制实验均显示单独使用孕酮可显著抑制K562细胞增殖,与对照组比较有显著差异(P<0.01)。孕酮联合RU486对K562细胞的增殖抑制作用减弱,与单独使用孕酮组比较有显著差异(P<0.01),呈剂量依赖关系。形态学观察孕酮处理组K562细胞体积变大,核浆比例减少,趋向成熟分化。联苯胺染色吸光度值升高,与对照组比较差异显著(P<0.01)。流式细胞术检测10-5 mol/L孕酮处理4 d后K562细胞膜上CD71表面标记表达阳性率为(85.72±2.31)%,显著高于对照组(P<0.01);但孕酮联合RU486对K562细胞的诱导分化作用减弱,与单独使用孕酮组比较有显著差异(P<0.01),并呈剂量依赖关系。细胞周期显示孕酮可将K562细胞周期阻滞在S期。但孕酮联合RU486组分布于S期的K562细胞百分比显著下降,与单独使用孕酮组比较差异显著(P<0.01),并呈剂量依赖关系。结论:孕酮可抑制K562细胞增殖并诱导其向红系分化,而RU486可阻断P对K562细胞的增殖抑制与诱导分化作用。

牛磺酸对脑创伤大鼠脑超微结构及P2X_7受体表达的影响

目的:探讨牛磺酸对脑创伤大鼠脑超微结构及P2X7受体蛋白表达的影响。方法:雄性SD大鼠40只,随机分成4组(n=10):假手术组、脑创伤组、脑创伤+低剂量牛磺酸组和脑创伤+高剂量牛磺酸组。采用Marmarou’s方法建立脑创伤模型,免疫组织化学法观察顶叶皮层、海马P2X7受体蛋白表达,透射电镜观察顶叶皮层超微结构。结果:与假手术组相比,脑创伤组顶叶皮层、海马P2X7阳性表达细胞显著增多(P<0.01);与脑创伤组相比,脑创伤+低、高剂量牛磺酸组顶叶皮层、海马P2X7阳性表达细胞显著减少(P<0.01或P<0.05),与脑创伤+低剂量牛磺酸组相比,脑创伤+高剂量牛磺酸组顶叶皮层、海马P2X7阳性表达细胞显著减少(P<0.05或P<0.01)。脑创伤+高剂量牛磺酸组顶叶皮层病理改变明显减轻。结论:牛磺酸可对脑创伤大鼠发挥脑保护作用,其机制可能与下调P2X7受体蛋白表达有关。

生理学双语教学的改革与实践

为探讨医学双语教学模式,进一步推进双语教学的改革,提高双语教学的质量,培养医学合格人才,作者针对生理学专业的特点,对生理学双语教学的教材选用、教学方法和教学模式及测试方法的进行系列改革。结果显示,90%以上的学生对双语教学成效满意。