山羊乳腺上皮细胞重编程过程中细胞上清液外泌体不同提取方法的比较

为了比较不同方法提取山羊乳腺上皮细胞重编程过程中细胞上清液外泌体的效果,试验采用超速离心法和试剂盒法提取细胞上清液中的外泌体,利用透射电子显微镜观察外泌体形态,以纳米流式仪检测外泌体浓度和粒径,Western-blot法检测外泌体表面标志物蛋白并通过Image J软件分析其相对表达量。结果表明:超速离心法和试剂盒法提取的外泌体均具有圆盘状的双层膜结构,且轮廓清晰,但是试剂盒法提取的外泌体中存在其他蛋白质颗粒。超速离心法提取获得的外泌体较为分散,外泌体粒径集中在55~60 nm之间;试剂盒法提取获得的外泌体大小更为均一,外泌体粒径集中在58 nm左右。两种方法提取的外泌体表面特异性标志物CD63和TSG101蛋白均呈阳性。试剂盒法提取的外泌体浓度极显著高于超速离心法(P<0.01),提取的外泌体表面特异性标志物CD63和TSG101蛋白相对表达量也极显著高于超速离心法(P<0.01)。说明超速离心法和试剂盒法均可以从山羊乳腺上皮细胞重编程过程的细胞上清液中提取出外泌体,区别在于超速离心法提取的外泌体纯度更高,试剂盒法提取的外泌体浓度更高。

通过Forskolin将小鼠成纤维细胞重编程为神经元试验

为了给临床神经退行性疾病治疗提供有应用价值的方法、突破试验不能转化为临床这一瓶颈,试验通过使用单一小分子化合物Forskolin调控小鼠成纤维细胞命运的方法,使其重编程为神经元,并进行了RT-qPCR、免疫荧光检测。结果表明:经诱导后的神经元表现出典型的神经元形态;RT-qPCR结果显示神经元相关基因表达上调,成纤维相关基因表达下调;免疫荧光结果显示,诱导神经元的神经元相关蛋白TUJ1、MAP2的表达呈阳性。说明使用Forskolin替代转录因子在体外可以实现将小鼠成纤维细胞直接重编程为神经元,应用此成果可在临床治疗上避免外来遗传物介入导致的致瘤致病风险。