DNA疫苗在小鼠体内的组织分布及安全性研究

目的 通过检测绿色荧光蛋白基因在小鼠体内的表达 ,研究质粒 pEGFP -N3在组织分布及应用安全性。 方法 带有增强绿色荧光蛋白 (EnhanceGreenFluorescentProtein ,EGFP)基因的质粒pEGFP -N3的转化、扩增、大量提取及纯化 ,左大腿肌注BALB/c小鼠 ,注射后不同时间剖杀 ,取注射部位肌肉、心、脑、肝、脾、肾作冰冻切片 ,荧光显微镜下镜检。结果 质粒pEGFP -N3在小鼠注射部位肌肉及心内膜细胞内表达EGFP ,荧光 4 8h内最强 ,1w明显减弱 ,2w消失。其它组织及对照组无黄绿色荧光。结论 外源性EGFP基因能在小鼠细胞内表达 ,它可作为基因表达的检测标签 ,而质粒 pEGFP -N3不与机体染色体重组 ,应用安全 ,可作为DNA疫苗的理想载体。

血吸虫病治疗前后IgG及其亚类的变化和疗效考核的研究

目的：欲寻找一种用于血吸虫病疗效考核的IgG亚类短期抗体。方法：用各种ELISA方法检测了264份治疗前和治疗后不同时间慢性血吸虫病人及50份正常人血清中的可溶性虫卵抗原（SEA）和成虫抗原（AWA）特异性IgG、IgG1和IgG4，以及日本血吸虫31／32kD肠相关抗原（GAA）。结果：治疗前IgG阳性率（SEA97．6％，AWA100％）与IgG1（SEA94％，AWA95．2％）无差别，高于IgG4（SEA62．7％，AWA73．4％）及GAA（62．7％）阳性率；治疗后IgG4消退较快，治疗后12月时阴转率达97．6％。正常血清检测上述四种指标假阳性率均在3％左右，无差别。结论：IgG1的诊断价值与IgG相仿，二者与粪检符合率均较高；而IgG4可能为一种短期抗体，可望作为疗效考核的评价指标。

恶性疟原虫己糖转运体编码基因的体外扩增、克隆及表达

[目的 ]体外扩增、克隆和表达恶性疟原虫海南分离株的己糖转运体 (PfHT1)基因 ,为研究其保护性免疫创造条件。 [方法 ]恶性疟原虫FCC1/HN株的体外培养 ;碱裂解法提取基因组DNA ;PfHT1基因的PCR扩增、克隆 ;脂质体介导法转染HEPG2细胞株及真核表达。 [结果 ]从恶性疟原虫海南分离株基因组DNA中扩增出特异性的编码PfHT1的基因序列 ,片段大小为 15 16bp ;成功构建 pN3 HT1真核表达重组质粒并在肝癌细胞HEPG2中稳定表达。 [结论 ]体外成功扩增、克隆恶性疟原虫PfHT1编码序列 ;重组质粒转染成功并获稳定表达融合蛋白的 pN3

组蛋白与基因调控研究进展

组蛋白是染色体的结构蛋白,它与DNA组成的核小体是染色体的基本结构单元。组蛋白能保护DNA免被核酸酶消化。除此之外组蛋白还有多种功能,它在基因调控、肿瘤细胞增殖、调亡、DNA修复以及衰老中发挥重要作用,它同时还是先天免疫的有效分子。本综述重点讨论了组蛋白的结构以及它们在基因调控中所发挥的调节作用。

禽流感病毒实验检测研究进展

禽流感病毒(avian influenza viruses,AIV)给人类健康已带来严重威胁,而实验室快速、准确的诊断技术对禽流感的预防、控制及应急反应决策起着极其关键的作用,这使其成为了研究热点并取得了巨大进步。就禽流感的实验检测技术研究进展从病毒分离、免疫学诊断及分子诊断3个方面加以综述。

脑囊虫病患者血清NO水平及机体免疫状态的研究

为研究脑囊虫病患者血清中的一氧化氮（ＮＯ）水平与机体免疫状况的关系，用比色法检测脑囊虫病患者血清的ＮＯ水平，同时用直接ＥＬＩＳＡ检测脑囊虫病和恶性肿瘤患者血清弓形虫抗体，以健康人血清作对照。结果显示，脑囊虫病患者血清ＮＯ水平为（２７．７７±３．７７）μｍｏｌ／Ｌ，明显低于正常人组（５０．０４±６．２３）μｍｏｌ／Ｌ。脑囊虫病患者弓形虫抗体阳性率（２３．３％）明显高于正常人（１２％），与恶性肿瘤病人弓形虫抗体阳性率（２７．１％）无显著性差异。表明脑囊虫病患者有继发性免疫缺陷。

金鱼H 1组蛋白基因及其N端片段的克隆、表达及抗菌活性

用RT-PCR方法从金鱼体内成功分离得到编码H 1组蛋白的基因,基因登录号AY 184811。该基因与来源于大西洋鲑鱼的抗菌蛋白-H 1组蛋白有极高的同源性(78%)。将全长基因及其N端(2-38氨基酸)序列成功克隆于毕赤酵母分泌表达载体pP IC 9K并表达;表达产物初步检测有抗菌活性。结果表明,金鱼H 1组蛋白为一种新发现的抗菌蛋白,其N端来源肽(AEVAPAA SAPPAKAPKKK SAAKA KKAGPAVGDL IVKA)为抗微生物肽。金鱼H 1组蛋白及其来源肽在金鱼先天免疫防御中发挥作用。

抗菌肽的原核表达及应用前景

抗菌肽是具有抗菌活性的一类短肽,广泛存在于生物界,是先天免疫的重要防御成分,其杀细胞机制为在靶细胞膜上穿孔,靶细胞因渗透压改变而死亡。抗菌肽具有广谱抗菌活性,并有抗病毒、抗真菌、抗寄生虫及抗肿瘤等生物活性,有良好的应用前景,使其走向临床的最大挑战是如何用基因工程技术低成本大量生产抗菌肽产品。该文综述了抗菌肽的原核表达研究进展及其应用前景。

阿米巴肝脓肿患者血清细胞因子水平与免疫防卫能力的研究

目的了解阿米巴肝脓肿患者机体的免疫防卫能力。方法 EL ISA、比色法及流式细胞仪等检测了 40例阿米巴肝脓肿患者血清细胞因子 TNF- α、IL- 6、IL- 8、s IL- 2 R、弓形虫感染率、NO、血液 CD4/ CD8T细胞、红细胞 C3b受体花环率(RBC- C3b RR)及免疫复合物花环率 (RBC- ICR)。结果 TNFα、IL- 6、IL- 8、s IL- 2 R、NO、RBC- ICR显著高于正常对照组 ;RBC-C3b RR低于正常对照组 ;CD4增高 ,CD8降低 ,CD4/ CD8比值下降 ;弓形虫感染率与正常组无差异。结论阿米巴肝脓肿患者非特异性细胞免疫受抑制、特异性细胞免疫增强 。

检测特异性抗体用于日本血吸虫病疗效考核的研究

为探讨特异性ＩｇＧ及其亚类对日本血吸虫病的疗效考核价值，用直接ＥＬＩＳＡ及间接ＥＬＩＳＡ 方法检测了２６４ 份治疗前和治疗后不同时间慢性血吸虫病病人以及５０ 份正常人血清中虫卵抗原（ＳＥＡ）和成虫抗原（ＡＷＡ）特异性ＩｇＧ、ＩｇＧ１ 和ＩｇＧ４。结果ＩｇＧＳＥＡ 及ＩｇＧ４ＳＥＡ在治疗后３ 个月出现有显著意义的下降且于治疗后１２ 个月降至正常；ＡＷＡ特异性抗体均于治疗后６ 个月才下降，其中仅ＩｇＧ４ＡＷＡ 于治疗后１２ 个月降至正常；ＩｇＧ４ＳＥＡ／ＡＷＡ 在治疗后１２ 个月时的阴转率最高（９７．７ ％） ，ＩｇＧＳＥＡ 次之（７５％ ）。表明治疗后ＳＥＡ 特异性ＩｇＧ 及ＩｇＧ４ 下降较ＡＷＡ特异性抗体快；ＩｇＧ４ 为一短期抗体，尤其ＩｇＧ４ＳＥＡ，可作为判断日本血吸虫病是否治愈的指标。

囊虫病免疫防卫能力与细胞因子水平的研究

了解囊虫病患者机体的免疫防卫能力。用双抗夹心ELISA、直接ELISA、比色法检测了 30例囊虫病患者血清细胞因子TNFα、IL 6、IL 8、sIL 2R ,弓形虫感染率 ,一氧化氮水平 ,结果患者血清TNFα、IL 6、IL 8、sIL 2R ,弓形虫感染率均显著高于正常对照组 ;一氧化氮水平明显低于正常对照组 ,结果显示 ,囊虫病患者机体免疫功能受抑制 ,免疫防卫能力低下。

脑囊虫病及阿米巴肝脓肿病人合并弓形虫感染的研究

脑囊虫病及阿米巴肝脓肿病人合并弓形虫感染的研究广东医学院寄生虫学教研室（湛江市５２４０２３）魏泉德朱家勇赖秀球蠕虫或原虫感染可降低人对异种抗原的免疫反应，导致继发性免疫缺陷〔１〕。而弓形虫是一种机会致病性球虫，其感染率的高低及感染后是否发病与人体的免...

改革教学方法 培养应用型人才

《寄生虫检验学》是医学检验专业的主干课，在本门课的教学实践中，我们面向社会，结合本省寄生虫病及医院寄生虫检查的实际状况，优化理论及实验课内容，通过理论教学和实验操作紧密结合的教学手段．对90级、91级、92级、93级检验本科的《寄生虫检验学》课程的教学进行改革．加强实用技术的教育．注重培养学生获取知识及应用知识的能力，

珠海市2007-2008年乙型流感病毒基因特性分析

目的了解珠海市近两年乙型流感病毒的基因变异情况。方法采集珠海市流感样病例样本进行流感病毒的分离和鉴定,并对分离到的乙型流感病毒进行核酸的提取,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增病毒基因后进行病毒血凝素HA1基因核苷酸序列测定,用Mega、DNA Star、GeneDoc软件对测序结果进行分析处理,并与WHO推荐的疫苗株基因序列进行比对。结果 2007-2008年分离的乙型流感毒株分属于Yamagata系和Victoria系两个谱系,谱系内毒株间距离很近。Yamagata系毒株与B/Brisbane/3/2007的核苷酸同源性极高,在99.4%~99.7%之间;Victoria系乙型流感病毒株与B/Malasia/2506/2004的核苷酸同源性亦很高,在98.6%~99.1%之间。与疫苗株和其它流行株相比,本次分离的两个谱系毒株均未发现核苷酸的丢失和插入,但均增加一个潜在的糖基化位点。结论珠海市人群交替流行着Yamagata系和Victoria系两个抗原性不同的进化系的乙型流感病毒,病毒的基因发生了变异。2007-2008两年WHO推荐的乙型流感疫苗株与我地区当年流行株为不同谱系毒株,预防保护效果不好。

羊胎素对体外成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响

目的 观察羊胎素在体外对新生大鼠颅骨成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响。方法将提取之羊胎素稀释加入体外培养的SD新生大鼠颅骨成骨细胞体系中,终浓度分别为0.625％、1.25％、2.5％、5％和10％;加药后24、48和96 h用MTT法检测细胞的增殖并绘制生长曲线:培养5 d时用PNPP法测定细胞碱性磷酸酶(ALP)活性;培养31 d时用茜素红染色2.5％羊胎素组形成之矿化骨结节,用图像分析仪计算骨结节的面积。结果 所有含羊胎素浓度组,其MTT法测得的A值都显著高于空白对照组(P<0.01),生长曲线表现为含羊胎素组的细胞增殖加快,以2.5％浓度组最为显著;ALP结果显示,羊胎素各浓度组的碱性磷酸酶活性都显著高于空白对照组(P<0.01);茜素红染色后显示,2.5％羊胎素组所形成的骨结节面积显著高于空白对照组(P<0.01)。结论羊胎素对体外培养的SD新生大鼠颅骨成骨细胞有显著的促进增殖、分化和矿化的作用。

LAMP技术用于霍乱弧菌检测的研究

霍乱是由霍乱弧菌感染所引起的,属于甲类传染病.因此,建立一种快速、灵敏、特异的检测方法,对霍乱的预防和控制工作有十分重要的现实意义.通过霍乱弧菌外膜蛋白的ompW基因设计特异引物,建立霍乱弧菌的LAMP检测方法,同时对细菌进行扩增以检测该方法的灵敏度和特异性,并与普通PCR进行比较.实验的全部反应可在2 h内完成,且反应结果可通过肉眼观测直接判定;实验中霍乱弧菌的LAMP检测方法灵敏度是普通PCR的100倍,最低检出下限为10-5;检测霍乱弧菌均为阳性,其它13株非霍乱菌则全部阴性,特异度为100%.结果表明:该方法能快速、灵敏、特异性地检测霍乱弧菌,为快速检测病原微生物起到了很好的借鉴作用.

环介导等温扩增技术快速检测副溶血性弧菌

目的建立一种检测副溶血性弧菌(Vp)快速且特异的环介导等温扩增(LAMP)检测方法。方法针对副溶血性弧菌不耐热溶血素(tlh)基因特异性序列的6个位点设计4条LAMP引物,65℃保温约60 min,完成对副溶血性弧菌的扩增,扩增产物经肉眼、SYBRGreen I染色、电泳和酶切鉴定。利用LAMP和普通PCR方法同时检测1株副溶血性弧菌和12株非副溶血性弧菌来验证LAMP方法的特异性;将副溶血性弧菌菌液作一系列10倍稀释后用LAMP和PCR方法进行检测,比较两者敏感性。结果 1株副溶血性弧菌出现LAMP扩增反应:通过肉眼、SYBR Green I染色和电泳均能观察到LAMP扩增产物的出现,酶切证实了LAMP产物的特异性;12株非副溶血性弧菌未出现LAMP扩增。LAMP检测tlh基因的特异性和敏感性与普通PCR相同,LAMP检测tlh基因的检测下限为15 cfu/mL。结论建立了一种快速、敏感、特异的副溶血性弧菌检测方法,适合日常监测及快速检测的需要。