人皮肤角质形成细胞的胰蛋白酶消化分离及无血清培养

目的 探索用DMEM SF培养基对经胰蛋白酶两步消化分离的人角质形成细胞进行培养的方法和条件。方法 取临床整形外科手术后剩余皮肤 ,用 0 2 5 %的胰蛋白酶经冷和温两步消化分离后 ,用DMEM SF完全培养基于 5 %CO2 、37℃培养 ,绘制生长曲线 ,并用单克隆抗角蛋白抗体和鼠 IgG免疫组化试剂盒进行细胞鉴定。结果 用胰蛋白酶两步消化分离的角质形成细胞在DMEM SF培养基中可正常生长 2周以上 ,生长曲线显示细胞在第 4天进入对数生长期 ,第 10天进入停滞期。鉴定显示角质形成细胞占 95 %以上。来源于 3个不同个体的皮肤角质形成细胞经等量混合后培养与单独培养相比 ,细胞生长无统计学差异。结论 用胰蛋白酶对人皮肤进行冷和温两步消化分离的角质形成细胞 ,在DMEM SF完全培养基中生长状况良好 ,其他细胞污染少 ,实验成本低廉 ,操作简单。

褪黑素保护细菌脂多糖引起的小鼠宫内胎儿死亡和生长发育迟缓

目的研究褪黑素（MT）对细菌脂多糖（LPS）引起宫内胎儿死亡（IUFD）和生长发育迟缓（IUGR）的保护作用。方法实验1：LPS组小鼠于受孕第15-17天每天经腹腔注射LPS（75μg／kg），LPS＋MT组在LPS处理前和（或）处理后经腹腔注射MT，生理盐水和单纯MT处理作为对照。所有孕鼠于受孕第18天处死，统计活胎、死胎和吸收胎数，称量活胎体重，测量胎鼠身长和尾长，并对胎鼠骨骼发育情况进行评价。实验2：LPS组小鼠于受孕第16天经腹腔一次性注射75μg／kg LPS，LPS＋MT组孕鼠于LPS处理前和（或）处理后经腹腔注射MT，生理盐水和单纯MT处理作为对照。LPS处理后6h处死孕鼠，取母肝和胎盘，检测丙二醛和谷胱甘肽水平。结果LPS＋MT处理组宫内胎儿死亡数显著低于单纯LPS处理组，并呈明显剂量-效应关系；MT预＋后和后处理均显著减轻LPS引起生长发育迟缓，并逆转LPS引起的枕骨骨化不全。MT预＋后处理明显减轻LPS引起的母肝和胎盘脂质过氧化，但对LPS所致GSH含量降低无明显影响。结论MT通过其抗氧化功能保护LPS引起的IUFD和IUGR。

灵芝孢子粉拮抗环磷酰胺毒副反应的实验研究

目的 研究灵芝孢子粉对抗癌药环磷酰胺毒副反应的拮抗作用。方法 小鼠经皮下注射 40mg/kg的环磷酰胺的同时经口灌胃给予 2 0、80、32 0mg/kg的灵芝孢子粉混悬液 ,给药结束后检测小鼠游泳耐力、小鼠碳粒廓清功能、小鼠血红蛋白和SGPT。结果 灵芝孢子粉明显拮抗环磷酰胺引起的小鼠耐力下降 ,血红蛋白降低 ,巨嗜细胞吞噬能力减弱和SGPT上升的作用。结论 灵芝孢子粉对抗癌药环磷酰胺的毒副反应有一定拮抗作用。

生物降解材料甲壳胺安全性评价与实验研究

对由虾壳材料中提纯合成的甲壳胺进行一系列生物学特性的研究，结果证明甲壳胺材料具备无毒性、无刺激性、无热源反应、不溶血、无过敏反应，是一种生物相容性良好、安全可靠的体内植入性材料。

灵芝孢子粉镇痛和抗突变作用的实验研究

为研究灵芝孢子粉的镇痛和抗突变作用。连续 7天每天经口灌胃分别给予小鼠 2 0、32 0mg/kg的灵芝孢子粉 ,用热板法、水浴法和化学刺激法检测灵芝孢子粉对小鼠的镇痛作用。连续 10天每天经口灌胃给予小鼠 2 0、80、32 0mg/kg的灵芝孢子粉 ,用小鼠骨髓细胞染色体畸变试验检测灵芝孢子粉对环磷酰胺 (CP)诱发的小鼠骨髓细胞染色体畸变的抑制作用。结果可见灵芝孢子粉引起小鼠温痛反应时间延长 ,扭体次数减少。灵芝孢子粉对环磷酰胺 (CP)诱发的小鼠骨髓染色体畸变有抑制作用 ,并有明显的剂量—效应关系。

拟原白头翁素A毒性试验研究

目的为了对拟原白头翁素Ａ进行初步毒理学安全性评价。方法采用大鼠急性经口和经皮毒性试验，大鼠皮肤和大白兔眼粘膜刺激试验，Ａｍｅｓ试验，小鼠骨髓微核试验，小鼠睾丸初级精母细胞染色体畸变试验。结果大鼠急性经口ＬＤ５０４．６７３９（ＩＣ４．０６１４～５．３７８７）ｇ·ｋｇ－１，经皮ＬＤ５０＞２．０ｇ·ｋｇ－１，根据化合物毒性分级为低毒；对大鼠皮肤无刺激作用，对大白兔眼粘膜有中等刺激；Ａｍｅｓ试验、小鼠骨髓微核试验和小鼠睾丸初级精母细胞染色体畸变试验阴性。结论拟原白头翁素Ａ为低毒、致突变试验阴性的化合物。

铬致大鼠肾损害与脂质过氧化的实验研究

目的 探讨铬对肾脏的损害作用及其与脂质过氧化的关系。方法 每天以 40mg·kg-1重铬酸钾水溶液给大鼠灌胃 5周 ,在染毒 1、3、5周末检测肾功能和肾皮质脂质过氧化指标。结果 染毒 5周末 ,大鼠血清尿素氮 (BUN)升高 ,而肾皮质超氧化物歧化酶 (SOD)和谷光甘肽过氧化酶(GSH Px)降低 ,但未发现肾损害指标与脂质过氧化指标间有相关关系。结论 铬亚慢性经口染毒可引起肾损害和肾组织SOD及GSH Px活力降低 ,SOD及GSH Px活力降低是铬肾毒性的表现之一 ,而并非铬致肾损害的直接原因。

混苯对大鼠肝肾功能影响的研究

研究了混苯亚急性染毒对大鼠肝肾功能的影响及其与脂质过氧化的关系。结果表明 ,混苯无论主要含苯还是二甲苯均可导致大鼠肝细胞合成蛋白质能力下降 ,主要含苯的混苯还可增加肝实质细胞的通透性 ,使血清AST、ALT及LDH等酶活性升高 ;混苯可升高大鼠体内脂质过氧化水平 ,表现为血清MDA含量增加 ,同时降低血清抗氧化酶SOD和GSH Px活力。相关分析表明 ,TPr与MDA呈负相关 ,与SOD呈正相关 ;alb与SOD和GSH -Px均呈正相关 ;TBA与SOD呈负相关。提示 ,脂质过氧化反应水平的升高和血清抗氧化酶活力的降低与混苯肝毒作用有关。同时 ,以二甲苯为主的混苯还可导致实验大鼠的肾功能障碍 ,表现为血清BUN含量升高。

木瓜苷的致畸毒性研究

背景与目的:评价木瓜苷对ICR小鼠的胚胎毒性和致畸毒性,为其临床应用提供毒理学依据。材料与方法:ICR孕鼠随机分为5组:木瓜苷3个剂量组(83.1、332.5、1330.0mg/kg),阴性对照组[0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)]及阳性对照组[20mg/kg环磷酰胺(CP)]。阳性对照组于孕第10d肌肉一次注射CP0.01ml/g,其余各组均为孕第6～15d(胚胎器官形成期)灌胃给予0.02ml/g木瓜苷或CMC-Na,每组大于15只。在妊娠的第18d,颈椎脱臼处死,计数黄体数、胚胎着床数、活胎数、死胎数和吸收胎数;观察胎仔外观、性别并称量其体重后,将每窝1/2的活胎仔乙醇固定、2%氢氧化钾软化、茜素红染色、甘油透明后检查骨骼发育情况。另1/2活胎仔经Bouin’s液固定后,检查内脏发育情况。结果:在实验剂量范围内,木瓜苷各剂量组孕鼠的生殖能力、胚胎形成和胎仔外观、骨骼及内脏生长发育与阴性对照组相比差异均无统计学意义(P均>0.05),但木瓜苷1330.0mg/kg剂量组孕鼠总增重[(4.97±1.53)g]与阴性对照组[(6.59±1.37)g]相比明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:本实验条件下木瓜苷对小鼠无胚胎毒性和致畸毒性。

香烟烟蒂水浸泡液的致突变作用

目的 :探讨香烟烟蒂水浸泡液对雄性小鼠骨髓细胞和睾丸初级精母细胞的遗传毒作用。方法 :用香烟烟蒂生理盐水浸泡液为实验材料进行小鼠骨髓嗜多染红细胞 (PCE)微核试验和睾丸初级精母细胞染色体畸变试验。结果 :各剂量组小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率分别为 3.0‰、5 .6‰、11.3‰ ,明显高于阴性对照组 (2 .0‰ ) ,并有明显的剂量 效应关系。各剂量组小鼠睾丸初级精母细胞性染色体单价体 (4 .6 %、5 .0 %、6 .6 %)和常染色体单价体 (4 .4%、8.0 %、10 .4%)均显著高于阴性对照组(2 .4%、2 .6 %) ,并有明显的剂量 效应关系 ,而染色体结构畸变率与对照组差异无显著性。 结论 :香烟烟蒂水浸泡液引起雄性小鼠骨髓PCE微核率增高 ,并诱发睾丸初级精母细胞染色体数目畸变。

拟原白头翁素A的生殖与胚胎毒性作用研究

目的 研究拟原白头翁素A的生殖毒性作用。方法 小鼠睾丸初级精母细胞染色体畸变试验、精子畸形试验和致畸试验。结果 小鼠睾丸初级精母细胞染色体畸变试验、精子畸形实验结果为阴性。致畸试验高剂量组孕鼠体重增长减缓 (与阴性及溶剂对照组比较 ,P <0 0 5、P <0 0 1)。各剂量组胎仔体重、身长、尾长与阴性和溶剂对照组比较均有显著性差异 (P <0 0 5、P <0 0 1)。结论 拟原白头翁素A无诱发小鼠睾丸初级精母细胞染色体畸变和精子畸形的作用 ;高剂量对孕鼠有母体毒性 ,各剂量组均可引起胚胎发育迟缓 ,但无畸形发现。

细菌脂多糖对小鼠生长发育和骨骼发育的影响

目的:研究细菌脂多糖(LPS)对小鼠宫内胎儿死亡(IUFD)、生长发育迟缓(IUGR)和骨骼发育迟缓的影响。方法:LPS低中高组小鼠于妊娠d15-17分别腹腔注射不同剂量LPS(25μg/kg、50μg/kg、75μg/kg),LPS+2-苯叔丁基硝酮(PBN,活性氧ROS拮抗剂)组在LPS(75μg/kg)处理前30min和后3h经腹腔各给予100mg/kg的PBN,对照组给予等容量生理盐水。孕鼠于妊娠d18处死。另给药1d时取LPS高剂量组LPS+PBN组和对照组于LPS处理后6h处死孕鼠。结果:①小鼠妊娠d15-17给予LPS后,中高剂量组平均每窝死胎数明显高于对照组,活胎体重、身长和尾长下降,并呈明显的剂量-效应关系;LPS高剂量导致IUGR和骨骼发育迟缓;PBN处理明显抑制LPS对胎儿的作用。②LPS使母肝、胎肝和胎盘组织脂质过氧化,GSH含量显著降低。PBN显著抑制LPS的这些作用。结论:母鼠妊娠晚期接触LPS引起IUFD、IUGR和骨骼发育迟缓,ROS至少部分参与了LPS的引起IUFD、IUGR和骨骼发育迟缓。

7种中草药的抗诱变性试验

本文应用Ａｍｅｓ试验ＴＡ９８和ＴＡ１００菌株及小鼠骨髓微核试验对牡丹皮，牡丹草，潞党参，宣木瓜，菊花，石斛和新鲜石斛７种草药的水溶性提取液进行抗诱变性筛选，发现牡丹皮，潞党参和菊花在２个试验系统均有抗诱变活性提示这３种中药能抗基因突变又能抗染色体畸变；宣木瓜在Ａｍｅｓ试验中对２－ＡＦ诱导ＴＡ９８和ＴＡ１００有强抗诱变性；除宣木瓜外，余６种中药在微核试验中均具有显著抑制作用。

三种常用染发剂对小鼠骨髓细胞微核的影响

目的 以小鼠骨髓PCE微核率为指标 ,观察三种品牌的染发剂是否具有诱变性。方法 昆明种小鼠连续 5d经皮给予受试物 ,剂量分别为 5 0 0 0、2 5 0 0和 12 5 0mg/kg ,另设阴性和阳性对照组 ,观察小鼠骨髓嗜多染红胞微核率。结果 三种染发剂嗜多染红细胞微核率与阴性对照组比较均未见明显增高 (P >0 0 5 )。

甲壳素医用敷料的毒理学研究

为确保甲壳素医用敷料在临床上的安全使用，用甲壳素医用敷料生理盐水浸提液分别对大鼠经尾静脉和小鼠经口的急性毒性试验、家免原发性皮肤刺激试验、溶血试验及豚鼠皮肤致敏试验。发现甲壳素医用敷料生理盐水浸提液经大鼠尾静脉注射，小鼠经口灌胃试验剂量均为５ｍｌ·ｋｇ－１（相当于８００ｃｍ２），在观测期内未见明显中毒症状及死亡；家免原发性皮肤刺激试验显示对皮肤无明显刺激作用；溶血试验提示平均溶血率为１．４％，对兔血细胞无溶血作用；对豚鼠皮肤无致敏作用。认为甲壳素医用敷料为一种安全的临床手术敷料替代品。

ROS在LPS下调鼠胎盘pxr等基因表达中的作用

目的研究活性氧（ROS）在细菌脂多糖（LPS）下调小鼠胎盘孕烷X受体（pxr）及其靶基因细胞色素P-450 3a11（cyp3a11）和多药耐药基因1a（mdr1a）表达中的作用。方法小鼠妊娠第17天分别注射不同剂量LPS（0．1-0．5mg／kg，ip）；LPS＋PBN组在注射LPS（0．2mg／kg，ip）前30min和后3h给予2-苯叔丁基硝酮（PBN）；LPS＋NAC组在注射LPS（0．2mg／kg，ip）前30min和后3h给予N-乙酰半胱氨酸（NAC）；对照组给予等容量生理盐水或PBN／NAC。孕鼠分别于LPS处理后6和12h处死。结果LPS显著下词小鼠胎盘pxr，cyp3a11和mdr1a mRNA表达，进一步研究发现，妊娠晚期给予LPS后，胎盘组织MDA水平明显升高且GSH含量显著降低。PBN和NAC处理显著抑制LPS对胎盘pxr，cyp3a11和mdr1a mRNA表达的下调作用，且显著对抗LPS引起的氧化应激。结论LPS下调小鼠胎盘pxr、cyp3a11和mdr1a mRNA表达；ROS至少部分参与了LPS对小鼠胎盘pxr、cyp3a11和mdr1a mRNA表达的下调作用。

甲基对硫磷的免疫毒作用研究

对甲基对硫磷对小鼠的免疫毒作用进行了研究。结果显示，３０ｍｇ／ｋｇ剂量的甲基对硫磷引起小鼠脾脏指数、胸腺指数明显下降，３０ｍｇ／ｋｇ和０６ｍｇ／ｋｇ剂量的甲基对硫磷对小鼠巨噬细胞吞噬功能、外周血Ｔ淋巴细胞ＡＮＡＥ和ＳＲＢＣ免疫产生的溶血素有显著的抑制作用，并有明显的剂量效应关系。提示：甲基对硫磷对机体免疫器官。

地洛他定对ICR小鼠的致畸作用研究

目的 :观察地洛他定对孕鼠致畸敏感期的毒性 ,包括对母体和对胚胎发育的影响。方法 :ICR小鼠于妊娠第 6～ 15d灌胃给予地洛他定 ,剂量为 5 0 .0mg/kg·bw、2 5 .0mg/kg·bw和 12 .5mg/kg·bw ,同时设立阴性和阳性对照组 ,检查孕鼠体重、一般行为特征和胎鼠发育各项指标。结果 :地洛他定高、中剂量组孕鼠出现了母体毒性。高剂量组死胎数 (率 )、吸收胎数 (率 )显著高于阴性对照 ,且有 2窝胎鼠共出现 2例变形肋 (2 / 4 4) ;低剂量组胎鼠有 1例左后肢短小 (1/ 15 2 ) ,1例卷尾 (1/ 15 2 ) ,但与阴性对照比较皆无显著性差异。结论 :本实验条件下 ,地洛他定在较高剂量时有母体毒性和胚胎毒性。

重组葡激酶对ICR小鼠的致畸作用研究

目的 :用ICR小鼠研究重组葡激酶 (r-SAK)的致畸作用。方法 :ICR小鼠于妊娠第 6- 1 5d静脉注射r -SAK ,剂量为1 0 0mg/kg .bw、31 .6mg/kg .bw、1 0mg/kg .bw ,同时设立阴性对照组和阳性对照组 ,于孕第 1 8d处死动物 ,进行各项检查。 结果 :各剂量组孕鼠增重、活胎率、胎鼠体重、身长及尾长与阴性对照组比较 ,差异皆无显著性 (P >0 .0 5) ;各剂量组胎鼠外观、内脏和骨骼均无畸形发现。结论 :在本实验条件下 ,r-SAK对ICR小鼠无致畸作用。

环磷酰胺对孕鼠及胎鼠微核作用的影响

目的了解环磷酰胺对孕鼠及胎鼠微核发生率的影响。方法对受孕１８天孕鼠分别按 ４０ ｍｇ· ｋｇ－１、２０ ｍｇ· ｋｇ－１、１０ ｍｇ· ｋｇ－１经腹腔注射，一次给药，２２ ｈ后检测孕鼠胸骨骨髓和胎肝 中多染红细胞微核出现率。结果各剂量组孕鼠胎和肝微核发生率均分别明显高于对照组，相同 剂量胎肝微核发生率较孕鼠骨髓微核率高，差异有显著性。结论胎肝对环磷酰胺引起的微核发 生率较孕鼠更敏感。