腺相关病毒介导的shRNA敲低大鼠双侧臂旁外侧核EP3受体对发热反应的影响

目的研究腺相关病毒(AAV)介导的短发夹RNA(shRNA)敲低臂旁外侧核(LPB)EP3受体表达对LPB微量注射前列腺素E_(2)(PGE_(2))和腹腔注射脂多糖(LPS)引起的发热反应的影响。方法构建干扰EP3受体表达的AAV载体,采用立体定位方法分别向shRNA-control组和shRNA-EP3组大鼠LPB注射AAV2-CMV-EGFP和AAV2-shRNA-Ptger3(EP3)-EGFP病毒。4周后,利用荧光显微镜观察AAV病毒的转染效率;采用实时荧光定量PCR检测LPB EP3受体mRNA表达的变化,以验证敲低效果;采用无线遥测和能量代谢测定的方法检测LPB微量注射生理盐水、PGE_(2)或腹腔注射LPS对shRNA-control组和shRNA-EP3组大鼠的体温(T core)和能量代谢(EE)的影响。结果shRNA-EP3组及shRNA-control组大鼠AAV病毒转染主要集中于LPB脑区;与shRNA-control组相比,AAV病毒注射敲低了shRNA-EP3组大鼠LPB的EP3受体mRNA的表达(P<0.05);shRNA-control组和shRNA-EP3组大鼠的基础体温无明显差异,LPB微量注射生理盐水引起T core和EE均出现短暂轻微的升高,但2组间无明显差异;与shRNA-control组相比,PGE_(2)升高shRNA-EP3组大鼠T core作用明显减弱(P<0.05);shRNA-EP3组大鼠腹腔注射LPS后仍能引起发热反应,但与shRNA-control组相比,发热反应减弱,腹腔注射LPS后5.5 h的体温升高幅度明显降低(P<0.01)。结论敲低LPB的EP3受体表达减弱了LPB微量注射PGE_(2)和腹腔注射LPS引起的发热反应,提示,LPB的EP3受体介导LPB PGE_(2)的致热作用,部分参与了LPS性发热。