猪流感病毒通用型微滴式数字RT-PCR绝对定量检测方法的建立

为建立灵敏且可绝对定量检测猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)的微滴式数字RT-PCR(ddRT-PCR)方法,以SIV M基因的保守序列为靶基因,设计并合成一套特异性引物和TaqMan探针,建立了可对主要流行的H1N1、H1N2和H3N2亚型SIV绝对定量检测的通用型ddRT-PCR方法。随后,对该方法的敏感性、特异性和重复性进行评价,并利用临床猪鼻咽拭子样品进行检测验证。结果显示:建立的ddRT-PCR方法检测限达到1.6 copies/µL,灵敏度极高;能特异性检出H1N1、H1N2和H3N2亚型SIV,与猪瘟病毒等其他常见猪病病原均无交叉反应;重复检测结果的批内和批间变异系数(CV)分别为0.75%、3.17%,重复性良好;经临床样品检测验证,建立的ddRT-PCR和荧光RT-qPCR方法分别检出阳性样品72、66份,提示前者在检测低病毒拷贝样品时较荧光RT-qPCR更优。结果表明,本研究建立的SIV通用型ddRT-PCR方法灵敏度高,特异性和重复性均良好,且在检测低病毒含量临床样本时更具优势,可作为一种对SIV感染进行早期诊断和绝对定量检测的有效方法。

用复合乳酸杆菌从鸡蛋壳粉中提取乳酸钙的条件优化

为加大对废弃蛋壳的资源利用率,提高从蛋壳中提取乳酸钙的产能,将定量的蛋壳粉加入保加利亚乳酸杆菌和醋酸杆菌的复合乳酸菌发酵液中,采用甲基百里香酚蓝微板吸光法测定发酵液中两种复合乳酸菌在不同浓度、不同添加比例、不同发酵酸碱度和不同添加物条件下波长610nm的OD值,并结合钙转化公式计算各试验组乳酸钙含量和乳酸钙的转化率。结果表明:当保加利亚乳酸杆菌和醋酸杆菌在浓度为6×108·m L-1、体积比为1∶3时,钙的转化率为75.38%,高于其他实验组;而当复合乳酸菌发酵液中p H值为6时,钙的转化率达到最高,为75.12%;各种糖底物添加试验结果表明:2%甘露醇对保加利亚乳酸杆菌和醋酸杆菌糖反应活性增强效果较为明显,说明菌液中的复合菌比例、添加糖的种类及初始p H值能够影响保加利亚乳酸杆菌和醋酸杆菌对蛋壳粉的发酵分解率。

二维方腔内对流换热的场协同分析

通过对协同方程的求解,得到在二维方腔内换热效果最优的流场形态随粘性阻力的增加而转变的现象。本文利用附加体积力和挡板的手段,用数值方法再现了粘性耗散不同时最优流场的几种流动形态。不同工况下的数值结果证实了换热效果较好的流动形态会随着粘性阻力的增加而发生转变的观象。最后,讨论了挡板热导率等参数对换热效果的影响。

我国首例非洲猪瘟的流行病学调查

2018年8月1日,辽宁省沈阳市沈北新区五五社区某养猪户出现猪只连续不明原因死亡,疑似非洲猪瘟。经现场剖检、采样送中国动物卫生与流行病学中心国家动物外来病研究中心确诊为非洲猪瘟。根据临床症状和剖检变化建立了病例定义,通过查阅记录、访谈相关人员开展病例搜索,对疑似病例进行实验室检测。调查结果表明,该养殖户场内发病率为12.3%,病死率为100%。描述了疑似病例的群间分布、时间分布、空间分布。分析表明,违规调运是引起该起疫情的重要风险因素。对照病例定义,经大范围病例搜索,已追踪该起疫情的扩散范围,并采取了扑杀、无害化处理等防控措施,疫情得到有效控制。

基层兽医实验室生物安全管理存在的隐患及对策

县级兽医实验室是省兽医系统中最基层的实验室，承担着本行政区域及授权范围内的动物疫病诊断、监测、检测、流行病学调查以及其他与动物防疫相关的技术工作，为动物防疫工作提供技术支持，为本行政区域内重大动物疫病防控、

小反刍兽疫诊断技术的研究进展

小反刍兽疫（Peste des petits ruminants，PPR）是FAO／OIE规定的A类烈性传染病，我国规定为一类动物疫病，是一种严重的烈性、接触性传染病，主要感染小反刍兽，以发热、口腔溃疡、咳嗽、腹泻和死亡为主要特征。该病于1942年首次发现于西非，近年来该病呈蔓延的趋势，由西非、中非和东非向东扩散，目前已传播到西亚和南亚地区，且有上升趋势。尤其2007年，在我国周边国家和地区形成了大规模的爆发。虽然至今我国尚未发现该病，但它作为一种重大的跨国动物疫病严重的威胁着我国的动物卫生安全，因此对该病的研究具有重大的现实意义。

禽流感血凝-血凝抑制试验的质量控制

禽流感血凝-血凝抑制试验是目前我国各地动物防疫监督机构、出入境检验检疫部门和养殖场对禽鸟进行禽流感疫苗抗体水平监测广泛采用的试验方法。该试验方法具有经济、快速可靠、操作简便和对抗体水平进行量化的优点，能够处理大量的样品，并能在短时间内报告禽类血样的禽流感抗体滴度水平，

蛋氨酸脑啡肽对禽马立克细胞株(MSB-1)增殖的影响

实验旨在研究蛋氨酸脑啡肽(MENK)对禽马立克细胞MSB-1生长抑制作用和凋亡诱导效应。用MENK对禽马立克细胞MSB-1细胞株进行干预,采用光镜观察细胞密度及形态,MTT法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡。镜下观察可见在10-12mol/lMENK的作用下,MSB-1细胞株数量降低,细胞形态渐圆钝,甚至出现皱缩,与对照组相比MENK对MSB-1细胞具有明显的生长抑制作用,抑制率为19%～46%(P<0.01),诱导细胞凋亡率为(62.04±3.32)%(P<0.01)。MENK对MSB-1细胞株具有增殖抑制效应及凋亡诱导效应,是具有发展潜力的抗肿瘤药物。

蛋氨酸脑啡肽对GM-CSF诱导的小鼠骨髓来源的树突状细胞TLR-4表达的影响

观察蛋氨酸脑啡肽(MENK)对巨噬细胞-粒细胞集落刺激因子(GM-CSF)诱导的小鼠骨髓来源树突状细胞TLR-4表达的影响,探讨蛋氨酸脑啡肽对小鼠骨髓来源树突细胞免疫功能的调节机制。体外制备小鼠骨髓细胞用GM-CSF协同MENK诱导培养7d后用RT-PCR法检测TLR-4的mRNA表达,用Western-Blot检测TLR-4蛋白的表达。结果表明:MENK协同诱导组TLR-4的表达高于正常对照组(p<0.01)和GM-CSF诱导组(p<0.05),MENK可以促进树突状细胞TLR-4的表达。

牛病毒性腹泻病毒RT-PCR诊断方法的建立

根据已发表的牛病毒性腹泻病毒株的基因序列,分析合成了一对扩增跨幅为190bp左右的引物,对牛病毒性腹泻病基因I型或基因II型的毒株进行RT-PCR扩增,结果是取得了与预期大小一致的RT-PCR产物,而对照样品的扩增全为阴性;该方法最低可检测到0.10ng的牛病毒性腹泻病毒RNA。

螺旋扭曲椭圆管层流换热与流阻特性模拟分析

对螺旋扭曲椭圆管内的层流换热与流阻特性进行了理论分析和数值计算,给出了努谢尔数和阻力系数的准则关系式。表明螺旋扭曲椭圆管可较大程度地强化层流换热,其流阻增加较小,同功耗下的强化传热评判指标可达2～4。将螺旋扭曲椭圆管换热器应用于炼油装置中,节能效益显著。

辽宁省一起牛炭疽疫情的诊断

炭疽是由炭疽芽胞杆菌引起的一种人兽共患的烈性传染病。该菌可形成芽孢，具有坚强的抵抗力，能够在环境中长期存活，从而造成长期的持续的污染和再感染，牲畜等可通过接触土壤、被污染的水源等环境中的芽孢而感染。

猪源大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶的检测及其耐药性分析

为了解辽宁地区猪源大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)情况及耐药情况,采用纸片扩散法对从辽宁地区分离到的65株大肠埃希菌进行ESBLs检测及耐药性分析,并用PCR方法对确证的产ESBLs大肠埃希菌进行TEM、CTX-M、OXA和SHV基因型检测。结果发现,在65株大肠埃希菌中,20株大肠埃希菌产ESBLs,阳性率为30.77%;在20株产ESBLs大肠埃希菌中,9株为TEM型,1株为CTX-M型,8株为同时携带TEM型和CTX-M型,1株为同时携带TEM型和OXA型,1株为同时携带TEM型、CTX-M型和OXA型。药敏试验结果表明,产ESBLs菌株的耐药率明显高于非产ESBLS菌株,且产ESBLs菌株均为多重耐药菌株。可见,辽宁地区产ESBLs猪源大肠埃希菌的检出率较高,流行的主要基因型为TEM型和TEM+CTX-M型。

辽宁猪源大肠埃希菌的分离鉴定与药敏试验

为了调查辽宁省不同地区猪源大肠杆菌病的流行和耐药情况,无菌采集临床疑似大肠杆菌病病死猪或患病猪病料65份,经细菌分离培养及生化试验,共分离到65株大肠埃希菌,分离率为100%。对分离到的菌株进行药物敏感试验及超广谱β内酰胺酶(ESBLs)筛选和确证试验,结果显示,辽宁地区分离株均表现出不同程度的耐药,耐药菌株占98.46%,其中对四环素、青霉素及氨苄西林的耐药率分别为93.33%、81.54%和80.00%;对甲氧苄啶、磺胺异恶唑、氯霉素、恩诺沙星耐药性较高,分别为74.29%、74.29%、69.23%和68.57%;对米诺霉素及多粘菌素B较为敏感,耐药率仅为10%和9.23%;分离株多药耐药率较高,达92.31%。ESBLs确证试验结果发现,辽宁省分离株中29.23%的菌株能产生ESBLs。说明辽宁地区猪大肠埃希菌流行情况较为广泛,耐药情况较为严重。

阜新某鸡场大肠埃希菌四环素类药物敏感性试验及耐药基因检测

大肠埃希菌能够引起鸡大肠杆菌病,对养殖业危害巨大。检测阜新某鸡场分离的33株鸡源大肠埃希菌对6种临床常用的四环素类药物的敏感性,并对四环素耐药基因进行检测。结果表明,大肠埃希菌分离株对土霉素和脱氧土霉素高度耐药;对四环素和多西环素中度耐药;对金霉素和强力霉素敏感。在33株大肠埃希菌分离株中检测出tetB、tetC、tetM、tetK、tetL 5种四环素耐药基因,未检出tetA基因,tetK检出率最高。

辽宁猪圆环病毒病流行状况调查与分析

用PCR技术,对2008-2012年来自于兽医门诊病例的3 336份样品,以及2010-2013年采集屠宰场的930份组织样品进行了PCV-2核酸检测。结果表明,PCV-2感染在辽宁临床发病猪群中普遍存在,感染率呈逐年上升趋势。测定了11株PCV-2毒株进行全基因序列,同源性分析表明,11株分离毒株之间的同源性为94.5%-99.4%,与国内参考毒株间的同源性为94.5%-99.7%,与国外参考毒株间的同源性为94.3%-99.3%;结果还显示,PCV2b仍然为我省猪群PCV-2的主要流行基因型。

重组杆状病毒表达H9亚型禽流感HA基因的研究

为研究通过体外表达的方式获得具有生物学活性的禽流感HA蛋白的方法,根据GenBank公布的禽流感H9亚型的基因序列设计引物,扩增出HA基因全长片段,将扩增片段克隆到pFastBacHTa载体上,构建重组杆粒rBacmid-HA,在脂质体介导下转染Sf9细胞制备重组杆状病毒,表达HA蛋白,并通过血凝抑制试验、Westernt-blot、间接免疫荧光试验研究其生物学活性。结果显示,在Sf9细胞中成功表达了HA蛋白,分子量约为65kD,且表达蛋白具有良好的生物学活性。

天津株(TJM-F92)高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗免疫后病毒血症和抗体消长规律的试验报告

高致病性猪繁殖与呼吸综合征（HP—PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株引起的一种急性高致死性疫病。发病主要特征为怀孕母猪流产、早产、木乃伊胎等，母猪流产率可达30％以上；仔猪出现严重的呼吸道症状，感染率可达100％，死亡率在50％以上。目前我国使用的高致病性猪繁殖与呼吸综合征疫苗均为活疫苗，据报道活疫苗免疫后可在动物体内复制并持续存在。为摸清高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗免疫后在猪体内的存在时间，我们进行了本试验，现报告如下。

猪流行性腹泻病毒一步法RT-PCR检测方法的建立与初步应用

猪流行性腹泻（PED）在全球的大流行给养猪业造成重大经济损失,为快速特异地检测猪流行性腹泻病毒（PEDV）,本研究根据PEDV N基因保守序列设计合成引物,通过对RT-PCR反应体系和反应条件优化,建立了一步法RT-PCR检测PEDV的方法。结果显示,该方法检测敏感性达2 016拷贝/μl;对猪传染性胃肠炎病毒、猪A群轮状病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒等检测结果均为阴性,具有良好的特异性;批内变异系数为1.14%~2.15%,批间变异系数为2.46%,具有良好的重复性。应用该方法对辽宁省93份临诊病料进行了检测,样品阳性率为69.89%（65/93）,为PED的快速诊断和流行病学调查提供了有效的技术手段。

沈阳某鸡场大肠埃希菌的分离鉴定及药敏试验

对沈阳市某肉鸡养殖场的85例病死鸡进行大肠埃希菌的分离鉴定及药物敏感性试验，结果分离到大肠埃希菌62株，分离率为72．9％，分离菌株对头孢氨苄全部耐药，对其余抗菌药物的耐药率在0～88．7％之间，多重耐药情况普遍。