鸡源禽腺病毒的LMH细胞传代及细胞传代毒株对SPF鸡的致病性

为建立禽腺病毒4型的禽源细胞感染模型,并考察细胞培养毒株对动物的致病性,将实验室2014-2017年间分离的5株血清4型禽腺病毒接种鸡肝癌细胞(leghorn male hepatocellular cells,LMH)并盲传,选取各病毒的LMH细胞培养物,按一定剂量经腿部肌肉注射接种4周龄SPF鸡;记录试验动物的发病情况,剖检采集发病或死亡鸡的脏器并制作病理切片,观察并分析病毒细胞培养物感染SPF鸡的组织病理变化。结果发现:5株血清4型禽腺病毒在LMH细胞上盲传至第4代时开始出现I群禽腺病毒所致的特异性细胞病变,提取培养物中病毒核酸并进行PCR鉴定,均能扩增出大小约564 bp的特异性扩增片段,表明病毒能在LMH细胞上稳定增殖。选取各病毒第10代细胞培养物进行SPF鸡回归试验,发现细胞培养上清接种4周龄SPF鸡后第3天开始,有部分鸡开始精神沉郁,食欲消退、卧地不起瘫痪并迅速死亡,病理剖检及病理组织切片结果显示HB-1、HB-2、HB-3和SD-1毒株保持对4周龄SPF鸡的致病性,病死鸡中能观察到典型的组织病理学变化,而对照组不出现任何临床症状及病理变化。以上结果表明,LMH细胞可用于禽腺病毒增殖传代,是开展禽腺病毒分子致病机制研究的理想细胞模型。

猪场蚊子中乙型脑炎病毒的RT-PCR检测

收集湖北省与安徽省部分猪场的蚊子样本,用RT-PCR检测蚊子样本是否携带有乙型脑炎病毒,并对猪群乙型脑炎病毒抗体进行了检测。结果表明,53份蚊子样品中乙型脑炎病毒阳性样品为44份,表明这些猪场的蚊子广泛携带有乙型脑炎病毒。从阳性PCR产物中随机选出8个,并将其克隆到pEASY-T1载体中,得到5个阳性重组质粒,进行序列测定和进化树分析,结果表明阳性蚊子样本携带的都是基因Ⅲ型乙型脑炎病毒。猪场的1 401份血清样品的乙型脑炎病毒抗体阳性率为57.7%,说明这些猪场猪群的乙型脑炎病毒感染率较高。

猪链球菌-副猪嗜血杆菌二联亚单位疫苗在小鼠的免疫效力分析

本研究旨在开发一种用于防制猪链球菌病和副猪嗜血杆菌病的新型二联基因工程疫苗,并对其免疫效应进行评价。选择猪链球菌2型蛋白溶血素SLY、HP0197和副猪嗜血杆菌外膜蛋白D15和HPS06257 4种蛋白,重组表达并纯化,添加一定比例的佐剂制成含有不同组分的亚单位疫苗。研究表明该二联亚单位疫苗及各单苗能够引起小鼠良好的体液免疫,并能保护机体分别抵抗致死剂量猪链球菌2型(SS2)和副猪嗜血杆菌(HPS)强毒株的攻击。此外,调理吞噬试验表明疫苗高免血清能够有效杀死细菌,并赋予机体被动抵抗SS2和HPS感染的能力。研究证实制备的猪链球菌-副猪嗜血杆菌二联亚单位疫苗在小鼠具备良好的免疫保护效力。

猪流感H1亚型和猪链球菌2型临床分离血清的抗体检测

以各省份未免疫猪链球菌病疫苗和猪流感疫苗猪场的临床发病猪分离的4 661份猪血清作为检测对象,使用猪流感病毒(H1亚型)ELISA抗体检测试剂盒和猪链球菌2型ELISA抗体检测试剂盒分别检测猪流感病毒(H1N1)和猪链球菌2型(SS2)的抗体,将检测结果从时间、空间进行分析,以探究猪流感与猪链球菌感染的基本规律,从而为疾病的防治提供借鉴和指导。检测结果表明,初春4月左右是猪流感流行的季节,猪流感H1N1抗体平均阳性率为45.19%;猪链球菌一般在7-11月流行,猪链球菌2型(SS2)抗体平均阳性率为54.85%,双阳性的血清检出率在10-12月最高,双阳性的血清检出率最高的是湖南省。

禽流感病毒H7亚型竞争ELISA抗体检测方法的建立

将禽流感病毒H7亚型标准抗原作为免疫原免疫BALB/c小鼠,取免疫合格的脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合。通过血凝抑制试验,筛选得到12株杂交瘤细胞上清具有HI效价,且与禽流感病毒H7亚型阳性血清间具有较好的竞争效果。将竞争效果最好的1H11细胞扩大培养后制备腹水,获得的单克隆抗体具有效价高、特异性好等特点。使用H7标准抗原包被ELISA板,将HRP标记的单克隆抗体作为竞争抗体,建立了一种禽流感病毒H7亚型竞争ELISA抗体检测方法。利用该方法对待检血清进行测试,与HI试验有99.3%的符合率,说明试制的禽流感病毒H7亚型竞争ELISA抗体检测试剂盒可以用来检测禽流感病毒H7亚型抗体,且操作简便快捷,可批量操作,大样本检测鸡群抗体水平。