外周血树突状细胞的体外培养

本文用塑料贴壁的外周血单个核细胞(PBMNCs)在含自体血浆、rhGM-CSF、rhIL-4和TNFα的RPMI1640培养基,37℃,5%CO2湿化空气培养树突状细胞(DCs).经10天培养,可获得大量具DCs形态学特征的细胞,其有很强的刺激同种淋巴细胞增殖功能,约30%的细胞表达HLA-DR和CD1a.健康志愿者每1×107PBMNCs可收获细胞约5×105.本文培养方法产率高,培养体系简单,用自体血浆代替小牛血清,培养过程简便,这些均适应临床治疗要求.

自体树突状细胞活化的骨髓细胞对慢性粒细胞白血病骨髓的净化

为考察慢性粒细胞白血病 (CML)患者自体树突状细胞 (DCs)活化骨髓细胞、净化骨髓的作用 ,采用免疫磁珠从 2例血液学缓解的CML骨髓单个核细胞 (BMMNCs)分离DCs,另取BMMNCs置T 2 5塑料培养瓶建立Dexter培养体系 ,分为 3份 ,第 1份为对照 ,第 2份加rhIL 2 ,第3份加自体DCs。每周取半量非贴壁细胞、计数、行CFU GM检测 ,然后加等量新鲜培养基继续培养。当非贴壁细胞总数 <2× 10 5时终止培养 ,收集贴壁细胞做CFU GM集落形成试验并检测CD34和P2 10表达。取贴壁细胞形成的CFU GM集落 ,抽提RNA ,用反转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测BCR ABL的表达。结果发现 ,在DCs加入CML骨髓Dexter培养体系培养后 1- 2周 ,非贴壁细胞的CFU GM产量明显下降 ,与rhIL 2的体系基本平行 ,同时体系中的P2 10阳性细胞显著减少。不过 ,培养 3周后含DCs的体系CFU GM产量下降减缓 ,而含rhIL 2的体系CFU GM产量持续下降。在含自体DCs的Dexter体系 ,贴壁细胞中CD34+ 细胞和P2 10 + 细胞比例最低 ,只是贴壁细胞产生的CFU GM集落中 ,BCR ABL(+ )的集落比例与不含DCs的体系比较无明显差别。这些结果说明自体DCs加入CML骨髓Dexter培养体系能减少白血病的祖细胞 ,包括成熟的祖细胞和原始的祖细胞 ,自体DCs有可能用于CML骨髓的体外净化。

自体树突状细胞用于慢性粒细胞白血病骨髓净化的初步研究

目的 考察慢性粒细胞白血病 (CML)树突状细胞 (DC)刺激自体骨髓 T细胞 ,清除白血病细胞的作用。 方法 采集 3例 CML 病人 (2例慢性期和 1例急变期 )外周血 ,分离单个核细胞 (PBMNC) ,经塑料贴壁后在含自体血浆、重组人白介素 4(rh IL- 4)、重组人粒 -单集落刺激因子 (rh GM- CSF)和重组人肿瘤坏死因子 (rh TNFα)的 RPMI- 16 40培养液 ,37℃ ,5 % CO2 孵箱培养 10天 ,或用免疫磁珠从 PBMNC分离 DC,在含自体血浆、rh GM-CSF和 rh TNFα的 RPMI16 40培养液培养 3天 ,收获的细胞即 DC加到含 rh IL- 2的 Dexter骨髓长期培养体系 ,置37℃ ,5 % CO2 孵箱培养 7天 ,观察培养前后骨髓细胞的免疫表型和 P2 10阳性细胞比例。 结果 从 CML 病人外周血获得的 DC大多数表达 P2 10。在含 rh IL- 2的 Dexter体系加入 DC能进一步增加体系中的 T细胞数。在 2例慢性期病人体系中的 P2 10阳性细胞减少 ,但在急性期病例 ,体系中 P2 10细胞明显增加。 结论 CML 病人的 DC表达 P2 10 ,能刺激自体骨髓中 T细胞增生 ,在慢性期病人 ,这些自体 DC活化的骨髓

塑料粘附δ实验检测骨髓原始祖细胞

目的 采用塑料粘附 δ实验 (PΔ)估计骨髓原始祖细胞的相对数量。 方法 取 4例非血液病患者骨髓 ,肝素抗凝 ,用淋巴细胞分离液分离单个核细胞 ,取少量细胞加入甲基纤维素培养基 ,37℃ ,5 % CO2 孵箱培养 ,14天后计数集落 (CFU- GM) ,其余细胞作 PΔ。 结果 4份骨髓的 PΔ相对数 (/ 10 7细胞 )分别为 6 6 2 ,5 34 ,2 2 2 0和112 0 ,CFU - GM(/ 10 4细胞 )分别为 14.1,16 .3,33.6和 2 5 .6 ,二者大致平行。 结论 PΔ可作为骨髓原始祖细胞的评估方法 ,由于方法简便 ,耗时短 ,适合实际应用。

强直性脊柱炎患者血清蛋白的分析

强直性脊柱炎（ＡＳ）是一种血清类风湿因子阴性的脊柱关节病，一般呈慢性病程，临床上表现为脊柱疼痛及活动受限，其发病机制仍不清楚［１］。为探讨该病的血清蛋白变化特征及其在疾病发生发展中的作用，笔者测定３３例病人的血清ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、补体Ｃ３、Ｃ４...

自体树突状细胞活化的骨髓细胞对慢性粒细胞白血病细胞毒性作用研究

目的 考察自体树突状细胞 (DC)活化的骨髓细胞对慢性粒细胞白血病 (CGL)细胞的毒性作用。方法 用免疫磁珠从 2例缓解的CGL患者骨髓单个核细胞 (BMMNC)分离DC ,另取BMMNC分成 3份 ,分别加入长期培养基 ,建立Dexter培养体系。第 1份为对照 ,第 2份加重组人白细胞介素 2(rhIL 2 ) ,第 3份于培养第 4天加入收获的DC ,培养 10d后收集非贴壁细胞。以上述 3份非贴壁细胞为效应细胞 ,对照非贴壁细胞为靶细胞 ,采用双色流式细胞技术进行细胞毒性实验 ,同时用流式细胞技术检测BMMNC的P2 10表达。结果 DC活化的效应细胞比rhIL 2活化的效应细胞对靶细胞有更大的杀伤作用 ,靶细胞中的死细胞比例例 1分别为 6 3.12 %和 42 .5 9% ,例 2分别为 6 1.6 0 %和 2 1 46 %。另外 ,DC活化的效应细胞与靶细胞混合孵育后 ,效应细胞本身的死细胞比例明显增加 ,而rhIL 2活化的效应细胞无此现象。BMMNC经培养后非贴壁细胞中P2 10阳性细胞比例明显减少 ,以含DC者最为显著 ,含rhIL 2者次之。结论 自体DC活化的骨髓细胞能对CGL细胞产生明显的细胞毒性作用 ,DC的作用胜过rhIL 2。这些经DC活化的骨髓回输后可能在体内发挥移植物抗白血病 (GVL)效应。