斑蟊酸钠维生素B6注射液联合NP方案治疗非小细胞肺癌

目的探讨以斑蟊酸钠维生素B6注射液(艾易舒)联合NP方案对非小细胞肺癌治疗的疗效。方法将72例非小细胞肺癌患者分为实验组和对照组。分别观察艾易舒+NP(实验组)与单独应用NP方案(对照组)的近期疗效并分析治疗前后肿瘤药敏实验的结果。结果实验组、对照组的近期疗效分别为60.0%和36.1%(P<0.05);临床受益率分别为90.0%和63.9%(P<0.01)。治疗前实验组、对照组肿瘤药敏实验分别为80.0%和80.6%(P>0.05);治疗后两组的总敏感率分别为87.5%和63.9%(P<0.05)。结论在治疗非小细胞肺癌的有效率和临床受益率方面,艾易舒联合NP方案明显优于NP方案;艾易舒能够升高患者白细胞,与化疗合用可减少骨髓抑制的发生;艾易舒联合NP方案明显提高了抗肿瘤药物的敏感性,有更明显的抑瘤作用。

斑蝥酸钠维生素B_6注射液体外调节细胞因子的实验研究

目的:通过体外试验研究斑蝥酸钠维生素B6注射液(艾易舒)对淋巴细胞分泌白介素-2、白介素-4、趋化性细胞因子白介素-8的影响,以进一步揭示其抗癌的机制。方法:体外进行人外周血淋巴细胞培养,采用放射免疫方法分析斑蝥酸钠维生素B6注射液2个剂量组和对照组对淋巴细胞分泌细胞因子白介素-8、白介素-4的影响。采用RT-PCR半定量方法分析斑蝥酸钠维生素B6注射液对淋巴细胞合成白介素-2mRNA的影响。结果:适当浓度的艾易舒对经植物血凝素(PHA)活化的人外周血淋巴细胞分泌白介素-4、白介素-8有影响,随着药物浓度的增高白介素-4的分泌呈增加趋势,但无统计学意义。而白介素-8的分泌药物组与对照组相比降低,且有统计学意义,而两个药物剂量组之间无统计学意义。2个药物剂量组可明显促进T细胞合成白介素-2mRNA,两实验组与对照组比较P<0.05,较低浓度剂量组这种促进作用更明显。结论:斑蝥酸钠维生素B6注射液通过促进淋巴细胞分泌细胞因子白介素-2增强机体的免疫功能,减轻化疗副作用,提高化疗疗效。通过抑制白介素-8的分泌,抑制新生血管的生成,从而抑制肿瘤的转移。增强免疫功能、抑制新生血管的生成可能是其抗癌机制之一。

重组改构人TNF逆转卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP的耐药性及其机制

目的：探讨重组改构人肿瘤坏死因子（recombinant mutant human tumor necrosis factor,rmh-TNF）体外逆转人卵巢癌多药耐药细胞株SKOV3/DDP的耐顺铂（cisplatin,又称DDP）效应及其可能存在的作用机制。方法：体外培养人卵巢癌多药耐药细胞株SKOV3/DDP,以MTT法检测rmh-TNF对此耐药株的细胞毒作用,确定其对此细胞株的无毒剂量;同法测定无毒剂量rmh-TNF干预后SKOV3/DDP对顺铂耐药性的变化,通过流式细胞术检测rmh-TNF干预不同时间段SKOV3/DDP细胞株中GST-π蛋白的表达,RT-PCR方法分析rmh-TNF处理SKOV3/DDP细胞前后MDR1基因的表达水平。结果：（1）50～122.34U/ml rmh-TNF对SKOV3/DDP细胞增殖无明显抑制作用（细胞存活率均（90%）,因此选用100U/ml作为逆转剂量（无毒剂量）;（2）单用DDP24、48、72h的IC50为（23.29±0.43）、（8.97±0.69）、（6.43±0.79）μg/ml,联合100U/ml rmh-TNF和DDP用药使SKOV3/DDP的IC50分别降至（19.50±0.50）、（4.34±0.43）、（2.44±0.02）μg/ml,逆转倍数分别为1.19、2.06、2.64倍;（3）100U/ml rmh-TNF干预0、24、48、72h后SKOV3/DDP细胞内GST-π蛋白的表达随作用时间延长降低,MDR1基因的表达随作用时间延长降低。结论：rmh-TNF对SKOV3/DDP有逆转耐药作用,其机制可能与下调GST-π蛋白及MDR1基因表达有关。

rmh-TNF协同顺铂抗小鼠Lewis肺癌血管生成的作用

目的:观察重组改构人肿瘤坏死因子(recombinant mutant human tumor necrosis factor,rmh-TNF)协同顺铂(cispla- tin,又称DDP)抗小鼠Lewis肺癌血管生成的作用。方法:建立C57BL/6小鼠Lewis肺癌模型,随机分为4个治疗组:生理盐水对照组、rmh-TNF(150万U/kg)组、DDP(6.15 mg/kg)组、联合用药组(DDP+rmh-TNF)。接种肿瘤细胞后12 d开始瘤内注射药物3 d,RT-PCR法测定瘤组织中HIF-1α的表达,免疫组化法检测肿瘤组织血管内皮生长因子(vascular endothelial growth fector,VEGF)、激酶结构域受体(kinase domain region receptor,KDR)、微血管密度(microvascular density receptor,MVD)的表达,流式细胞术测定基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)的表达。结果:对照组、rmh-TNF组、DDP组和联合用药组小鼠肿瘤组织中的MVD数分别为(24.76±1.28)、(18.95±1.22)、(19.53±1.15)、(10.43±1.05),两单药组的MVD数明显低于对照组(P<0.05);联合用药组低于两单药组(P<0.05)。HIF-1αmRNA相对表达水平分别为(0.171±0.004)、(0.138±0.006)、(0.134±0.006)、(0.095±0.006),两单药组较对照组明显下降(P<0.05),联合用药组明显低于两单药组(P<0.05)。肿瘤组织中MMP-2蛋白的荧光指数FI值依次为(1.000±0.000)、(0.875±0.020)、(0.848±0.127)、(0.545±0.107),单药组的MMP-2蛋白的(FI)值较对照组明显下降(P<0.05),联合用药组明显低于两单药组(P<0.05)。单药组VEGF、KDR表达均明显低于对照组(P<0.05),联合用药组的表达均低于各单药组(P<0.05)。结论:rmh-TNF能够增强DDP抗小鼠Lewis肺癌血管生成的作用。

支气管肺泡灌洗检测对肺癌诊断意义的探讨

目的:对肺癌患者支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞学检查及CYFRA21-1水平的测定,旨在探讨其对肺癌的诊断价值。方法:采用免疫放射分析法(IRMA)测定患者BALF及血清中CYFRA21-1水平及细胞学检查,与纤维支气管镜活检、刷检做比较,评价其对肺癌的诊断价值。结果:1)CYFRA21-1水平肺癌组BALF及血清均高于对照组(P<0.05,<0.01)。2)BALF中CYFR21-1在Ⅰ～Ⅱ期肺癌的阳性率、符合率(75.0%,83.3%)均显著高于血清(6.3%,50.0%)(P<0.01,<0.05)。3)周围型肺癌BALF中CYFRA21-1阳性率(77.3%)及细胞学阳性率(72.7%)显著高于支气管镜活检阳性率(9.1%,P<0.01)及刷检阳性率(36.4%,P<0.05)。结论:检测BALF中肿瘤标志物(TMS)对肺癌早期诊断优于血清;周围型肺癌BALF中CYFRA21-1阳性率及细胞学阳性率显著高于支气管活检和刷检阳性率,是诊断周围型肺癌有效的辅助方法。

Ki-67阳性或阴性表达乳腺癌不同辅助治疗方案的远期疗效比较

目的探讨不同Ki-67表达情况下,乳腺癌术后不同辅助化疗方案及辅助化疗后接受不同内分泌药物治疗的远期疗效。方法收集2008年1月至2009年12月694例乳腺癌患者,术后均接受蒽环类或蒽环类序贯紫杉类方案化疗;再选取其中ER阳性且绝经的261例患者,均接受选择性雌激素受体调节剂(SERM)或芳香化酶抑制剂(AI)内分泌治疗。对Ki-67不同表达情况下,不同辅助化疗方案及辅助化疗后不同内分泌药物治疗与无病生存期(DFS)和总生存期(OS)的关系进行分析。结果 (1)527例Ki-67阳性乳腺癌患者的中位DFS和OS分别为37.0个月和38.0个月,其中蒽环类方案组和序贯紫杉类方案组的中位DFS分别为36.5个月和38.0个月(P=0.046),OS分别为38.0个月和39.0个月(P=0.045);167例Ki-67阴性患者的中位DFS和OS分别为49.4个月和51.5个月,蒽环类方案组和序贯紫杉类方案组的中位DFS和OS差异均无统计学意义。在Ki-67和ER表达的4种组合中,仅Ki-67+ER-表达组蒽环类方案与序贯紫杉类方案的中位DFS(30.5个月vs.35.9个月,P=0.030)和中位OS(39.2个月vs.42.1个月,P=0.160)的差异有统计学意义。(2)261例ER阳性且绝经的患者中,200例Ki-67阳性者的中位DFS和OS分别为38.0个月和39.0个月,另外61例Ki-67阴性患者的中位DFS和OS分别为52.0个月和53.3个月;无论Ki-67阳性或阴性表达,接受SERM或AI治疗患者的DFS和OS均无显著差异。结论在Ki-67阳性乳腺癌术后辅助化疗中,蒽环类序贯紫杉类方案疗效优于蒽环类方案。在ER阳性接受内分泌治疗的绝经患者中,SERM和AI在不同Ki-67表达者中的疗效相当。

热疗协同顺铂对MGC-803细胞增殖抑制作用及其机制的研究

目的研究顺铂(cisplatin,DDP)联合热疗对MGC-803细胞的增殖抑制作用,并探讨其可能机制。方法 MTT法测定不同的顺铂浓度组细胞的增殖抑制率,确定顺铂的工作浓度,以该浓度进行实验。根据Weeb系数判断热化疗联合是否有协同效应。实验分4组:对照组、热疗组、化疗(DDP)组、热化疗组,流式细胞术测定细胞周期。流式细胞术和RT-PCR测定细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)蛋白及其mRNA的表达。结果以顺铂作用24小时IC30的值作为实验的工作浓度,分组处理后,与其它3组比较,热化疗组处于S期细胞比例显著升高,G0/G1期细胞比例显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术及RT-PCR分析表明热化疗联合使CyclinD1、PCNA蛋白及其mRNA的表达显著降低(P<0.05)。结论热疗协同顺铂对胃癌MGC-803细胞有显著的增殖抑制作用,热化疗联合减少了增殖细胞在S期的分布,下调了CyclinD1、PCNA的表达。

rmhTNF-α协同顺铂对小鼠Lewis肺癌移植瘤的抑制

目的:观察重组改构人肿瘤坏死因子(rmhTNF-α)协同顺铂(cisplatin,DDP)对小鼠Lewis肺癌移植瘤的抑制作用,并探讨其可能的作用机制。方法:将Lewis肺癌细胞接种于C57BL/6小鼠右腋皮下,随机分为4组:生理盐水组(对照组)、DDP组(3mg/kg)、rmhTNF-α组(150×104U/kg)、rmhTNF-α(150×104U/kg)+DDP(3mg/kg)组。于细胞接种的第7天,肿瘤直径约0.6cm时,瘤内注射给药,连续3d,停药1d后处死小鼠,剥离并称取瘤重,计算抑瘤率。流式细胞术测定移植瘤细胞凋亡率及细胞周期,RT-PCR检测移植瘤组织Survivin的表达。结果:(1)rmhTNF-α+DDP组治疗的抑瘤率(36.61%)明显高于DDP组(17.12%)或rmhTNF-α组(15.83%)单药治疗(P<0.05)。两药联合使用的q=1.2,具有良好的协同作用。(2)联合用药治疗后移植瘤细胞的凋亡率[(28.2±1.8)%]显著高于DDP[(21.6±1.0)%]和rmhTNF-α[(19.3±2.0)%]单药治疗(P<0.05);前者的细胞周期明显阻滞于G2期。(3)3个治疗组移植瘤细胞Survivin基因的表达受到明显抑制(P<0.01),联合用药组的抑制程度较单药组更明显(P<0.05)。结论:rmhTNF-α与DDP联合应用具有协同抗Lewis肺癌移植瘤的作用,其机制可能与抑制Survivin基因表达、诱导肿瘤细胞凋亡有关。

斑蝥酸钠逆转K562/AO_2细胞多药耐药的机制初探

目的观察斑蝥酸钠(SCA)对多药耐药的白血病细胞(K 562/AO2)细胞是否有逆转作用,并初步探讨其逆转机制。方法应用M TT测定多柔比星(阿霉素,ADM)对K 562/AO2细胞的半数抑制浓度(IC50);应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测K 562、K 562/AO2细胞表达m dr1基因水平;用流式细胞术(FCM)检测其P-gp蛋白表达的水平。结果M TT结果显示,无毒剂量的SCA与ADM联合应用比单纯加ADM(同等剂量)对K 562/AO2细胞的IC50降低了1.51倍;耐药细胞(K 562/AO2)经SCA处理后m dr1基因与P-gp蛋白表达均下降(P<0.05)。结论SCA对K 562/AO2有一定的逆转作用,其机制可能与下调m dr1基因和P-gp蛋白表达有关。

热疗联合表柔比星对胃癌MGC803细胞的体外抑制及凋亡的影响

目的观察表柔比星(EPI)温热化疗对人胃癌MGC803细胞的体外抑制及凋亡的影响,探讨其作用机制。方法采用四氮甲唑蓝(MTT)法确定作用48 h抑制率为50%的药物浓度作为实验的工作浓度。以48 h的IC50的药物浓度进行化疗或与热疗的联合,热疗选择温度为43℃,体外作用于MGC803细胞,实验分四组:对照组(C)、热疗组(H)、化疗组(D)、热化疗组(HD)。MTT法检测各处理组对肿瘤细胞增殖的抑制作用;应用RT-PCR观察各处理组诱导MGC803细胞凋亡的作用及对Caspase-3和Bcl-2表达变化的影响。结果单纯热疗和化疗对MGC803细胞系均有抑制作用(P<0.05);EPI温热化疗可明显增强EPI对MGC803细胞的抑制作用(P<0.05);与对照组比,热疗组、化疗组及热化疗组细胞凋亡率均较对照组显著升高,各组之间均有差异(P<0.05);Bcl-2表达下调、Caspase-3表达上调,各组之间均有差异(P<0.05)。Caspase-3与Bcl-2蛋白的表达呈明显负相关(r=-0.990,n=12),细胞凋亡率与Bcl-2蛋白表达负相关(r=-0.924,n=12),而与Caspase-3蛋白表达正相关(r=0.891,n=12)。结论 EPI联合热疗能显著抑制MGC803细胞生长并诱导细胞凋亡,可能与下调Bcl-2,上调Caspase-3的表达及二者相互作用有关。

拓扑异构酶Ⅰ、Ⅱ抑制剂序贯给药对人卵巢癌细胞系的影响

目的 对拓扑异构酶(topoisomerase,TOPO) 抑制剂-羟基喜树碱(10 - hydroxycamptothecin,HCPT)与TOPO 抑制剂吡柔比星(吡喃阿霉素,perarubicin,THP- ADM)联合化疗时的给药顺序、时间间隔进行研究,探讨其合适的给药顺序及间隔时间。方法 MTT法检测HCPT、THP- ADM及两药在不同间隔时间给药对人卵巢癌细胞系SK- O- V3生长抑制率的影响。结果 HCPT、THP- ADM、单药及联合用药各实验组均对SK- O- V3生长产生抑制作用,先给HCPT后给THP- ADM(第一实验组)各组中以间隔12小时给药对癌细胞的抑制作用最强(49.3% )。而在先给THP- ADM后给HCPT(第二实验组)各组中,虽然间隔12小时组对癌细胞增殖抑制作用高于同时给药组及间隔2 4小时组,但差异无显著性。第一实验组各序贯组中对细胞增殖抑制率均高于第二实验组各序贯组的抑制作用的趋势。结论 HCPT与THP- ADM联合应用时抗癌效应呈时间依赖性,以间隔12小时用药最佳。

磷酸肌酸钠对小鼠移植性S180肉瘤生长的影响

目的:观察不同剂量磷酸肌酸钠(CP)对移植性小鼠S180肉瘤增殖及凋亡的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法:皮下注射S180肉瘤细胞建立动物实体瘤模型,将小鼠随机分为生理盐水对照组和CP4mg/d、8mg/d、16mg/d给药组,连续腹腔用药7d,取出瘤组织后应用流式细胞分析技术(FCM)检测S180肉瘤组织凋亡率及PCNA蛋白表达水平,并应用免疫组织化学法检测S180肉瘤组织中Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。结果:给药组平均瘤重较对照组减轻,凋亡率无明显变化。各干预组PCNA蛋白的表达均低于对照组,其中CP16mg/d组与对照组有显著差异,Bcl-2/Bax的比值在对照组最高,各组间的差别无统计学意义。结论:治疗量的磷酸肌酸钠[CP(4～8)mg/d]应用于移植性小鼠S180肉瘤不影响肿瘤的增殖及凋亡;当高剂量(16mg/d)应用时可抑制肿瘤的生长。

斑蝥酸钠维生素B_6注射液对人白血病K562/AO_2细胞的逆转作用及机制的研究

目的:研究斑蝥酸钠维生素B6注射液(SCA)体外对K562/AO2细胞多柔比星(ADM)耐药的逆转作用及机制。方法:应用MTT法测定SCA作用人白血病K562/AO2细胞后对ADM敏感性的变化。采用流式细胞术(FCM)法测定SCA对K562/AO2细胞内ADM的影响及Bcl-2、P-gp蛋白表达的影响。结果:SCA作用K562/AO2细胞前后,对ADM的IC50分别为(40.85±0.40)和(27.09±0.63)μg/mL,逆转倍数为1.51倍;FCM发现SCA能明显增加K562/AO2细胞内ADM的浓度,并使Bcl-2、P-gp蛋白表达下调。结论:SCA能部分逆转K562/AO2对ADM的耐药性,机制可能与增加MDR细胞内的ADM浓度,抑制Bcl-2和P-gp蛋白表达有关。

注射用磷酸肌酸钠对体外培养人卵巢癌细胞SKOV3侵袭能力的影响及其机制

目的:观察注射用磷酸肌酸钠(CP)对人卵巢癌细胞SKOV3体外侵袭能力的影响,并探讨其作用机制。方法:体外培养人卵巢癌细胞SKOV3,随机分为空白对照组(生理盐水)及药物处理组(1、6和12 mmol.L-1CP);分别用生理盐水、CP处理细胞72 h后,采用MTT比色法和Transwell小室法观察细胞黏附和迁移侵袭能力;采用RT-PCR和FCM测定nm23-h1、c-myc mRNA及蛋白表达和MMP-2、MMP-9蛋白表达水平。结果:与空白对照组比较,1 mmol.L-1CP组各项指标差异无统计学意义(P>0.05);6和12 mmol.L-1CP组细胞黏附、迁移侵袭抑制率明显增加(P<0.01),nm23-h1 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.01),c-myc mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.01);但6与12 mmol.L-1CP组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组比较,1、6和12 mmol.L-1CP组MMP-2、MMP-9蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:一定浓度注射用CP可抑制体外培养SKOV3细胞的黏附和迁移侵袭能力,其机制可能与上调nm23-h1、下调c-myc基因表达有关。

肿瘤标记物在肺癌诊治中的应用进展

肿瘤标记物的研究已有数十年历史,实践证明肿瘤标记物对肺癌的诊断、预后、疗效评价及癌前病变的早期发现有重要的参考价值。本文就近年研究较多的肺癌标记物的临床应用及进展做一综述。