2种国产化学发光检测系统与电化学发光检测系统检测CA72-4的一致性评价

目的评价电化学发光检测系统和2种国产化学发光检测系统检测糖类抗原72-4(CA72-4)结果的一致性。方法根据美国临床实验室标准化协会(CLSI)EP09-A3文件,以cobas e601电化学发光免疫分析仪及配套试剂组成的检测系统(简称e601检测系统)作为参比系统(X),以MAGLUMI 4000全自动化学发光分析仪及配套试剂组成的检测系统(简称MAGLUMI 4000检测系统)作为待评系统1(Y1),以CL-2000i化学发光分析仪及配套试剂组成的检测系统(CL-2000i检测系统)为待评系统2(Y2)。收集42例覆盖线性范围的临床血清样本,每份样本用3种检测系统进行单次检测。使用广义极端学生化偏差(ESD)法进行离群值检验,选择最优的回归模型拟合回归方程,计算医学决定水平处的偏移,以1/2室间质评平均偏移(±7.65%)作为可接受标准。结果散点图显示e601检测系统(X)与MAGLUMI 4000检测系统(Y1)和CL-2000i检测系统(Y2)的相关性均良好,目测各发现1个离群值,广义ESD法确认CA72-4检测结果无离群值。通过Deming回归分析(X和Y1)和Passing-Bablok回归分析(X和Y2)得回归方程分别为Y1=5.020 6+1.149 8X,Y2=0.726 3+0.830 0X。将CA72-4的医学决定水平(6.9 U/mL)代入回归方程,计算得e601检测系统(X)和MAGLUMI 4000检测系统(Y1)的相对偏移为60.96%,其相对偏移大于1/2室间质评偏移,比对不可接受;e601检测系统(X)与CL-2000i检测系统(Y2)的相对偏移为-6.74%,比对结果可以接受。结论 e601检测系统与MAGLUMI 4000检测系统之间CA72-4的检测结果不具有可比性,e601检测系统与CL-2000i检测系统之间CA72-4的检测结果具有可比性。CLSI EP09-A3文件可用于不同标记免疫检测系统之间的可比性研究。

苏州地区新生儿TORCH感染的血清学分析

目的分析苏州地区新生儿TORCH感染的血清学特点,为进一步的预防和治疗提供理论依据。方法选取2019年11月至2020年10月苏州市立医院收治的1855例新生儿为研究对象。其中,男927例,女928例。检测TORCH-IgM及TORCH-IgG抗体,分析新生儿血清TORCH抗体阳性结果。结果CMV-IgM阳性19例,阳性率为1.0%。无其他TORCH-IgM阳性。IgG检测中,CMV-IgG的阳性率(96.9%)最高,其次是RV-IgG(90.2%)、HSVⅠ-IgG(74.4%)。不同性别新生儿的TORCH-IgM、TORCH-IgG阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论苏州地区新生儿TORCH感染主要以CMV感染为主。临床应加强新生儿TORCH筛查,为新生儿TORCH感染的预防和治疗提供依据。

根据NCCLSEP09-A2-IR评价两种不同检测系统孕酮检测结果的可比性

目的将化学发光法和电化学发光法孕酮检测结果进行比对,并对结果的一致性进行分析。方法根据NCCLS EP09-A2-IR文件[1],以BECKMAN DXI800(化学发光法)为比对方法,以ROCHE Cobas e601(电化学发光法)为实验方法,收集40例临床血清标本,分析两种检测方法检测孕酮的相关性及可比性。结果两种检测系统检测孕酮精密度均较高,且相关性良好(r2=0.971),低水平预期偏倚小于允许偏倚,中高水平预期偏倚大于允许偏倚,结果不具有可比性。结论两种不同检测系统检测孕酮的重复性及相关性良好,低水平两者检测结果一致性较好,但中高水平两者检测结果差异较大,须对孕酮检测结果进行调整才具有可比性。

小鼠白介素17受体A胞外段的表达、纯化及鉴定

目的:分别克隆小鼠白介素17受体A胞外段(mIL-17RAaa32-322)及小鼠IgG2AFc(mIgG2AFc)基因,构建mIL-17RAaa32-322-mIgG2AFc融合蛋白原核表达载体,并在体外表达、纯化及鉴定。方法:利用基因重组技术构建pET32a(+)-mIL-17RAaa32-322-mIgG2AFc原核表达载体,并在E.coli Rosetta中表达mIL-17RAaa32-322-mIgG2AFc融合蛋白,经镍离子螯合层析分离纯化后,用SDS-PAGE电泳和蛋白质印迹法进行鉴定。结果:成功构建pET32a(+)-mIL-17RAaa32-322-mIgG2AFc原核表达载体,获得高效表达的融合蛋白,且蛋白质印迹证实为目的蛋白。结论:获得mIL-17RAaa32-322-mIgG2AFc融合蛋白,为进一步研究其生物学功能奠定基础。

干细胞标志分子LGR5研究:肿瘤治疗新靶点

背景:近期研究表明,肿瘤干细胞在肿瘤的发生发展中起关键性作用,因此对其标记分子的研究必将对肿瘤发生发展的了解及肿瘤的临床诊断、治疗都带来深远的影响。目的:综述干细胞标志分子LGR5在干细胞和肿瘤干细胞中的研究进展。方法:由第一作者在PubM ed数据库及万方数据库中检索1998年1月至2014年12月有关LGR5与干细胞/肿瘤干细胞研究的相关文献。英文检索词为"LGR5,stem cell,cancer stem cells",中文关键词为"LGR5,干细胞,肿瘤干细胞"。计算机初检得到178篇文献,阅读标题和摘要进行初筛,排除与研究目的相关性差及内容陈旧、重复的文献123篇,纳入55篇符合标准的文献。结果与结论:LGR5是肠道、胃、毛囊等干细胞的表面标志分子,并与结直肠癌、胃癌、肺癌、卵巢癌、肝癌、基底细胞癌等多种肿瘤的发生发展预后密切相关,是肿瘤干细胞的候选标志分子,有望成为肿瘤治疗的新靶点。研究发现R-spondins(RSPOs)是LGR5的高亲和力配体,二者相结合参与Wnt信号通路,调节细胞增殖分化。

实验性自身免疫性甲状腺炎小鼠体内Th17细胞检测的意义

目的:研究Th17细胞及相关细胞因子IL-17在实验性自身免疫性甲状腺炎(experimental autoimmune thy-roiditis,EAT)小鼠体内的变化。方法:利用小鼠甲状腺球蛋白(Tg)建立小鼠EAT模型。应用流式细胞术(FCM)分析小鼠脾脏细胞中Th17细胞的比例。采用qRT-PCR检测小鼠脾脏细胞中IL-17 mRNA水平。结果:EAT小鼠脾脏细胞中Th17细胞的比例为(2.44±0.56)%,明显高于正常对照组小鼠(1.12±0.37)%(t=2.712,P<0.05);EAT小鼠脾脏细胞中IL-17 mRNA的含量也明显高于正常对照组(t=3.458,P<0.05)。结论:Th17细胞及其相关细胞因子IL-17 mRNA水平在EAT小鼠体内明显升高,并与疾病的发生密切相关。

构建急诊肌钙蛋白检测项目的风险管理程序

使用失效模式和效应分析(FMEA)模型确定医学实验室风险管理工作流程和关键环节。根据ISO15189认可准则,识别出实验室急诊肌钙蛋白检测工作流程中关键环节的风险。针对急诊肌钙蛋白检测的评估活动,采取积极的纠正措施,通过检测系统周期性的审核性能数据,可以对急诊肌钙蛋白检测的质量持续改进。

国产化学发光法评估围孕期妇女TORCH感染情况及其IgM假阳性结果的分析

目的探讨苏州地区围孕期女性TORCH感染情况及流行特点,并对TORCH-IgM假阳性检测结果进行分析,为本地区围孕期女性保健提供参考依据。方法回顾性分析、统计2018年6月至2020年9月在南京医科大学附属苏州医院就诊的17984例围孕期女性TORCH检查结果,利用国产化学发光免疫分析法(CLIA)对TORCH的IgG以及IgM抗体进行检测,分析感染率。利用ELISA法对129例TORCH-IgM和IgG抗体双阳性血清进行IgG亲和力检测,分析IgM抗体假阳性结果。结果17984例TORCH检测结果中,IgG抗体阳性率由高到低依次为CMV(97.58%)、HSV-1(89.54%)、RV(78.81%)、HSV-2(10.88%)和TOX(2.83%)。IgM抗体阳性率由高到低依次为CMV(1.22%)、HSV-1(1.18%)、HSV-2(0.77%)、RV(0.57%)和TOX(0.36%),TOX感染阳性率最低,CMV感染阳性率最高。RV、CMV和HSV-1感染模式以IgM^(-)/IgG^(+)为主,TOX和HSV-2主要表现为IgM^(-)/IgG^(-)模式。按照季节统计,HSV-1-IgM在冬季阳性率最高(χ^(2)值8.36,P值0.04),TOX-IgM、RV-IgM、CMV-IgM和HSV-2-IgM各季节阳性率差异无统计学意义(χ^(2)值分别为2.51、4.16、1.84和5.12,P值分别为0.48、0.25、0.61和0.16)。TORCH-IgG抗体阳性率四季差异均无统计学意义。按照年龄分组统计,<35岁组CMV-IgG、HSV-1-IgG和HSV-2-IgG阳性率明显低于≥35岁组(χ^(2)值分别为12.34、15.04和238.36,均P<0.01),低年龄组TOX-IgG感染率明显高于高年龄组(χ^(2)值为10.01,P<0.01),两年龄组间RV-IgG和TORCH-IgM抗体阳性率差异无统计学意义。化学发光免疫分析法检测129例TORCH-IgM和IgG抗体双阳性标本中,仅19例(14.73%)检测结果为IgG低亲和力。结论苏州地区围孕期女性TORCH感染普遍,建议育龄女性孕前进行常规筛查,防止TORCH近期感染,预防出生缺陷。对于TORCH-IgM和IgG抗体双阳性结果可进一步联合IgG亲和力检测,排除TORCH感染假阳性。

四种国产化学发光免疫分析系统检测C-肽和胰岛素的性能验证

目的对四种国产化学发光免疫分析设备(新产业、迈瑞、安图、长光华医,随意标定为A、B、C、D)的配套定量检测试剂盒中C-肽和胰岛素进行性能验证,评价其是否满足本实验室的质量管理要求,同时给其他相关实验室在国产设备使用方面一个参考。方法方法学性能验证。参考美国临床和实验室标准协会(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)文件要求和相关文献,对四种国产设备配套的C-肽和胰岛素进行精密度验证、方法学比对、分析测量范围验证、生物参考范围和携带污染进行验证。结果四种国产化学发光检测系统的C-肽和胰岛素项目的精密度验证结果均符合本实验室质量要求;四种国产检测系统与进口设备测定结果之间的相关性显著(均P <0. 05),相关系数在0. 61～1.0之间;分析测量范围、生物参考区间和携带污染验证结果均符合要求。结论四种国产化学发光设备的C-肽和胰岛素项目的精密度、分析测量范围、生物参考区间和携带污染等基本能满足临床需要,与进口设备检测结果相比较其相关性尚可,但医学决定水平处偏倚可接受性差。

人IL-21 mRNA实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

目的:建立检测人白细胞介素-21(interleukin-21,IL-21)mRNA的实时荧光定量PCR(real-time fluorescencequantitative PCR,qRT-PCR)方法。方法:分离人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC),磁珠分选CD4+细胞,经PHA刺激后提取总RNA并逆转录成cDNA。采用qRT-PCR方法检测IL-21 mRNA的表达水平。评价该方法的特异性,应用该方法检测Graves病患者CD4+T细胞中IL-21 mRNA的相对表达水平。结果:建立了人IL-21 mRNA的实时荧光定量PCR检测方法。该法的熔解曲线为单峰,核酸电泳显示为一特异性条带。Graves病患者CD4+T细胞中IL-21 mRNA的相对表达水平明显高于健康对照组(P<0.001)。结论:建立的检测人IL-21 mRNA的实时荧光定量PCR方法灵敏性、特异性好,为进一步临床应用提供了实验基础。

三种国产化学发光免疫分析仪在性激素检测中的应用价值

目的对三种国产化学发光免疫分析仪(新产业、迈瑞、安图,随机标定为A、B、C)的配套性激素六项[包括孕酮(P)、雌二醇(E_(2))、促黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、泌乳素(PRL)和睾酮(T)]定量检测试剂盒进行应用评价,评价其性能是否符合要求及目前国产化学发光免疫分析仪在性激素检测中的应用价值。方法对三种国产仪器的配套性激素六项定量检测试剂盒进行精密度验证、方法学比对、分析测量范围验证、参考范围验证(除PRL和T外,其余4项验证人群为男性),其中方法学比对参考CLSI EP9-A3方案,参考系统为实验室在用的进口仪器(Beckman Coulter DXI800)及其配套试剂。结果 A仪器的P、E_(2)、LH、FSH、PRL和T,B仪器的LH、FSH和PRL,C仪器的E_(2)、LH和PRL项目的精密度验证结果均符合要求;A、B、C仪器与进口仪器的检测结果之间的相关系数分别为0.76~0.99、0.89~0.99、0.82~0.98,P<0.05;三种仪器的分析测量范围验证结果均符合要求;A、C仪器的P、E_(2)、LH、FSH、PRL(女)、T的参考范围验证均通过,B仪器的P、E_(2)、LH、FSH、T的参考范围验证通过。结论三种国产化学发光免疫分析仪性激素六项检测的精密度、线性范围基本符合临床需要,P、E_(2)、LH、FSH和T的参考范围与厂家声明相符,与进口仪器之间的相关性显著,但医学决定水平处偏移可接受性差。

龙鹿丸治疗男性不育伴特发性少、弱精子症疗效

目的:观察龙鹿丸治疗特发性少、弱精子症患者的有效性。方法:将少、弱精子症患者130例分为治疗组(78例)和对照组(52例),治疗组予龙鹿丸口服3个月,1次5粒,每日2次。对照组不予药物干预仅行辅助生殖。治疗后第4、8、12周记录中医症状评分精液质量,第12周测定血清性激素水平。结果:治疗组治疗8周后,中医症状主要(6.2±1.5分)、次要(4.0±1.2分)评分均较治疗前(10.6±2.1分、7.0±2.7分)下降(P<0.05);治疗12周后,精液量(3.23±0.72ml)较治疗前(2.14±1.41ml)提高(P<0.05);治疗4周后,精子浓度(18.16±5.56×10^6/ml)和前向运动精子百分率(24.78±9.72%)较治疗前(12.35±4.48×10^6/ml、19.63±7.05%)增加,且随着治疗时间的延长,改善效果更明显(P<0.05);治疗12周后,血清睾酮水平(5.67±1.18 ng/ml)较治疗前(3.39±0.70ng/ml)升高(P<0.05)。结论:龙鹿丸能明显提高少、弱精子症患者的精液质量,未见明显副作用。

小鼠CCL20 mRNA实时荧光定量PCR检测方法的建立

目的:建立检测小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20(CC chemokine ligand 20)mRNA的实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)的方法。方法:分离小鼠脂肪组织细胞,经PMA和离子霉素刺激4 h后收集细胞提取总RNA并逆转录为cDNA。采用qRT-PCR方法检测趋化因子CCL20 mRNA的表达水平。评价该方法的特异性,同时应用该方法检测小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20mRNA相对表达水平。结果:建立了小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20的SYBR Green实时荧光定量PCR检测方法,结果显示该方法的熔解曲线为单峰,同时核酸电泳显示一条特异性条带。检测结果表明高脂饮食诱导的肥胖小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20的相对表达水平明显高于正常饮食对照组(t=3.02,P<0.05)。结论:建立了检测小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20 mRNA的实时荧光定量PCR方法,特异性好、灵敏性强,为进一步研究小鼠CCL20的生物学功能提供了实验基础。

自建检测系统与罗氏Cobas 8000检测系统检测部分生化项目的一致性评价

目的评价迈瑞BS-430全自动生化分析仪自建检测系统(简称自建检测系统)与罗氏Cobas 8000全自动生化分析仪检测系统(简称罗氏Cobas 8000检测系统)部分生化项目检测结果的一致性,为不同检测系统结果互认提供依据。方法根据美国临床和实验室标准协会(CLSI)EP09-A3文件,选取至少100例覆盖线性范围临床血清样本,以罗氏Cobas 8000检测系统为参比方法,以自建检测系统为实验方法,使用两种方法对丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白(Alb)、总蛋白(TP)、γ-谷氨酰基转移酶(GGT)分别进行单次检测。绘制散点图目测离群值,使用ESD法进一步确认离群值点。根据数值偏移图、百分比偏移图、排序偏移图和百分比排序偏移图的特征选择最优的回归模型拟合回归方程,计算医学决定水平处的偏移,以1/2允许总误差(TEa)为可接受标准。结果两种检测系统间ALT、AST、Alb、TP、GGT均有相关性(相关系数分别为0.989,0.997,0.993,0.951,0.998,均P<0.001),通过绘制散点图目测发现5个项目均有离群值,使用ESD法进一步确认为离群值点后,剔除,并补足100个数据。选取合适的回归分析拟合,计算医学决定水平处偏移分别为ALT(2.89%~6.47%)、AST(2.56%~7.71%)、Alb(-1.41%~1.18%)、TP(-19.42%^-10.76%)、GGT(-2.52%^-1.30%)。结论深圳迈瑞BS-430全自动生化分析仪自建检测系统与罗氏Cobas 8000全自动生化分析仪检测系统检测ALT、AST(中、高水平)、Alb、GGT具有可比性,AST低水平(20U/L以下)和TP检测结果不具有可比性。

四种国产化学发光免疫分析法和电化学发光免疫分析法检测血清总前列腺特异性抗原的可比性

目的研究4种国产化学发光免疫分析法和Roche电化学发光免疫分析法在总前列腺特异性抗原（tPSA）检测上的可比性。方法收集45份临床血清样本，选取新产业生物医学工程股份有限公司、迈瑞生物医疗电子股份有限公司、安图生物工程股份有限公司、长光华医生物医药工程有限公司生产的4种国产化学发光免疫分析系统和Roche电化学发光免疫分析系统（分别简称新产业、迈瑞、安图、长光华医和Roche）共同测定其中的tPSA含量，评价5种检测方法的精密度，并将4种国产方法分别与Roche的方法进行比较。采用Wilcoxon符号秩检验和Spearman秩相关进行数据处理。结果5种方法精密度良好。Roche、新产业、迈瑞、安图、长光华医测得的tPSA含量分别为14.11（9.92, 36.09）、12.00（8.56, 27.23）、12.10（8.60, 29.87）、13.35（9.51, 32.85）、14.50（9.88, 40.06） μg/L。Roche所测结果与新产业、迈瑞、安图、长光华医测得的结果均有相关性（rs值：0.992、0.989、0.957、0.983，均P〈0.001）。将tPSA医学决定水平4.0 μg/L代入回归方程，得到Roche与新产业、迈瑞、安图、长光华医检测结果的偏差分别为－10.88%、－18.07%、0.23%、22.31%。结论不同国产化学发光免疫分析法与Roche电化学发光免疫分析法在tPSA检测结果的可比性上存在较大差异，这可为后续国产化学发光免疫分析系统检测结果的临床应用和标准化提供参考。

两种化学发光检测系统测量不确定度的合成与评估

目的 使用不同方法对2种化学发光检测系统的测量不确定度进行合成和评估。方法 以临床样本批内CV（CVW%）、批间CV（CVB%）、偏倚不确定度（CVBias%）和校准不确定度（CVcal%）为分量，选择4种合成方法对美国Abbott公司的Architect i2000SR检测系统和美国Backman公司的DXI800检测系统的不确定度进行评估。第1种方法以CVW%、CVB%和CVBias%为分量合成U1%，第2种方法以CVB%、CVcal%为分量合成U2%，第3种方法以CVW%、CVB%和CVcal%为分量合成U3%，第4种方法以CVW%、CVB%、CVBias%和CVcal%为分量合成U4%。采用Pearson和Spearman相关分析、配对t检验及Mann-Whitney u检验进行统计学分析。结果 对于Architect i2000SR检测系统，U1%、U2%、U3%和U4%均相关（r＝0.727～0.988，均P〈0.05），U3%与U2%差别有统计学意义（t＝6.88，P〈0.05），U4%与U1%差别有统计学意义（t＝6.21，P〈0.05）；其检测项目的扩展不确定度与CVW%、CVB%、CVBias%和CVcal%均有良好的相关性。按同样方法评估DXI800系统，U1%、U2%、U3%和U4%均相关（r＝0.608～0.975，均P〈0.05），U3%与U2%差别无统计学意义（z＝－1.33，P〉0.05），U4%与U1%差别无统计学意义（z＝－1.04，P〉0.05）；其检测项目的扩展不确定度与CVW%、CVB%和CVBias%分量相关（rs＝0.653～0.912，均P〈0.05），而与CVcal%无相关性（rs＝0.548，P〉0.05）。结论 对于Architect i2000SR检测系统，宜使用第4种方法合成不确定度，对于DXI800检测系统使用第1种方法合成不确定度更为合适；根据不同分量对测量不确定度的贡献大小，可以通过降低不精密度和偏倚，为相关检测工作的质量改进提供科学依据。

四种国产化学发光免疫分析设备检测八项肿瘤标志物的性能验证评价

目的对4种国产化学发光免疫分析(CLIA)设备的配套定量检测试剂盒中的8项肿瘤标志物的检测结果进行性能验证。方法将4种国产CLIA设备厂家随机标为A、B、C、D,8项肿瘤标志包括糖类抗原(CA)125、CA15-3、CA19-9、铁蛋白(Fer)、甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、前列腺特异抗原(PSA)及游离前列腺特异抗原(fPSA)。参考美国临床实验室标准化协会(CLSI)文件要求,对4种国产设备配套的8项肿瘤标志物进行精密度验证、方法学比对、分析测量范围验证。样本来源于苏州医院就诊患者血清。其中方法学比对实验参考CLSIEP9-A3方案,参考系统为配套进口检测系统,评价国产设备与进口设备检测结果的可比性。拟合并计算医学决定水平处的偏移,采用Pearson相关与Spearman秩相关分析数据。结果A检测系统的CA125和PSA,B检测系统的CA125和AFP,C检测系统的CA125、CEA、AFP和PSA和D检测系统的8个项目的精密度验证结果符合本实验室质量要求;A^D系统与进口设备测定结果间明显相关,相关系数分别为0.79~0.99、0.47~0.99、0.90~0.98、0.78~1.00(均P<0.05),医学决定水平处百分偏移可接受项目数量分别为5、2、5、4项;所有项目分析测量范围验证结果均符合要求。结论4种国产CLIA设备对肿瘤标志物检测性能有所差异,实验室在选用国产CLIA设备时应进行验证,并选择满足实验室质量要求的设备和检测项目。