黄酮类单体抗奥密克戎毒株药理活性研究

目的探讨黄酮类单体化合物抗新型冠状病毒的药理活性及作用机制。方法利用Autodock Vina分子对接软件将橙皮素、橙皮苷、芹菜苷、木犀草素、木犀草素-4’-葡萄糖苷对接到新型冠状病毒RNA聚合酶三维结构7BV2的底物结合位点处,研究化合物分子与靶酶活性位点之间的相互作用;并利用奥密克戎毒株转染的Vero细胞模型测试这些黄酮类化合物单体的抗病毒活性。结果橙皮素、橙皮苷、芹菜苷、木犀草素、木犀草素-4’-葡萄糖苷均可竞争性地结合于靶酶7BV2的底物进入通道处从而阻碍正常的核苷酸类底物进入,故可对靶酶执行的核酸复制生物学功能起到抑制作用;初步细胞水平抗病毒活性测试实验发现橙皮素和木犀草素具有明显地抑制奥密克戎毒株核酸复制的药理作用,而橙皮苷、芹菜苷、木犀草素-4’-葡萄糖苷抗病毒活性较弱。结论经初步实验发现,橙皮素和木犀草素具有一定的抗新型冠状病毒及其变异株的药理活性,可作为先导化合物行进一步开发,实验数据可为抗新型冠状病毒药物开发提供一定参考。

国产盐酸托莫西汀胶囊在健康人体的生物等效性

目的建立人血浆中托莫西汀浓度的HPLC-MS/MS测定方法,研究国产盐酸托莫西汀胶囊在中国健康男性志愿者的主要药动学参数及与参比制剂的生物等效性。方法采用两试剂双周期交叉试验设计,24名健康受试者分别单剂量口服受试制剂和参比制剂20mg,采用LC-MS/MS法测定血浆中托莫西汀的浓度,DAS 2.1.1软件计算药动学参数并考察生物等效性。结果受试制剂和参比制剂在受试者体内的药动学参数如下:Cmax分别为(232.5±86.9)和(222.8±101.1)ng/ml;tmax分别为(1.17±1.14)和(1.27±1.09)h;t1/2分别为(3.55±1.33)和(3.38±1.2)h;AUC0-t分别为(1 610±1 329)和(1 575±1 301)ng·ml-1·h-1;AUC0-∞分别为(1 683±1 466)和(1 634±1 392)ng·ml-1·h-1;受试制剂对参比制剂的相对生物利用度为(104.9±14.3)%。结论两制剂具有生物等效性。

TFF3、COX-2、HIF-1α在不同胃黏膜病变中的表达意义及与MVD值的相关性研究

目的研究三叶因子3(TFF3)、环氧合酶-2(COX-2)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在不同胃黏膜病变中的表达意义及胃癌患者TFF3、COX-2、HIF-1α表达、微血管密度(MVD)的相关性比较。方法选取医院存储的行胃镜活检或胃癌根治术后蜡块标本150例,根据胃癌前不同病变期分为胃腺瘤组(B组,30例)、萎缩性胃炎伴肠化生组(C组,30例)、非典型增生组(D组,30例)、胃癌组(E组,30例),同期选取正常胃黏膜组(A组,30例)进行比较。结果无浆膜浸润、无淋巴转移、胃癌早期患者MVD值和TFF3、COX-2、HIF-1α表达阳性比率低于有浆膜浸润、有淋巴转移、胃癌进展期患者(P<0.05);高中分化癌患者MVD值和TFF3、COX-2、HIF-1α表达阳性比率与低分化癌患者无显著差异(P>0.05);TFF3、COX-2、HIF-1α表达阳性患者的MVD值显著高于TFF3、COX-2、HIF-1α表达阴性患者(P<0.05)。结论TFF3、COX-2、HIF-1α参与胃癌及癌前各期变化过程,TFF3、COX-2、HIF-1α、MVD对胃癌早期诊断具有重要意义,也是作为防治治疗胃癌的一个突破点,能否通过TFF3、COX-2、HIF-1α检测值对早期胃癌进行对应治疗,仍需临床医师深入研究。

孕酮对Aβ_(25-35)诱导的阿尔采末病模型神经元凋亡的影响

目的研究神经甾体孕酮(PROG)对Aβ25-35诱导的AD模型神经元凋亡的影响。方法将原代培养的大鼠皮质神经元分为对照组、模型组及3个浓度PROG处理组。采用四甲基偶氮唑(MTT)法检测细胞存活率,Hoechest 33342核染色法检测神经元凋亡,Western blot检测胞质caspase-3蛋白表达水平。结果与模型组比较,PROG能剂量依赖地对抗Aβ25-35引起的大鼠神经元存活率的降低;且细胞凋亡率及胞质caspase-3表达水平均降低,细胞凋亡率分别为(53.0±4.2)%(P>0.05)、(31.8±2.1)%(P<0.01)和(11.8±1.2)%(P<0.01),caspase-3表达水平分别为(5.80±0.27)(P>0.05)、(4.98±0.48)(P<0.01)和(3.58±0.21)(P<0.01);其中0.1μmol.L-1 PROG处理组的细胞凋亡率及胞质caspase-3表达水平均与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PROG能通过抑制神经元凋亡对抗Aβ诱导的神经元损伤,产生保护作用。

Aβ_(25-35)对原代培养大鼠皮质神经元的损伤作用

目的考察Aβ25-35对原代培养大鼠皮质神经元的损伤作用。方法将原代培养的大鼠皮质神经元分为对照组、谷氨酸(glutamate,Glu)组及3个浓度的Aβ25-35组,每组各6孔。观察神经元的形态改变,并测定细胞存活率及培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的活力值。结果与对照组比较,Glu组可造成大鼠皮质神经元明显损伤,形态发生显著改变,细胞存活率为(53.1±5.5)%(P<0.01),并且培养液中LDH漏出显著增多,LDH的活力值为(39.9±2.9)U/gProt(P<0.01);Aβ25-35三个剂量组神经元存活率均显著降低,分别为(69.3±5.9)%(P<0.01)、(52.7±3.0)%(P<0.01)和(33.2±1.8)%(P<0.01),Aβ25-35低、中剂量组培养液中LDH漏出未见明显改变,LDH活力值分别为(23.5±1.4)U/gProt和(24.7±1.3)U/gProt(P>0.05),Aβ25-35高剂量组培养液中LDH漏出显著升高,LDH活力值为(38.8±2.0)U/gProt(P<0.01),与Glu组相当(P>0.05)。结论 Aβ25-35能剂量依赖性地损伤皮质神经元,1μmol/LAβ25-35剂量组处理24h后细胞存活率可降低50%左右,可用于Aβ25-35体外诱导阿尔茨海默病细胞模型的建立。

基于分子对接方法的木犀草素和罗汉松脂素与p38α激酶的分子作用机制研究

目的:研究络石藤中化合物木犀草素和罗汉松脂素与p38α之间的分子相互作用机制。方法:以p38α激酶抑制剂SB-203580、BIRB-796为阳性对照化合物,利用分子对接技术研究木犀草素和罗汉松脂素与p38α激酶在三维空间上的相互作用。结果:所有化合物均以非共价键方式与靶酶活性位点结合,形成生氢键、疏水等相互作用。SB-203580与p38α激酶的对接结合能为-9.0 kcal·mol^(-1),BIRB-796的对接能量为-11.0 kcal·mol^(-1),木犀草素对接能量-8.8 kcal·mol^(-1),罗汉松脂素对接能量为-8.2 kcal·mol^(-1),木犀草素、罗汉松脂素与p38α激酶活性位点处的结合强度与SB-203580相近,两者可竞争性阻碍该靶酶活性位点与腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)的结合从而抑制该靶酶上调炎症因子水平的生物学活性。结论:木犀草素和罗汉松脂素应该是络石藤中抗风湿作用的活性代表成分,从分子间相互作用层面证实两者可抑制p38α激酶生物学活性从而起到抗炎作用,也给新型p38α激酶抑制剂的研发提供参考。

络石藤中3个化合物与P38αMAPK靶酶的分子对接研究

目的研究络石藤中牛蒡子苷、牛蒡子苷元和络石苷元B与靶标P38αMAPK之间的相互作用模式。方法以P38αMAPK抑制剂SB-203580、BIRB-796为阳性参照配体,运用分子对接软件Autodock Vina探究牛蒡子苷、牛蒡子苷元及络石苷元B与P38αMAPK的分子间相互作用。结果试验中的配体均以非共价键方式与P38αMAPK活性位点结合,产生氢键、疏水相互作用等。牛蒡子苷、牛蒡子苷元、络石苷元B与P38αMAPK对接产生的结合能分别为-8.0、-8.3、-4.4 kcal·mol^(-1),表明三者中牛蒡子苷元与靶酶活性位点处的结合能力最强,牛蒡子苷次之,络石苷元B结合能力最弱。结论推测牛蒡子苷和牛蒡子苷元为P38αMAPK靶酶的竞争性抑制剂,络石苷元B不是P38αMAPK激酶的抑制剂。牛蒡子苷和牛蒡子苷元应该是络石藤中抗风湿作用的活性代表成分。

以人脐带间充质干细胞为种子细胞促进脂肪移植存活率的研究

目的本实验将具有多向分化潜能的人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)作为种子细胞,诱导分化为组织工程脂肪,探讨其在脂肪移植中提高脂肪存活率的能力。方法选取健康雄性BALB/c裸鼠30只,随机分为7、14、28 d组,每组10只;选取健康雄性SD大鼠10只,脱椎处死后按照常规方法提取肠系膜、腹股沟处脂肪颗粒。培养hUC-MSCs并进行成脂诱导后混合大鼠脂肪颗粒移植于3组裸鼠左侧腹部筋膜下作为实验侧,将相同剂量的单纯脂肪颗粒移植于右侧腹部筋膜下作为对照侧。移植后对3组裸鼠的移植脂肪进行组织病理学检测,并比较移植脂肪组织的质量维持率。结果7、14及28 d组裸鼠间,实验侧移植脂肪组织质量维持率逐渐降低(F=58.47,P<0.05),对照侧移植脂肪组织质量维持率也逐渐降低(F=225.28,P<0.05);在3组裸鼠中,实验侧移植脂肪组织质量维持率均显著高于对照侧(F=1490.66~2142.95,P<0.05)。结论hUC-MSCs来源的脂肪细胞与天然的脂肪细胞颗粒混合后移植可以有效提高移植后脂肪细胞的存活率。本研究为以hUC-MSCs作为种子细胞的组织工程脂肪在脂肪移植中的应用奠定了实验基础。

气血双补酊剂HPLC指纹图谱及含量测定（英文）

目的:采用HPLC-DAD方法,对气血双补酊剂进行指纹图谱分析和10种活性成分同时测定来进行质量控制。方法:通过优化提取、分离和分析条件,采用Merck C18色谱柱,流动相乙腈-0.1%磷酸水溶液,波长203 nm。结果:通过分析10批样品指纹图谱,确立了32个共有峰作为特征峰来进行评价,10批样品相似度高,10种活性成分含量同时测定的结果稳定可靠。结论:该多成分含量测定的方法,结合色谱指纹图谱分析,具有实际应用,可以全面对气血双补酊剂进行质量进行控制。

孕酮及别孕烯醇酮对Aβ_(25-35)诱导的神经元损伤作用的影响

目的:研究孕酮及别孕烯醇酮对Aβ25-35诱导的神经元损伤作用的影响。方法:采用Aβ25-35(1μmol.L-1)处理原代培养的大鼠大脑皮质神经元建立损伤模型,另分别加入不同浓度孕酮及别孕烯醇酮与Aβ25-35共孵育24h,观察神经元的形态学变化并测定存活率(MTT法)。结果:与模型组比较,孕酮共孵育组神经元生存状况明显改善,神经元存活率浓度依赖性地升高(r=0.757,P<0.01),高剂量组的存活率为(100.7±7.9)%,与对照组比较无统计学差异(P>0.05);别孕烯醇酮共孵育组神经元生存状况与模型组比较无明显改善,神经元存活率呈浓度依赖性降低(r=-0.841,P<0.01)。结论:神经甾体孕酮能浓度依赖性地抑制Aβ25-35诱导的神经毒性作用,提高细胞存活率;孕酮的代谢物别孕烯醇酮不能对抗Aβ25-35引起的神经元损伤,并浓度依赖性地加重上述损伤任用。