凋亡诱导因子在慢性氟中毒大鼠脑组织神经细胞凋亡中的作用

目的了解凋亡诱导因子（apoptosis—inducing factor，AIF）介导的非凋亡经典途径在慢性氟中毒大鼠大脑神经细胞凋亡过程中的作用。方法清洁级SD大鼠60只，体质量100～120g，按体质量采用随机数字表法分为对照组与染氟组，每组30只，雌雄各半，均饲以标准营养动物饲料（含氟量〈0．5mg／kg）。对照组自由饮用自来水（含氟量〈0．5mg／L）；染氟组自由饮用含氟水，氟含量[用氟化钠（NaF）配制]为50．0mg／L，复制慢性氟中毒大鼠模型。10个月后，采用磷酸盐缓冲液经心脏灌流处死动物，断头并取脑组织备用。采用免疫组织化学方法检测大脑皮质及海马AIF分布；蛋白免疫印迹方法检测脑组织中AIF、具有活性的已剪切的（cl）-caspase-3及cl—caspase-9的蛋白表达水平；流式细胞术检测大鼠脑组织细胞凋亡率。结果免疫组织化学结果：染氟组大鼠海马（CAI．CA2、CA3）及皮质顶叶神经细胞AIF阳性表达（7．50±2．17、9．00±1．63、8．00±0．82、10．24±1．80）明显高于对照组（5．18±1．66、6．27±1．42、6．36±1．96、6．96±2．62），差异有统计学意义（t=2．76、4．09、2．45和5．77，P均〈0．05）。蛋白免疫印迹结果：染氟组大鼠脑组织神经细胞线粒体内AIF的蛋白表达水平[（89．46±8．47）％]明显低于对照组[（100．00±7．12）％，t=3．16，P〈0．01]，而细胞核中AIF的蛋白表达水平[（112．80±7．10）％]明显高于对照组[（100．00±8．20）％，t=3．75，P〈0．01]；染氟组大鼠脑组织神经细胞cl—caspase-3、cl-caspase-9蛋白表达[海马与皮质分别为（132．14±18．66）％、（107．31±2．58）％。（121．33±14．86）％、（112．97±7．97）％]明显高于对照组[（100．00±11．99）％、（100．00±3．74）％，（100．00±16．87）％、（100．00±8．04）％，t=3．55、3．94、2．32、2．81，P〈0．01或〈0．05]。细胞凋亡结果：染氟组大鼠海马与皮质神经细胞凋亡率[（2．55±0．58）％、（3．05±0．65）％]与对照组[（1．28±0．59）％、（1．88±0．25）％]比较显著增高，差异有统计学意义（t=3．08、3．40，P均〈0．05）。结论以AIF为主的非easpase依赖性凋亡途径与通过激活caspase介导的经典途径共同参与慢性氟中毒大鼠脑组织神经细胞凋亡，是慢性氟中毒引起的脑损伤发生机制之一。