2017年～2018年四川省猪δ冠状病毒的检测与遗传进化分析

为调查猪δ冠状病毒(PDCoV)在四川省的流行情况,本研究对2017年~2018年采集的141份仔猪腹泻病料样品经RT-PCR检测,并对检测为PDCoV的两株病毒进行全基因扩增与序列分析。结果显示,PDCoV的阳性率为4.96%(7/141),且PDCoV与猪流行性腹泻病毒的混合感染阳性率为2.84%(4/141)。全基因组序列分析显示两株PDCoV之间的同源性为99.3%,与其它PDCoV病毒株间的同源性为97.6%~99.0%。两株PDCoV均与越南和泰国PDCoV株的同源性最低,而之前发现的四川PDCoVCH/Sichuan/S27株与越南和泰国病毒株有较高的同源性。两株PDCoV的全基因组中均有部分碱基的插入或缺失,包括ORF1ab基因中的9 nt插入和S基因中的3 nt缺失,以及在3’UTR区域的11 nt缺失。遗传进化树分析显示,PDCoV呈现出明显的地域特征,同时中国PDCoV株呈现出4个小分支,其中两个新PDCoV株与CH/Sichuan/S27位于不同分支,表明PDCoV的基因存在多样性。本研究丰富了PDCoV在中国的分子流行特征及其遗传进化规律,为后续PDCoV的病毒学研究提供参考。

非典型性瘟病毒SYBR Green Ⅱ荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

为建立一种快速检测猪非典型性瘟病毒(APPV)的方法,本实验建立了APPV SYBR Green Ⅱ荧光定量RT-PCR检测方法。该方法特异性试验结果显示,除APPV外,猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪流行性腹泻病毒和猪轮状病毒等常见猪病病原检测均为阴性,表明其特异性良好;该方法最低检测限为2.8×10~3拷贝/μL,敏感性较高;重复性试验的组内、组间变异系数均小于1%。利用该方法对临床56份来自四川各地的临床病料样品进行检测,检出5份阳性样品,且与常规PCR检测方法的阳性符合率为100%。本研究建立的APPV荧光定量RT-PCR检测方法为APPV临床检出以及后期并发症的研究奠定了基础。

金黄色葡萄球菌和猪链球菌混合感染引发的脑膜炎

金黄色葡萄球菌广泛分布于自然界，同时也存在于人和动物的体表、鼻腔、消化道等部位，是一类条件性致病菌。金黄色葡萄球菌可引起人和动物各种急、慢性感染，包括尿道炎、脊髓炎、心肌炎、肺炎、脑膜炎、肠炎、乳腺炎、败血症等。该菌在侵入机体后分泌多种毒力因子，如溶血素、杀白细胞毒素.

观察与数学教学

从观察与知识的形成、深化，观察与问题解决两个方面，论述了观察在数学教学中的积极作用。并给出提高观察能力的若干措施。

一种免疫调节肽的小鼠经口急性毒性试验

试验采用急性毒性试验的限量法,将54只小鼠随机分为3组,Ⅰ、Ⅱ组为试验组,Ⅲ组为对照组。试验组Ⅰ、Ⅱ分别灌胃剂量200和400 mg/kg的免疫调节肽,对照组灌胃等量蒸馏水。结果表明,各试验组小鼠眼部、鼻孔、皮肤等器官均未出现临床中毒症状,经解剖观察发现各内脏器官生长发育正常,均无大体解剖病理变化,各试验组公鼠的生长性能以及小鼠血常规指标、血清生化指标和脏器系数与对照组相比均无显著差异(P>0.05);2个试验组母鼠末重、平均日增重显著高于对照组(P<0.05),各组小鼠始重、平均日采食量和料重比差异均不显著(P>0.05)。由此可见,该试验所用免疫调节肽对小鼠无急性毒性作用。

2018-2019年四川省伪狂犬病毒的流行病学调查及gC、gE、TK基因遗传进化分析

【背景】伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)是养猪生产中的一类重要病原,自2011年以来,我国接种了Bartha-K61疫苗的养殖场暴发了大规模的伪狂犬病疫情。【目的】调查目前四川省PRV的流行病学以及毒株的遗传进化,对2018-2019年从86个猪场收集的384份疑似PRV感染样本进行病原学检测。【方法】根据PRV-g E基因检测引物对采集的384份样品进行PCR扩增,并对不同季节、不同地区的PRV阳性率进行统计,将PRV感染与临床症状的相关性进行统计学分析。选择部分PRV阳性样本在BHK-21细胞上进行病毒的分离,随后进行分离毒株的g C、g E、TK基因的遗传进化分析。【结果】PRV阳性猪只的比率为9.9%(38/384);阳性猪场比率为16.3%(14/86);流产母猪的PRV阳性率为32.1%(27/84);种公猪阳性率为2.0%(4/198);神经症状猪的PRV阳性率为11.4%(4/35);呼吸症状猪的PRV阳性率为4.5%(3/67)。统计学分析表明,PRV感染与母猪和公猪繁殖障碍症状相关(P<0.01)。其中,冬季(12月、1月、2月)PRV阳性率最高,约为33.0%(31/94);春季(3月、4月、5月)的阳性率为9.1%(3/33);夏季和秋季的阳性率分别约为1.5%(2/130)和1.6%(2/127)。在2018-2019年共分离出3株PRV毒株,分别命名为PRV-SN、PRV-DJY、PRV-CD。PRV-XJ为本实验室2016年在四川省分离的一株毒株,为了了解毒株的遗传进化信息,先后扩增了这4个毒株的g C、g E、TK基因。序列比对表明四川分离株与国内株相似,存在额外的零星性突变和缺失。【结论】养殖场仍应加强对种猪群中伪狂犬病的净化。