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裂殖酵母Shelterin五元复合物的电镜结构研究
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作者 鲁彦伽 孙虹 +1 位作者 吴振芳 雷鸣 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期290-297,共8页
目的·通过电子显微镜(电镜)和负染技术分析裂殖酵母端粒结合蛋白质Shelterin五元复合物(Rap1-Poz1-Tpz1-Ccq1-Pot1)的三维结构。方法·利用大肠埃希菌表达系统在体外重组和表达带有组氨酸-小分子泛素相关修饰物蛋白(histidine-... 目的·通过电子显微镜(电镜)和负染技术分析裂殖酵母端粒结合蛋白质Shelterin五元复合物(Rap1-Poz1-Tpz1-Ccq1-Pot1)的三维结构。方法·利用大肠埃希菌表达系统在体外重组和表达带有组氨酸-小分子泛素相关修饰物蛋白(histidine-small ubiquitin related modifier,His-SUMO)和谷胱甘肽巯基转移酶(glutathione S-transferase,GST)纯化标签的目的蛋白质,通过两步亲和层析(镍离子金属螯合亲和层析、谷胱甘肽琼脂糖凝胶亲和层析)以及一步凝胶过滤层析(SuperoseTM610/300 GL)分离纯化目的蛋白质复合物。采用0.75%甲酸双氧铀对蛋白质样品进行染色,用120 kV透射电镜观察,放大倍数设置为92000倍,收集颗粒分散性较好的负染照片。用EMAN2软件和Relion3.0软件,通过单颗粒重构技术研究裂殖酵母Shelterin复合物的三维结构,最后利用UCSF Chimera软件对裂殖酵母Shelterin复合物的重构模型进行分析。结果·经过两步亲和层析以及凝胶过滤层析获得纯度高、组分齐、均一性良好的重组裂殖酵母Shelterin五元复合物的蛋白质样品;利用120 kV透射电镜获得负染电镜照片83张,从中挑选18659个蛋白质复合物颗粒进行三维模型构建,初步解析了该复合物的三维结构;将重构模型与已报道的蛋白质组分的高分辨率结构进行分子对接,确定各组分在复合物中的定位情况,揭示该复合物以二聚体的形式存在。结论·构建了裂殖酵母Shelterin五元复合物(Rap1-Poz1-Tpz1-Ccq1-Pot1)的低分辨率的三维模型。 展开更多
关键词 端粒 端粒末端保护 Shelterin复合物 电子显微镜 负染
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Structural and functional insights into R-loop prevention and m RNA export by budding yeast THO-Sub2 complex
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作者 Cong Chen Ming Tan +9 位作者 Zhenfang Wu Yuebin Zhang Fanyang He Yanjia Lu Shaobai Li Mi Cao Guohui Li Jian Wu Hong Cheng Ming Lei 《Science Bulletin》 SCIE EI CSCD 2021年第23期2347-2352,共6页
During eukaryotic transcription,the nascent RNA molecules are processed and packed into RNA-protein particles,termed messenger ribonucleoparticles(mRNPs)[1].Precise mRNP assembly is essential for efficient messenger R... During eukaryotic transcription,the nascent RNA molecules are processed and packed into RNA-protein particles,termed messenger ribonucleoparticles(mRNPs)[1].Precise mRNP assembly is essential for efficient messenger RNA(mRNA)processing and export[2].A conserved protein complex called TREX(transcription export complex)plays an important role in mRNP biogenesis[3-6]. 展开更多
关键词 酿酒酵母 转录过程 免疫荧光 分子动力学模拟
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