热休克蛋白72重组腺病毒包装及其对细胞凋亡的影响

目的包装热休克蛋白72重组腺病毒表达载体,探讨其对ECV304细胞凋亡的影响。方法采用细菌同源重组法构建了热休克蛋白72重组腺病毒表达载体;流式细胞仪检测重组腺病毒对细胞凋亡的影响;荧光报告系统和蛋白印迹分析重组腺病毒对p53转录的调节和蛋白表达的影响。结果成功包装了热休克蛋白72重组腺病毒,热休克蛋白72能够促进细胞凋亡,从转录水平上调p53蛋白的表达。结论热休克蛋白72可能通过上调p53蛋白的表达促进细胞凋亡。

血液乙醇浓度检测的两种常用方法与顶空-气相色谱法的比较

目的通过对血醇测量常用方法干式生化法、化学发光法与顶空-气相色谱法进行比较，试图找到它们与气相色谱法之间的差异与联系。方法将干式化学法、化学发光法和顶空-气相色谱法测得的血液中乙醇含量结果进行相关性，差异性以及线性范围评价，同时在抗凝与非抗凝血液标本的检测结果中进行比较。结果干式生化法洲得的血醇含量最大值为271mg／dl，最小值为4mg／dl。化学发光法测得的血醇含量最大值为347．0mg／dl，最小值为0．19mg／dl。顶空-气相色谱法测得血醇含量最大值为327．2mg／dl，最小值为9．3mg／dl。干式生化法和项空-气相色谱法之间的相关性高（r1=0．993），化学发光法与顶空-气相色谱法之间也有较高的相关性（r2=0．992），它们之间线性关系成立，但各种方法测量结果在不同的情况下均存在一定差异。结论干式生化法、化学发光法与顶空-气相色谱法之间虽存在一定差异，但在临床应用中可以相互联系，从而进行比较。

ATP敏感性钾离子通道基因多态性与冠心病的相关分析

目的初步探讨中国汉族人群Kir6.2基因E23K多态性与冠心病(CHD)的关系。方法提取119例CHD患者和101例对照者的基因组DNA,采用PCR-限制性位点多态性(PCR-RSP)方法检测Kir6.2基因E23K多态性分布特点,同时检测各项血脂水平。结果湖北地区汉族人群中普遍存在该位点的基因多态性,在冠心病组中,G等位基因频率高于正常组(63.4%vs.56.9%,P>0.05);A等位基因频率低于正常组(36.6%vs.43.1%,P>0.05),两组间等位基因频率无显著性差异(P>0.05),但携带A等位基因的基因型(GA+AA)与GG基因型频率在两组间存在显著性差异(58.0%vs.71.3%;42.0%vs.28.7%,P=0.040)。结论Kir6.2基因E23K多态性与冠心病之间存在一定的相关性,影响冠心病的及早诊断和治疗。

黄芩苷对慢性应激抑郁模型大鼠海马内神经营养因子及下丘脑-腺垂体-肾上腺轴的影响

目的对黄芩苷的抗抑郁作用进行考察,并对其可能的机制进行探究。方法 SD大鼠随机分为5组:对照组、抑郁模型组、阳性对照组(氟西汀组)和2个剂量的黄芩苷组。模型组给予慢性应激造模,给药组在造模的同时分别给予10 mg/(kg·d)的氟西汀、20 mg/(kg·d)的黄芩苷以及40 mg/(kg·d)的黄芩苷,对照组给予相同体积的生理盐水。5周后,对大鼠的行为学进行考察,并观察海马内脑源性神经营养因子和神经生长因子的表达及下丘脑-腺垂体-肾上腺轴的变化。结果氟西汀和黄芩苷均改善了应激对大鼠行为学的改变,同时也诱导了抑郁模型大鼠海马内脑源性神经营养因子和神经生长因子的表达,缓解了下丘脑-腺垂体-肾上腺轴的紊乱。结论黄芩苷有潜在的抗抑郁作用,其机制可能与对神经营养因子的调节和下丘脑-腺垂体-肾上腺轴的调控有关。

临床生化检验综合性实验开设的初探

临床生物化学检验是一门重要的实验性学科。实验教学是其重要的组成部分,为了从"知识、素质、技能"培养着手,与理论课程教学共同组成合理的教学体系,开设了四个综合性实验。这四个综合性实验将传统的单个基础实验有机整合为综合性实验,加强知识的系统性;强调理论知识、实验操作和临床病例分析的紧密结合;体现现代科技发展的方向和在临床实际中的运用。综合性实验调动了学生学习的积极性和主动性,学生成为实验教学的主体;不仅巩固强化学生的实践动手能力,也培养学生综合分析问题、解决问题的能力;提高学生文献检索能力,引导学生独立思考、鼓励学生勇于创新培养一定的科研思维;培养学生团队协作的精神。

用莲花图检法统计参考值和处理质控资料

以血清高密度脂蛋白胆固醇（ＨＤＬ－Ｃ）为例，介绍一种新的临床统计学方法——莲花图检法（ｌｏｔｕｓｐｌｏｔ，ＬＰ）。这是一种非参数统计法（ｎｏｎ－ｐａｒａｍｅｔｅｒｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ），它用均数、５０百分位数作中位数、２５百分位数到７５百分位数的区间作集中度、５到９５百分位数的区间为９０％的分布范围、２．５到９７．５百分位数的区间作９５％的分布范围以及最大值和最小值等十个数值作图来描述资料的分布，确定参考值和建立质控图。在对男、女各７０例正常人ＨＤＬ－Ｃ处理后，表明ＬＰ法具有准确、简单、形象的特征。

低密度脂蛋白受体基因型检测及其应用

为分析低密度脂蛋白受体基因多态性对血脂水平的影响，用聚合酶链反应—限制片长多态性技术检测了８１例血脂正常者和５１例高胆固醇血症患者的低密度脂蛋白受体、载脂蛋白Ｅ基因型，并测定其血清脂质水平。结果表明“＋”等位基因与高总胆固醇和高低密度脂蛋白胆固醇有关。在同一载脂蛋白Ｅ基因型背景下，低密度脂蛋白受体基因多态性对血脂水平影响模式不变。结果提示，低密度脂蛋白受体基因多态性影响人群的血清胆固醇水平，低密度脂蛋白受体和载脂蛋白Ｅ基因多态性可能是相互独立地影响血脂水平。

胶体金法检测降钙素原诊断儿科感染性疾病的临床性能评价

目的:评价利用胶体金比色法检测标本中降钙素原(PCT)诊断儿科感染性疾病的临床价值。方法:对疑似感染性发热患儿入院时采用半定量胶体金法测定标本中PCT,并同期检测患者标本中C反映蛋白(CRP)、白细胞(WBC)、血沉(ESR),然后追踪该患儿临床表现及其他辅诊资料;利用统计学方法分析对比PCT检测结果与其他检测结果,临床确诊感染类型以及临床最终诊断结果间差异是否有统计学意义。结果:胶体金法检测PCT与CRP、ESR、WBC检测对于儿童细菌感染的鉴别诊断不存在显著性差异(P>0.05);胶体金法检测PCT对于儿科细菌感染性疾病的诊断具有较好的特异性及抗干扰能力;胶体金法检测PCT诊断儿童细菌感染与临床确诊结果比较相符性较好。结论:利用胶体金法检测PCT对于儿童细菌感染具有较好的检测效能,值得临床推广。

母体循环中胎儿游离DNA的定量分析

目的依据孕妇血浆中存在游离胎儿DNA的理论,从孕妇外周血浆中分离出胎儿DNA并加以鉴定,预防X连锁遗传病患儿的出生。方法从孕早期、中期共78名孕妇外周血浆中分离胎儿DNA,用实时荧光定量聚合酶链反应(fluorescence quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)的方法检测其中的Y性别决定区(sex-determining region Y,SRY)基因。结果孕早期怀男胎的孕妇28名,25名SRY基因阳性,其平均浓度为(58.82±25.22)拷贝/ml;孕中期怀男胎的孕妇20名,SRY基因均为阳性,平均为(152.08±62.61)拷贝/ml;怀女胎的孕妇均为阴性。结论用实时荧光定量PCR的方法最早在孕62天的孕妇外周血浆中就可以检测到胎儿SRY基因,随孕周的增加,母血中胎儿DNA的量也在逐渐增加。实时荧光定量PCR技术在进行无创伤性产前性别诊断中有重要的价值。

毛球线粒体DNA的检测及临床应用研究

目的比较肌肉、血液和毛球线粒体DNA(mtDNA)的异质性多态水平,探讨毛球在线粒体相关疾病基因分析中的应用价值。方法收集50名无血缘关系汉族个体的肌肉、血液和毛发标本,采用聚合酶链反应(PCR)扩增mtDNA的高变区Ⅰ(HVⅠ)1603316368bp片段并测序,比较3种不同组织的异质性多态水平。同时采用PCR限制性长度多态性(RFLP)检测3例线粒体脑肌病合并乳酸血症及卒中发作综合征(MELAS)患者的mtDNAtRNAleu基因nt.3243(A→G)突变,比较不同组织的突变检测率。结果肌肉标本异质性检测率为18%(9/50),毛球为16%(8/50),两者较接近,但均明显高于血液的10%检测率(5/50)。3例MELAS患者的肌肉和毛球标本均检出A3243G突变,仅两例患者的血液标本中检出此突变。结论毛球mtDNA的异质性多态水平接近肌肉,高于血液;毛球标本的线粒体点突变检测率高于血液,因此在线粒体相关疾病的基因分析中具有较高的临床应用价值。

2型糖尿病线粒体ND1基因3个新突变位点的分析

目的探讨线粒体DNAtRNALeu(UUR)基因和ND1基因点突变(np3243、3316、3394和3593)与湖北人群2型糖尿病的相关性。方法采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCRRFLP),克隆和测序的分析方法,对184例2型糖尿病患者和210名健康对照进行筛选,并用DNAMAN、Primer、mfold和Antherprot软件对检出的突变位点进行分析和二级结构预测。结果实验组检出3316(G→A)突变6例(3.3%),3394(T→C)突变5例(2.7%),3593(T→C)突变1例(0.5%),并发现3个尚未见报道的新突变位点:3606(A→G)、3618(T→C)和3688(G→C),未检出3243(A→G)突变;对照组只检出3316(G→A)突变1例(0.5%)。两组间仅3394(T→C)突变率差异有统计学意义(P<0.05)。3606(A→G)和3618(T→C)突变分别为亮氨酸、苯丙氨酸的无意义突变,其二级结构均与野生型ND1相同;3316(G→A)突变(丙氨酸→苏氨酸),3394(T→C)突变(酪氨酸→组氨酸),3593(T→C)突变(缬氨酸→丙氨酸),3688(G→C)突变(丙氨酸→脯氨酸),均引起ND1基因DNA和蛋白质二级结构的改变,其中3394(T→C)突变型变化最显著。结论线粒体DNAND1基因3394(T→C)突变以及3688(G→C)突变伴随3316(G→A)突变,可能与2型糖尿病的发生发展有关。

多种方法结合对一个肾单位肾痨患者家系的基因筛查验证

目的:探讨少年型肾单位肾痨1型(NPHP1)的临床特点基因诊断方法,采用多种方法对其家系进行筛查验证。方法:2018年7月我院基因诊断中心收入1例男性肾衰患儿(14岁),收集分析其临床资料,利用二代测序技术对其进行基因检测。确诊后扩增患儿及其父母弟弟的NPHP1基因内多个微卫星标记以及内参标记位点,同时采用琼脂糖凝胶电泳和毛细管电泳技术,对患儿弟弟进行筛查验证。结果:二代测序结果显示该患儿样本NPHP1基因整体纯合缺失,该变异为致病性变异,结合临床表现确诊为NPHP1。琼脂糖凝胶电泳结果显示该患儿NPHP1基因前后内参标记D2S1896,RanBP11/12阳性,微卫星标记del-2,del-5-(5)2,del-9,del-10,del-16均为阴性;该患儿父母和弟弟NPHP1基因内参和微卫星标记均为阳性。内参及微卫星序列的毛细管电泳结果显示该患儿弟弟NPHP1基因同时存在来自于父亲和母亲的序列片段,排除该致病基因的纯合或杂合缺失。结论:利用毛细管电泳技术检测NPHP1基因微卫星标记,判断该位点纯合或杂合性缺失,简单易行,可作为常规筛查手段辅助肾单位肾痨的诊断。

汉族人群载脂蛋白(a)五核苷酸重复序列基因多态性与动脉硬化性脑梗死的关系

目的 研究载脂蛋白 (a) [Apo(a) ]五核苷酸重复序列 (PNR)基因多态性与动脉硬化性脑梗死 (ABI)的关系。方法 1998年 3～ 12月收治的ABI患者 82例 ,男 5 4例 ,女 2 8例 ,平均年龄 6 8岁。健康对照组 15 3名 ,男 86名 ,女 6 7名 ,平均年龄 6 2岁。分别检测血清脂蛋白A [Lp(a) ]、总胆固醇 (TC)、高密度脂蛋白胆固醇 (HDL C)、低密度脂蛋白胆固醇 (LDL C)、甘油三酯 (TG)、载脂蛋白AⅠ(ApoAⅠ )及载脂蛋白B(ApoB)水平。同时采用聚合酶链反应结合高压聚丙烯酰胺凝胶电泳检测Apo(a) 5′调控区五核苷酸重复序列基因的多态性 ,并加以对照分析。结果 ABI患者Lp(a) [(2 40±2 2 5 )mg/L]、TC[(4.7± 0 .7)mmol/L]、TG[(1.7± 0 .6 )mmol/L]和LDL C[(2 .8± 0 .6 )mmol/L]水平明显高于对照组 [(134± 98)mg/L、(4.3± 0 .7)mmol/L、(1.1± 0 .5 )mmol/L和 (2 .8± 0 .6 )mmol/L],HDL C水平 [(0 .9± 0 .2 )mmol/L]明显低于对照组 [(1.0± 0 .4)mmol/L];两组ApoAⅠ [(1.1± 0 .2 )mmol/L ,(1.2± 0 .2 )mmol/L]、ApoB[(0 .9± 0 .1)mmol/L ,(0 .9± 0 .2 )mmol/L]比较 ,差异无显著意义 ;ABI组中重复序列数为 5的等位基因频率 (0 .0 98)明显高于正常对照组 (0 .0 2 6 ) ,重复序列数为 9的等位基因频率 (0 .0 73)

分枝杆菌属基因限制性内切酶谱分析

目的探讨基因限制性内切酶谱分析对分枝杆菌属检出的敏感性、特异性和准确性。并达到快速准确检出结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌属的目的。方法首先以分枝杆菌属公共分子量６５０００抗原蛋白的基因，应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增编码其基因，此基因为各分枝杆菌所共有。扩增产物再分别经ＢｓｔＥⅡ和ＨａｅⅢ限制性内切酶酶切后的图型模式（ＰＲＡ），鉴定临床标本的结核分枝杆菌及非结核性分枝杆菌。结果ＰＲＡ法检测的灵敏度高。检出了２３株分枝杆菌标准菌株，得出特异的基因图谱。结核分枝杆菌复合体的酶切模式有其独特之处。并检测临床标本３２３份，其中痰标本２０６份，胸水４２份，尿液３５份。内切酶确诊结核分枝杆菌的阳性率分别为６７．９％，４８．０％，５．７％。结论对分枝杆菌采用限制性内切酶谱分析，检出结核和非结核分枝杆菌快速准确，并可提高阳性率，降低假阴性。