缺血后适应对大鼠局灶性脑缺血再灌注后谷氨酸的影响

目的:研究缺血后适应对大鼠局灶性脑缺血再灌注后谷氨酸(Glu)浓度变化的影响。方法:建立大鼠大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,将36只雄性SD大鼠随机分为假手术(Sham)组、脑缺血再灌注(I/R)组和缺血后适应(I Postcond)组,每组12只。应用高效液相色谱检测缺血脑组织匀浆Glu浓度。结果:局灶脑缺血再灌注6 h后,I Postcond组Glu浓度相较I/R组明显降低(P<0.01),局灶脑缺血再灌注24 h后,I Postcond组Glu浓度较I/R组低,但两者差异亦无显著性(P>0.05)。结论:本研究表明,I Postcond能够减轻MCAO大鼠模型中I/R损伤。细胞间隙Glu清除的加速可能是其重要保护机制之一。

缺血后适应对局灶性脑缺血再灌注大鼠外周血淋巴细胞DNA损伤的影响

目的研究缺血后适应对局灶性脑缺血再灌注大鼠外周血淋巴细胞DNA损伤的影响。方法30只雄性SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注组和缺血后适应组。建立大鼠大脑中动脉栓塞模型。假手术组线栓插入后立即拔出；脑缺血再灌注组大鼠脑缺血60min后拔出线栓；缺血后适应组大鼠脑缺血60min后，再灌注20S、再缺血20s，反复5次后恢复再灌注。于术后24h、72h进行神经功能评分。应用单细胞凝胶电泳检测大鼠外周血淋巴细胞DNA的损伤情况。结果与假手术组比较，脑缺血再灌注组和缺血后适应组大鼠术后24h、72h神经功能评分明显降低，外周血淋巴细胞DNA单链与双链损伤均明显增加（均P〈0．01）。与脑缺血再灌注组比较，缺血后适应组大鼠术后24h、72h神经功能评分均明显增高，外周血淋巴细胞DNA单链与双链损伤均明显减少（均P〈0．01）。与术后24h比较，脑缺血再灌注组和缺血后适应组大鼠术后72h外周血淋巴细胞DNA单链与双链损伤均明显减少（P〈0．05～0．01）。结论缺血后适应可减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后外周血淋巴细胞DNA的损伤，具有神经保护的作用。

GFP^+小鼠胚胎干细胞移植入脑出血大鼠脑内后存活与分化的研究

目的:研究小鼠胚胎干细胞(mESCs)移植入脑出血大鼠脑内后的存活与分化。方法:将小鼠胚胎干细胞用绿色荧光蛋白(GFP)标记,经G418筛选1个月使其稳定表达,制作大鼠脑出血模型(脑出血组),3 d后移植GFP+小鼠胚胎干细胞至出血灶对侧侧脑室内及健康大鼠(对照组)侧脑室内;4周后处死大鼠,免疫荧光染色后显微镜观察小鼠胚胎干细胞的生长分化情况。结果:小鼠胚胎干细胞脑内移植至大鼠侧脑室后能有效穿透脑室壁进入脑组织,向病灶方向迁徙,脑出血组移植入侧脑室的小鼠胚胎干细胞进入脑实质的数量明显多于对照组(P<0.05),移植细胞向神经元与胶质细胞分化。结论:小鼠胚胎干细胞无论在健康大鼠或脑出血大鼠脑内都能存活,且能穿越脑室壁,进入脑实质内;同时细胞有能力向神经细胞(包括神经元与胶质细胞)分化,具有治疗脑卒中乃至脑变性疾病的巨大前景。

不同剂量依达拉奉对急性脑梗死患者外周血淋巴细胞DNA损伤的影响

目的研究不同剂量依达拉奉对急性脑梗死患者外周血淋巴细胞DNA损伤的影响。方法急性脑梗死患者90例,随机分为3组:观察1组、观察2组和对照组,每组30例。入院后予以常规治疗,观察组在常规治疗基础上每日加用依达拉奉注射液静脉滴注(观察1组:30 mg/d,每日1次;观察2组:30 mg/d,每日2次)。总疗程7d,观察比较3组患者治疗后外周血淋巴细胞损伤和NIHSS评分。结果观察1组、2组治疗后NIHSS评分均低于治疗前(P<0.05),且观察1组、2组患者治疗后的NIHSS评分显著低于对照组(P<0.05)。3组治疗后外周血淋巴细胞DNA损伤均较治疗前减轻(P<0.05)。在中性单细胞凝胶电泳试验中,观察1组和观察2组患者治疗后外周血淋巴细胞DNA损伤均较对照组减轻(P<0.05),且观察2组轻于观察1组(P<0.05);但在碱性单细胞凝胶电泳试验中观察2组与观察1组比较无显著差异(P>0.05)。结论大剂量依达拉奉保护急性脑梗死外周血淋巴细胞DNA损伤效果更显著,对改善脑梗死预后更具意义。

脑梗死体积与外周血淋巴细胞DNA损伤的关系

目的探讨脑梗死体积与外周血淋巴细胞DNA损伤的关系。方法按梗死灶体积将60例急性脑梗死患者分为小、中和大梗死组,每组20例。应用单细胞凝胶电泳(彗星实验)检测各脑梗死组和20名正常对照者(正常对照组)外周血淋巴细胞核尾部DNA的百分比,并进行比较。结果碱性彗星试验中,各脑梗死组的淋巴细胞核尾部DNA百分比显著高于正常对照组(均P<0.01);小、中梗死组淋巴细胞核尾部DNA百分比显著低于大梗死组(均P<0.01)。中性彗星试验中,中梗死组和大梗死组的淋巴细胞核尾部DNA百分比显著高于正常对照组(均P<0.01);大梗死组明显高于小、中梗死组(均P<0.01)。结论脑梗死体积可能可以反映外周血淋巴细胞DNA损伤程度。

小鼠胚胎干细胞移植入成体大鼠脑内的区域特异性存活与分化(英文)

全能区域非特异性的胚胎干细胞是研究成体不同脑区控制干细胞分化能力的十分有力的工具。胚胎干细胞源性神经前体细胞移植入成体脑后可分化为功能性神经元,但是未分化的胚胎干细胞在成体脑内各个部位的存活、生长与分化的潜能差异尚不清楚。本文旨在探讨成体脑组织对胚胎干细胞的影响及胚胎干细胞在成体脑内的一系列行为。将少量转绿色荧光蛋白未分化的小鼠胚胎干细胞移植入成体大鼠脑内不同部位,分别于移植5、14和28 d后处死大鼠,进行形态学观察及免疫组化定性,以了解未分化的小鼠胚胎干细胞在大鼠脑内不同区域的存活、生长与分化。结果发现未分化的小鼠胚胎干细胞可逐步整合入受体组织并向nestin阳性神经前体细胞分化。移植细胞及其后裔在海马生长最为旺盛,而在隔区最差(P<0.01);移植细胞分化为神经干细胞的效率也是在海马最高,而在隔区最低(P<0．01)。提示只有部分脑区适合胚胎干细胞及其后裔生存,并提供促进其分化的有益环境。因此,由于位置特异的微环境因子及环境因素的存在,宿主组织特性对决定中枢神经系统疾病的细胞替代疗法策略是相当重要的。

大鼠局灶脑缺血早期不同脑区神经细胞DNA损伤研究

目的:探讨大鼠局灶脑缺血早期不同脑区神经细胞的DNA损伤特点。方法:建立大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型15只,分别于MCAO后1、3、6 h以断头法各处死5只,分离出额叶、顶叶、海马和尾-壳核脑组织样本进行碱性和中性单细胞凝胶电泳。结果:DNA损伤在缺血1、3 h时分别在尾-壳核和皮质细胞中被检出(P<0.05);随着时间的推移,缺血细胞的DNA损伤越来越重,但皮质细胞的DNA损伤程度一直较尾-壳核轻。DNA双链断裂于缺血3 h时首先在尾-壳核被发现;缺血6 h时扩展到梗死边缘的皮质,此时尾-壳核DNA双链断裂水平并不比皮质高。结论:皮质和尾-壳核存在不同的神经细胞死亡模式,缺血性DNA损伤可能由缺血区向周围组织次级扩散。

医联体背景下脑卒中患者延续护理服务管理模式评价

目的:探讨医联体背景下脑卒中患者延续护理服务管理模式效果并提出相关对策建议。方法:选取医院80例脑卒中患者,采用简单随机抽样将研究对象分试验组(n=40)和对照组(n=40),对照组患者接受常规延续护理,试验组患者接受以医联体主导的延续护理服务。观察两组患者干预前、干预后3个月Barthel指数量表、Fugl-Meyer运动功能评分,出院后3个月的生命质量评分(QOL)、依从性评分及护理体验感情况。结果:干预前,两组患者Barthel指数评分、Fugl-Meyer运动功能和NIHSS评分比较差异无统计学意义(P>0.05);干预后3个月试验组患者在Barthel指数评分、Fugl-Meyer运动功能评分和护理工作体验感方面均高于对照组(P<0.05),QOL各项评分和总分均高于对照组(P<0.05),试验组在服药、锻炼、复诊和饮食方面的依从性分别是对照组的28.83倍、8.14倍、21.00倍和10.23倍。结论:医联体延续护理服务管理模式能为出院患者提供不间断的护理服务,可有效改善患者日常生活能力、肢体运动功能,提高患者治疗依从性,提升患者护理体验感。

Duchenne肌营养不良模型鼠肌肉内移植小鼠胚胎干细胞后分化潜能的初步研究

目的研究Duchenne肌营养不良模型鼠(mdx鼠)局部肌肉内鼠胚胎干细胞(ESCs)移植治疗后,ESCs的分化、肌肉病理改变及dystrophin蛋白表达变化。方法eGFP标记的ESCs局部肌肉注射移植入mdx鼠,4周后观察核内移及dystrophin蛋白表达变化。结果移植后4周mdx鼠核内移改善不明显,dystrophin蛋白阳性表达及肌纤维增加均不明显。结论局部肌肉内胚胎干细胞移植治疗mdx鼠效果不明显。胚胎干细胞移植后分化为骨骼肌细胞的比例低。

突触蛋白-I反义寡核苷酸对体外模拟胚胎干细胞移植治疗脑缺血的影响

目的探讨突触蛋白-I(synapsin-I)在胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESC)移植治疗脑缺血过程中的作用,寻求这一过程的可调控点或调控切入点。方法采用Transwell小室共培养ESC和遭受缺血缺氧打击的已分化PC12细胞,模拟ESC移植迁移的过程,建立ESC移植治疗脑缺血的离体模型。采用Hoechst染色法和流式细胞仪计算ESC的迁移率,然后转染Synapsin-I反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,AS ONs)以抑制ESC的Synapsin-I表达,观察转染后ESC迁移能力的改变。结果未分化ESC的迁移能力明显高于已分化ESC。遭受缺氧缺血打击后的PC12细胞比未遭受缺氧缺血打击的PC12细胞更能吸引ESC的迁移。转染Syn-apsin-I AS ONs后ESC的迁移能力明显降低,转染组与正常组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论在ESC移植治疗脑缺血的离体模型中,ESC的迁移能力受宿主细胞内环境的影响,并可能与ESC自身Synapsin-I的表达水平有关,Synapsin-I可能参与了ESC移植治疗脑缺血过程的调控机制。

小鼠胚胎干细胞在成年大鼠脑内区域特异性生长

目的:探讨小鼠胚胎干细胞(mESC)在成年大鼠大脑内不同部位的存活,生长与分化的差异。方法:将少量mESC移植入成年大鼠脑内不同部位,于移植后5、14和28d后处死大鼠,进行形态学观察及免疫荧光定性。结果:移植的mESC在海马生长最为旺盛,而隔区最差(P<0.01);移植细胞分化为神经干细胞的效率也是海马最高,而隔区最低(P<0.01)。结论:只有部分脑区适合于mESC及其后裔生存并促进其分化,表明了宿主组织特性在细胞移植治疗中具有重要性。

小鼠胚胎干细胞体外向神经干细胞的分化研究

目的 观察无血清培养法诱导小鼠胚胎干细胞(Embryome stem cell,ESCs)ESCs体外分化为神经干细胞(Neural stem cell, NSCs)的诱导效率。方法 采用无血清培养法诱导小鼠ESCs 体外分化为NSCs,对诱导不同时间点的细胞行免疫荧光,RT PCR检测nestin的表达。结果 诱导48 h开始出现nestin mRNA的表达,诱导72 h出现nestin 蛋白表达。诱导120 h nestin 的表达达高峰,阳性细胞率为(70.3±8.02)%。Nestin阳性细胞呈球形生长,可不断增殖。结论 本诱导方法可获得较高纯度的NSCs,所获得的神经干细胞与脑内来源的NSCs有相似的生物学特性。