下调miR-205-5p增强3-溴丙酮酸对人鼻咽癌CNE2Z细胞的凋亡诱导作用

目的探讨下调miR-205-5p对3-溴丙酮酸诱导的鼻咽癌CNE2Z细胞凋亡的影响。方法以鼻咽癌CNE2Z细胞株为研究对象,实验分为4组,分别为对照组、转染组(转染miR-205-5p-mimic或miR-205-5p-inhibitor)、3-溴丙酮酸组(80μmol/L 3-溴丙酮酸)、合用组(转染miR-205-5p-mimic或miR-205-5p-inhibitor后合用3-溴丙酮酸)。MTT法检测3-溴丙酮酸和miR-205-5p对CNE2Z细胞增殖的影响;线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测细胞早期凋亡情况;DAPI荧光染色法检测细胞核形态变化以及细胞晚期凋亡情况;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率的变化;Western blot检测Bcl-2、Bax、Mcl-1、Bak蛋白的表达。结果3-溴丙酮酸对CNE2Z细胞的增殖有明显的抑制作用,并且随着药物浓度和作用时间的增加细胞增殖抑制作用越明显;80μmol/L 3-溴丙酮酸处理CNE2Z细胞24、48、72 h的抑制率分别为(45.7±1.21)%、(64.4±2.02)%、(78.3±1.55)%;转染miR-205-5p-mimic后,80μmol/L 3-溴丙酮酸作用24、48、72 h的抑制率分别为(27.7±1.04)%、(34.8±2.10)%、(44.3±1.57)%;转染miR-205-5p-inhibitor后,80μmol/L 3-溴丙酮酸作用24、48、72 h的抑制率分别为(80.5±0.94)%、(87.9±0.50)%、(93.8±1.16)%。线粒体膜电位检测结果显示,转染miR-205-5p-inhibitor后3-溴丙酮酸组红绿荧光的相对比例明显降低;DAPI荧光检测结果显示,转染miR-205-5p-inhibitor后3-溴丙酮酸组的细胞核碎裂及核固缩明显增加;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测结果显示,转染miR-205-5p-inhibitor后3-溴丙酮酸组的凋亡率明显高于单独处理组的凋亡率(P<0.01);Western blot检测结果显示,转染miR-205-5p-inhibitor后3-溴丙酮酸组的Bcl-2、Mcl-1蛋白的表达水平明显降低,Bax、Bak蛋白的表达水平明显增高。结论3-溴丙酮酸能诱导CNE2Z细胞凋亡,转染miR-205-5p-inhibitor能增强3-溴丙酮酸诱导的细胞凋亡,其机制可能与下调Mcl-1和Bcl-2表达,上调Bak和Bax蛋白的表达有关。

3-溴丙酮酸增强人鼻咽癌细胞对顺铂敏感性的作用及机制研究

目的:探讨3-溴丙酮酸(3-BrPA)增强人鼻咽癌细胞对顺铂敏感性的作用及作用机制。方法:MTT法检测3-BrPA和顺铂对鼻咽癌HNE1细胞增殖的影响。集落克隆形成实验观察3-BrPA和顺铂对HNE1细胞克隆形成能力的影响。线粒体膜电位检测试剂盒分析细胞早期凋亡情况。DAPI荧光染色法检测细胞核形态变化。AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率的变化。ATP检测试剂盒测定细胞内ATP水平的变化。Western blotting检测Bcl-2、Bax、Mcl-1、Bak蛋白的表达。结果:3-BrPA(20、40、80、160、320μmol/L)、顺铂(2、4、8、16、32μmol/L)以及80μmol/L 3-BrPA联合不同浓度顺铂都能明显抑制HNE1细胞的体外增殖活性,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。8μmol/L 3-BrPA+0.8μmol/L顺铂组细胞集落数明显低于3-BrPA、顺铂单独处理组及对照组(P<0.01)。80μmol/L 3-BrPA+8μmol/L顺铂组细胞红色荧光向绿色荧光转变明显;细胞核碎裂及核固缩明显增加;细胞凋亡率明显高于3-BrPA、顺铂单独处理组及对照组(P<0.01);细胞内ATP水平明显低于3-BrPA、顺铂单独处理组及对照组(P<0.01);Bcl-2、Mcl-1蛋白的表达降低,Bax、Bak蛋白的表达增高,与3-BrPA、顺铂单独处理组及对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05~P<0.01)。结论:3-BrPA能诱导HNE1细胞凋亡,并能增强HNE1细胞对顺铂的敏感性,其机制可能与降低细胞内ATP水平以及下调Mcl-1和Bcl-2表达、上调Bak和Bax蛋白的表达有关。

人工智能技术在城镇燃气管道工程管理中的应用研究

城镇燃气管道工程管理中,人工智能技术崭露头角,为传统施工管理注入了创新力。人工智能技术通过智能化施工管理、安全防护智能化、施工质量智能监管等创新应用,实现了施工人员实名挂号、安全防护实时监测、施工质量自动检测等功能。而融合机器学习、知识图谱、自然语言处理等关键支撑技术,则进一步提高了工程管理的智能水平,为城市基础设施建设注入了新的动力。

冬凌草甲素对耐顺铂鼻咽癌细胞株HNE1/DDP凋亡的影响

目的:探讨冬凌草甲素对耐顺铂鼻咽癌细胞株HNE1/DDP凋亡的影响。方法:MTT实验检测冬凌草甲素对HNE1/DDP细胞增殖能力的影响;集落克隆实验检测细胞集落形成能力;DAPI荧光染色法检测HNE1/DDP细胞核形态的变化;PI单染流式细胞术分析细胞的凋亡情况;检测试剂盒测定细胞内ROS的水平;Western blot检测细胞凋亡相关蛋白表达水平。结果:MTT实验结果表明,冬凌草甲素20μmol/L^50μmol/L可显著减弱HNE1/DDP细胞活力,抑制细胞增殖;相比于模型对照组,3μmol/L^5μmol/L的冬凌草甲素对HNE1/DDP细胞的集落形成能力有明显的抑制作用(P <0. 05或P <0. 01);且随着冬凌草甲素给药浓度的增加,细胞核发生明显皱缩,核碎裂增加;细胞内ROS水平明显增加;抑凋亡蛋白Mcl-1、Bcl-2表达明显下调,促凋亡蛋白Bax、Bak表达明显上调(P <0. 05或P <0. 01)。结论:冬凌草甲素能显著抑制耐顺铂鼻咽癌HNE1/DDP细胞的增殖,并诱导其发生凋亡,其作用可能是通过诱导细胞内ROS的产生,对Mcl-1、Bcl-2、Bax、Bak等凋亡相关蛋白进行调控实现的。

下调miR-205-5p增强鼻咽癌细胞HNE1/DDP对顺铂诱导凋亡的敏感性

探讨下调miR-205-5p增强鼻咽癌耐药细胞HNE1/DDP对顺铂诱导凋亡的敏感性及其可能机制。qRT-PCR检测HNE1、HNE1/DDP细胞中miR-205-5p的表达差异及HNE1/DDP细胞转染miR-205-5p抑制剂后miR-205-5p的变化;MTT法检测顺铂(DDP)和miR-205-5p抑制剂对HNE1/DDP或HNE1细胞的增殖抑制作用;PI单染流式技术检测细胞凋亡情况;DAPI染色观察细胞核的形态;Western blot检测Bax、Bak、Mcl-1、Bcl-2蛋白的表达水平。结果显示,相比于HNE1细胞,HNE1/DDP高表达miR-205-5p,转染miR-205-5p抑制剂后其表达明显下降。下调miR-205-5p可显著提高HNE1/DDP细胞对顺铂的敏感性(P<0.05)。PI单染结果显示,转染miR-205-5p抑制剂可增强HNE1/DDP细胞对顺铂的诱导凋亡作用。miR-205-5p抑制剂联合DDP (8μmol·L^-1)作用HNE1/DDP细胞24 h的凋亡率为(28.93±2.50)%,相比单用miR-205-5p抑制剂(9.83±1.31)%或DDP的凋亡率(10.83±1.70)%显著升高(P<0.05)。联合作用组细胞表现为细胞核明显皱缩浓集呈碎片状。miR-205-5p抑制剂与DDP合用能上调Bax的表达和下调Bcl-2的表达。提示下调miR-205-5p可增强HNE1/DDP细胞对DDP的敏感性,其作用机制可能是促凋亡蛋白Bax的升高和抗凋亡蛋白Bcl-2的下降。