Ras相关结构域家族成员5对头颈鳞癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的·探讨Ras相关结构域家族成员5(Ras association domain family 5,RASSF5)对头颈鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)细胞侵袭和迁移能力的影响。方法·通过基因表达谱交互分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA)平台分析癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中563例HNSCC的RASSF5基因的表达情况及其对患者预后生存的影响。通过CMV-MCS-PGK-Puro载体构建RASSF5过表达慢病毒(LV RASSF5)和对照慢病毒(LV vector)。通过划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验分析RASSF5过表达对HNSCC细胞Cal27和HN30迁移和侵袭能力的影响;通过Western blotting分析RASSF5过表达对上皮型钙黏蛋白(epithelial cadherin,E-cadherin)、Snail蛋白、糖原合酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK-3β)和磷酸化GSK-3β(phosphorylated GSK-3β,p-GSK-3β)的作用。构建BALB/c裸鼠肺转移模型,分别经尾静脉注射转染LV RASSF5(RASSF5过表达组)或LV vector(对照组)的Cal27细胞,每组5只小鼠;通过观察裸鼠肺部转移瘤结节数量分析过表达RASSF5对Cal27细胞转移能力的影响。结果·RASSF5基因在HNSCC中的表达水平低于正常组织(P=0.001),低表达RASSF5的患者总体生存期(P=0.005)和无病生存期(P=0.004)较差。划痕实验显示转染LV RASSF5后,Cal27细胞和HN30细胞在观察终点的划痕面积高于相应的对照组细胞(P=0.003,P=0.015)。Transwell迁移实验显示转染LV RASSF5后,Cal27细胞和HN30细胞穿出小室膜的数量低于相应对照组细胞(P=0.005,P=0.001)。Transwell侵袭实验同样显示转染LV RASSF5的Cal27细胞和HN30细胞穿出预铺基质胶小室膜细胞数量低于对照组(P=0.001,P=0.001)。Western blotting结果显示过表达RASSF5的Cal27和HN30细胞中,E-cadherin表达水平提高,而p-GSK-3β/GSK-3β比值以及Snail蛋白质水平降低。在裸鼠肺转移模型中,RASSF5过表达组的肺部瘤结节数量少于对照组(P=0.049)。结论·RASSF5过表达抑制HNSCC细胞的侵袭和迁移能力,而通过GSK-3β/Snail信号通路抑制上皮间质转化可能在其中起到关键作用。