INHBA-AS1通过c-Myc/SCD通路调控宫颈癌HeLa细胞的鸟氨酸代谢和EMT进程

目的:探讨抑制素β亚基A反义RNA1(INHBA-AS1)对宫颈癌HeLa细胞EMT和鸟氨酸代谢途径的影响及其机制。方法:体外常规培养HeLa细胞,实验分为10组:对照组、阴性对照(NC)组、sh-INHBA-AS1组、PluriSIn 1[硬脂酰辅酶A去饱和酶(stearyl CoA desaturase,SCD)抑制剂]组、NC+PluriSIn 1组、sh-INHBA-AS1+PluriSIn 1组、10058-F4(c-Myc抑制剂)组、NC+10058-F4组、sh-INHBA-AS1+10058-F4组、sh-INHBA-AS1+OE-c-Myc组。平板克隆实验检测各组细胞的增殖能力,FCM检测各组细胞的凋亡情况,Transwell小室实验检测各组细胞的侵袭、迁移能力,qPCR法检测各组细胞中INHBA-AS1、c-Myc、SCD和EMT相关基因(N-cadherin、TGF-β、ZEB1)mRNA的表达,WB法检测各组细胞中c-Myc、SCD、EMT相关(N-cadherin、TGF-β、ZEB1)、S-腺苷-甲硫氨酸脱羧酶(SAMDC)和亚精胺/精胺N1-乙酰转移酶(SSAT)蛋白的表达,ELISA检测各组细胞上清液中鸟氨酸脱羧酶(ODC)的含量。结果:敲减INHBA-AS1表达使HeLa细胞的增殖、侵袭和迁移能力显著降低(均P<0.05)而细胞凋亡率显著升高(P<0.05),q PCR、WB法检测结果显示,敲减INHBA-AS1均可显著抑制HeLa细胞中c-Myc、SCD、N-cadherin、TGF-β、ZEB1和SAMDC的表达(均P<0.05),而促进SSAT的表达(P<0.05),并降低HeLa细胞上清液中ODC的含量(P<0.05)。与c-Myc抑制剂和SCD抑制剂单独处理相比,其联合敲减INHBA-AS1后上述作用更加显著(均P<0.05);与sh-INHBA-AS1组相比,进一步过表达c-Myc后HeLa细胞的增殖能力显著升高(P<0.05)、SCD和N-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05)、细胞上清液中ODC含量显著升高(P<0.05)。结论:INHBA-AS1可通过c-Myc调控SCD的表达,从而影响HeLa细胞鸟氨酸代谢和EMT进程,进而促进HeLa细胞的增殖、侵袭和迁移能力。

虾青素通过调节Klotho表达和Wnt/β-Catenin信号通路对多囊卵巢综合征大鼠的改善作用

目的研究虾青素调节Klotho表达和Wnt/β-Catenin信号通路对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠的改善作用及机制。方法采用来曲唑溶液灌胃的方法构建30只PCOS模型大鼠,随机分为6组:模型组、虾青素低剂量组(50 mg/kg)、虾青素中剂量组(100 mg/kg)、虾青素高剂量组(200 mg/kg)、虾青素高剂量+空载组、虾青素高剂量+Klotho敲低组,每组5只;另取5只SD大鼠作为对照组。分组处理后测定各组大鼠体质量与卵巢质量。取SD大鼠以同样方法造模并随机分为:模型组、虾青素组(200 mg/kg)、虾青素+Klotho敲低组、虾青素+氯化锂组、虾青素+PD98059(MEK抑制剂)组,每组9只,另取9只SD大鼠作为对照组。分组处理后,测定各组大鼠体质量、卵巢质量与体积、卵巢组织囊状卵泡数量,血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、睾酮(T)水平及炎性因子前列腺素E2(PGE2)、白细胞介素(IL)-17、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-18水平,卵巢组织Klotho蛋白表达和Wnt/β-Catenin、MEK/ERK信号相关蛋白表达。结果与对照组比较,模型组体质量与卵巢质量明显升高(P<0.05);与模型组比较,虾青素低剂量组、虾青素中剂量组、虾青素高剂量组的体质量与卵巢质量均降低,并呈剂量依赖性(P<0.05);与虾青素高剂量组比较,虾青素高剂量+Klotho敲低组体质量与卵巢质量升高(P<0.05),虾青素高剂量+空载组各指标无明显变化。与对照组比较,模型组血清FSH水平和卵巢组织Klotho、p-MEK、p-ERK1/2蛋白表达降低(P<0.05),体质量、卵巢质量与体积、囊状卵泡数量、血清LH、T、PGE2、IL-17、TNF-α及IL-18水平、卵巢组织Wnt1与β-Catenin蛋白表达明显升高(P<0.05);与模型组比较,虾青素组血清FSH水平和卵巢组织Klotho、p-MEK、p-ERK1/2蛋白表达升高(P<0.05),体质量、卵巢质量与体积、囊状卵泡数量、血清LH、T、PGE2、IL-17、TNF-α及IL-18水平、卵巢组织Wnt1与β-Catenin蛋白表达降低(P<0.05);敲低Klotho、氯化锂、PD98059均可减弱虾青素对PCOS大鼠的改善作用。结论虾青素可通过上调Klotho而下调Wnt/β-Catenin信号及激活MEK/ERK信号,从而阻止炎症反应,改善PCOS大鼠激素水平,减少囊状卵泡数目,最终减轻其多囊卵巢症状。

干扰INHBA-AS1通过抑制糖酵解途径促进宫颈癌细胞凋亡的作用及机制

目的观察干扰INHBA-AS1通过糖酵解对宫颈癌细胞Hela增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法将宫颈癌细胞Hela细胞分为空白对照组、阴性对照组、干扰INHBA-AS1组、Prosapogenin A(10μM,处理48 h)组、阴性对照+Prosapogenin A组(10μM,处理48 h后转染)和干扰INHBA-AS1+Prosapogenin A(10μM,处理48 h后转染)组。CCK8检测细胞增殖,TUNEL检测细胞凋亡,测试盒检测葡萄糖、乳酸和ATP含量,qRT-PCR检测细胞INHBA-AS1、HK2、PDK1、GLUT1、LDHA的mRNA表达,Western blot法检测HK2、PDK1、GLUT1、LDHA的蛋白表达情况。结果与对照组相比,干扰INHBA-AS1或Prosapogenin A组细胞的增殖被抑制(P<0.05),凋亡被促进,葡萄糖含量显著上升(P<0.05),乳酸、ATP含量显著下降(P<0.05),HK2、PDK1、GLUT1、LDHA的mRNA和蛋白表达均显著下降(P<0.05);而同时使用干扰INHBA-AS1和Prosapogenin A处理细胞会加重上述现象(P<0.05)。结论干扰INHBA-AS1通过抑制糖酵解使宫颈癌细胞Hela的增殖被抑制,凋亡被促进,其机制可能与PDK1相关。

孕早期体重指数及孕期增加体重对母儿不良妊娠结局的影响

目的探讨孕早期体重指数(BMI)及孕期增加体重(GWG)对母儿不良妊娠结局的影响。方法对2018年3月至8月在新疆医科大学第一附属医院规律产检并分娩的适龄初产妇890例临床资料进行回顾性分析。将病例根据2009年美国医学研究院(IOM)修订的孕早期BMI及GWG指南作为标准,按孕早期BMI及GWG分组。分为低标准体重组(BMI<18.5)、标准体重组(18.5≤BMI<25)、超重组(25≤BMI<30)、肥胖组(BMI≥30);GWG过低组,GWG正常组,GWG过高组(无论孕早期BMI分组情况,GWG低于IOM推荐范围则纳入GWG过低组;处于推荐范围,纳入GWG正常组;高于推荐范围纳入GWG过高组),分析孕早期BMI、GWG与剖宫产率、妊娠期合并症及新生儿不良结局的影响。结果低标准体重组(15.1%)、标准体重组(73.0%)、超重组(9.9%)、肥胖组(2.0%)分别有134例、650例、88例、18例。孕早期BMI超重、肥胖是剖宫产(OR 2.46、5.20)、妊娠期糖尿病(OR 1.86、1.33)、妊娠期高血压疾病(OR4.07、4.53)、巨大儿(OR 5.72、2.87)、早产(OR 2.15、9.19)的危险因素。不论孕早期BMI情况,GWG超过IOM推荐增重范围,是剖宫产(OR=2.93)、妊娠期糖尿病(OR=1.10)、妊娠期高血压疾病(OR=1.50)、巨大儿(OR=1.15)的危险因素,高龄(>35~40岁)亦是剖宫产(OR=6.42)、妊娠期糖尿病(OR=4.89)、妊娠期高血压疾病(OR=3.98)、胎膜早破(OR=2.48)的危险因素。结论孕早期体重指数超重或肥胖,GWG过高以及高龄均增加剖宫产率,导致母儿不良结局。故孕早期备孕控制体重以及孕期合理增重尤为重要。