加强重点学科点建设 促进高层次人才培养

众所周知,重点学科点是培养研究生的重要基地,抓好学科点的建设,对立足国内培养高层次专门人才,适应国家经济建设的需要,将会起到重要作用。 1989年底,我所药物化学专业被国家教委评为高校医学重点学科点。 3年多来,该专业招收研究生的数量(共56人,其中博士生24人,硕士生32人)为近15年来招生总人数的39％。

某些氨基酸及小分子肽对大鼠卵泡颗粒细胞雌激素与孕激素分泌的影响

用离体大鼠卵泡颗粒细胞培养和放射免疫分析法,观察酪氨酸(Tyr)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)和八种新合成的小分子肽(Gly-Tyr-NH_2,Lys-Tyr-NH_2,Gly-Gly,Gly-Tyr,Gly-Tyr-Lys,Gly-Ser-Lys,Thr-Ser-Lys,Thr-Ser-Tyr)对雌激素和孕激素分泌的影响。结果表明,Tyr和Thr对颗粒细胞基础雌二醇分泌有很强的刺激作用;Tyr、Ser、Thr对颗粒细胞hCG引起的雌二醇分泌没有影响。上述八种合成小分子肽对hCG引起的雌二醇分泌均有增强作用,其中二肽Gly-Tyr和三肽Gly-Ser-Lys对基础雌二醇分泌有促进作用。小分子肽对颗粒细胞孕酮分泌的影响比较复杂,Gly-Tyr-NH_2和Thr-Ser-Tyr抑制基础孕酮分泌;Gly-Tyr-NH_2、Gly-Ser-Lys和Gly-Tyr增强hCG致孕酮分泌,其余几种小分子肽对孕酮分泌没有影响。

人卵促性腺激素释放肽（hF－GRP）及其类似物合成和生物活性初探

用固相法合成了ｈＦ－ＧＲＰ及其１５个类似物。全部裂解均用三氟甲磺酸完成。产物总收率６０％～８０％。对所有合成肽进行了影响离体的小鼠垂体分泌ＬＨ的活性筛选。结果表明，当合成肽的浓度为０．０５ｍｍｏｌ／Ｌ时：（１）将ｈＦ－ＧＲＰ的Ｃ端ＣＯＯＨ变成ＣＯＮＨ２，活性变化不大；（２）Ｃ端残基Ａｓｎ１４被Ｐｈｅ替换后刺激垂体分泌ＬＨ的活性明显高于ｈＦ－ＧＲＰ；（３）Ｔｈｒ３被Ｔｙｒ替换后片段ｈＦ－ＧＲＰ（３～１３）有抑制ＬＨ分泌的活性；（４）其余类似物与空白对照相似。

人体抑制素α亚基片段的合成及活性研究

用固相多肽合成法的Ｆｍｏｃ化学合成了４个人抑制素α亚基片段，经三氟醋酸裂解、高效液相纯化，产物总收率２０％～６３％。考察人工合成的四种抑制素α亚基肽片段对大鼠离体培养黄体细胞孕酮分泌的影响，结果表明４种抑制素α亚基肽片段均显著抑制大鼠黄体细胞的基础孕酮分泌。

人抑制素βA亚基片段的合成及抑制素α亚基、βA亚基单克隆抗体的制备

目的 合成人抑制素α亚基 1个片段和 βA亚基两个片段 βA(1 2 8) (GLECDGKVNICCKKQFFVSFK DIGW NDW ) ,βA(82 114) (VPTKLRPMSMLYYDDGQNIIKKDIQNMIVEECG)并制备了相应的单克隆抗体。 方法应用固相多肽合成法人工合成了 1个抑制素α亚基片段和 2个 βA亚基片段 ,以化学合成的片段作为半抗原 ,经抗原和单抗的制备获得 7株杂交瘤细胞株。测定了单抗的滴度、特异性和相对亲和力。结果 单抗的鉴定及特异性分析实验表明这些单克隆抗体具有特异性、敏感性和实用性。

作为乙肝疫苗的新型结构肽的设计与合成

在乙肝病毒表面抗原结构研究的基础上，自行设计了三个新型结构的肽疫苗，采用Ｂｏｃ化学和Ｆｍｏｃ化学相匹配的策略，应用固相肽逐步合成法合成，产物经氨基酸分析鉴定。

12种小分子肽对大鼠离体黄体细胞孕酮生成的影响

用放射免疫分析法测定大鼠离体黄体细胞孕酮含量,观察了人工合成的12种小分子肽对大鼠黄体细胞的影响。结果表明,Gly-Tyr-NH_2和Gly-Ser-Lys 有抑制黄体细胞基础孕酮分泌作用,还抑制hCG 诱导的孕酮分泌;Lys-Tyr-NH_2,Thr-Ser-Lys,Gly-Tyr-Lys 抑制hCG 诱导的孕酮分泌;(Gly-Tyr)_2=Lys 则增强基础及hCG 诱导的孕酮分泌;其余6种小分子肽(Gly-Gly,Gly-D—Tyr,Tyr-D—Tyr,Thr-Ser-Tyr,Thr-Asn-Tyr-Thr-NH_2,Tyr-Tyr-His-Lys-Ser),对大鼠黄体细胞孕酮分泌没有影响。同时讨论了其构效关系及可能的作用机制。

三氟甲磺酸在肽-树脂裂解中的应用

研究并总结了三氟甲磺酸(TFMSA)~*对8种肽-树脂化合物的裂解效率。以 TFMSA/TFA/DMS/对甲酚、TFMSA/TFA/对甲酚为“低”、“高”及“低-高”等条件的切肽试剂,用茚三酮定量分析的方法考察了 C-端残基、肽链长度、树脂连接结构、反应温度及反应时间等诸多因素对裂解反应完全度的影响。证明 TFMSA 在许多情况下可以代替 HF 的切肽试剂。

抗生育寡肽类似物的多重合成

本文应用同步多重合成新技术分别在氯甲基树脂及MBHA树脂上成功地合成了二批抗生育寡肽类似物(1～6)。经HPLC分离、冷冻干燥及氨基酸组成分析表明各产物的收率及纯度是合理的。实验证明采用同时缩合、同时裂解及同时分离纯化因而同时获得多种产物的多重合成法,既省时省力,又可节约许多昂贵的试剂。

酪氨酸相关肽的合成及抗孕酮生成活性

利用固相法合成了二十个含羟基氨基酸的小肽。其中，以０．５ｍｏｌ·Ｌ－１二甲二氯硅烷／１．５ｍｏｌ·Ｌ－１苯酚／ＤＣＭ＊为脱除Ｂｏｃ试剂，以ＴＦＭＳＡ为切除树脂试剂。经Ｃ－１８反相柱纯化后，全部产物均通过氨基酸分析要求。体外黄体细胞分泌孕酮实验表明有八个肽化物ＧｌｙＴｙｒＡｌａＬｙｓ，（ＳａｒＳｅｒ）２Ｌｙｓ及其申酯，ＴｙｒＬｙｓ，ＨｉｓＴｙｒ－ＮＨ２，ＴｈｒＰｒｏＴｙｒＬｙｓ－ＮＨ２，ＴｙｒＴｈｒＰｒｏＡｒｇＬｙｓ，ＡｓｐＨｉｓＰｒｏＴｈｒ－ＰｈｅＬｙｓ显示较强的抑制ｈＣＧ致孕酮分泌的活性，而且前三个肽还能显著抑制基础孕酮的分泌，相反，ＧｌｙＳｅｒＴｙｒ能刺激基础孕酮的分泌。目前尚未建立合理的结构一活性关系。

抑制素α、βA、βB亚基单克隆抗体制备及其初步应用

目的 :制备INHα、βA、βB亚基的McAbs ,并进行肿瘤免疫组化研究。 方法 :抗原为猪卵泡液INH提取物及人工合成的INHα、βΑ、βB亚基肽段 (6个 )。以上述抗原免疫BALB/c小鼠 ,经细胞融合、筛选、克隆化 ,获得杂交瘤细胞 14株 ,对其免疫学特性进行了分析。用纯化的McAbs进行了肿瘤免疫组化研究 (2 85例次 )。结果 :获得分别分泌抗INHα、βA、βΒ亚基的McAbs细胞株 14个 ,效价 1× 10 -4 - 1× 10 -6。免疫组化除生殖系统肿瘤阳性外 ,还发现乳腺癌的阳性率超过 70 %。结论 :成功制备了分泌抗INHα、βΑ、βB亚基肽的McAbs 。

含羟基氨基酸小肽的合成及其抗孕酮生成活性

用固相、逐步接肽法合成了十一个含羟基氨基酸小肽。在肽树脂裂解反应中比较了HF及TFMSA(三氟甲磺酸)两种方法,裂解收率基本相同。全部产物经C-18反相柱纯化后,氨基酸组成数值均符合预期结构要求。对孕酮分泌影响的活性筛选表明Gly-Tyr-NH_2,Gly-Tyr-Lys-OH及Gly-Ser-Lys-OH有明显的抑制hCG诱发孕酮分泌的活性(P<0.01)。

人抑制素βB亚基片段的合成及其单克隆抗体的制备

目的 合成人抑制素 βB亚基两个片段 βB(1 2 8) (GLECDGRTNLC CRQQFFIDFRLIGWNDW ) ,βB(85 115 ) (LSTMSMLYFDDEYNIVKRDVPNMIVEECGCA)并制备其单克隆抗体。方法 应用固相多肽合成法人工合成了 2个 βB亚基片段 ,以化学合成的片段作为半抗原 ,经抗原的制备、单抗的制备获得 4株杂交瘤细胞株。单抗的鉴定及特异性分析实验表明这些单克隆抗体具有特异性 ,敏感性和实用性。对抑制素α,βA ,βB亚基的单抗进行了进一步的纯化。用纯化后的单抗进行了乳腺癌的免疫组化研究。结果 相关肿瘤组织对各亚基单抗的免疫组化反应无明显差异 ;乳腺癌对各亚基单抗的免疫组化反应阳性率无明显差异。

促性腺激素释放多肽（GRP）对体外培养小鼠垂体分泌LH的影响

合成的促性腺激素释放多肽（ＧＲＰ）及其类似物ＧＲｐ～ＮＨ２，［Ｇｌｕ７．９．１４Ｌｙｓ６．１０］ＧＲＰ（６～１４），［ｐｈｅ１４］ＧＲＰ（５～１４）和［ｐｈｅ１４］ＧＲＰ浓度在０．０５ｍｍｏｌ·Ｌ－１时，具有刺激体外培养的小鼠垂体分泌ＬＨ的作用。其活性依此相当对照垂体的１１５．４，１１４．２，１４０，１６０和１７９％。小鼠于妊振第７～９天或第１～５天，每只ｓｃ［ｐｈｅ１４］ＧＲＰ１ｍｇ·ｄ－１，或于妊娠第２～４天每只ｓｃ［ｐｈｅ１４］ＧＲＰ（５～１４）１ｍｇ·ｄ－１，有４０～６０％的妊娠动物出现死胎。

磷酸化寡肽(P-GT)对离体培养大鼠黄体细胞孕酮分泌的影响

本文观察了人工合成的磷酸化寡肽甘氨酸酪氨酸胺（合成代号P-GT）对黄体细胞孕酮分泌的影响，并对其机制进行了初步探讨，结果显示：该寡肽对黄体细胞孕酮基础分泌和人绒毛膜促性腺激素（hCG）诱导下的黄体细胞孕酮分泌都具有显著促进作用，且与腺苷酸环化酶激动剂Forskolin有协同作用，提示其可能是通过腺着酸环化酶——蛋白激酶A（AC－PKA）信息系统发挥作用，Ca2+对该寡肽促孕酮作用可能没有影响。

甘氨酰-酪氨酰胺和甘氨酰-丝氨酰-赖氨酸抑制黄体细胞孕酮生成机制的研究

在筛选12种人工合成小分子肽影响大鼠离体黄体细胞孕酮生成的活性研究中,我们曾发现二肽甘氨酰—酪氨酰胺(Gly-Tyr-NH_2)和三肽甘氨酰—丝氨酰—赖氨酸(GlySer-Lys)有很强的抑制孕酮生成的作用。本文研究了这两种小肽的可能作用途径。实验观察到:蛋白质合成抑制剂放线菌酮(Cyx)和放线菌素D(ActD)对两种小肽拮抗孕酮分泌的作用没有影响;此两种小肽对孕酮合成的关键酶3 β-HSD活性也没有影响;但这两种小肽对腺苷酸环化酶激动剂Forskolin引起的孕酮分泌有抑制作用。提示这两种小肽可能抑制腺苷酸环化酶活性或影响cAMP以后的过程。

新型脱除Boc试剂——二氯二甲基硅烷

通过考察苯酚浓度对DDSi^(2)脱除Boc的影响,比较与CTMSi脱除Boc的效率差别;DDSi对侧链保护基及对肽—树脂连接结构完整性的影响等实验证明,DDSi可以作为肽合成中脱除Boc的试剂。最后,利用DDSi脱除Na-Boc的方法,成功地制备了四肽Pro—Thr—Phe—Tyr。

α抑制素片段、酪氨酸、催产素、前列腺素F_(2α)和雌激素对大鼠黄体凋亡的影响

近期研究提示,黄体萎缩(溶解)与细胞凋亡有关.但是影响细胞凋亡的因素还不清楚.我们以往的工作表明,抑制素α亚单位-N末端片段[Tyr]-1-32(P^(33))显著抑制大鼠黄体细胞孕酮分泌.本研究应用PMSG-hCG诱导大鼠的假孕模型进一步观察P^(33)以及其他因素对黄体细胞凋亡的作用.未成年大鼠注射65IU PMSG,48h后注射hCG50IU.于hCG注射第5天用P^(33)(40μg/只),P^(29)(37～65氨基酸)(50μg/只),催产素(oxytocin.OT)(40μg/只).Tyr(1.5mg/只)和E_2(1.5mg/只)每日一次:PGF_(2α)(12.5μPg/只)隔日注射.共注3次.于hCG注射第12天断头取血、卵巢.P^(33),P^(29).OT,PG_(2α)和Tyr处理组大鼠血浆雌激素、孕酮水平下降.E_2处理组则血浆雌激素、孕酮水平上升.提取DNA、定量、电泳分析显示.细胞核孵育后则可见清晰梯形条带.P^(33).P^(29).OT、PGF_(2α)和Tyr组直接提取或细胞核孵育后提取的低分子量DNA均增加.相反雌激素抑制低分子量DNA的产生.结果揭示、P^(29),P^(33)、OT.PGF_(2α).Tyr和雌激素在调节共黄体萎缩中起重要作用.P^(29),P^(33),OT.PGF_(2α).Tyr诱导大鼠黄体细胞介导凋亡的核酸内切酶的表达,促进黄体细胞凋亡;雌激素抑制黄体细胞凋亡.本结果对进一步探讨黄体细胞凋亡机制奠定了基础.

抑制素α亚基片段P^(33)对大鼠离体培养黄体细胞凋亡的影响

我室先前的工作表明，抑制素α亚基片段Ｐ３３显著抑制离体培养大鼠黄体细胞的孕酮分泌，整体实验显示Ｐ３３促进黄体功能萎缩和细胞凋亡。本实验进一步在细胞水平探讨Ｐ３３促进黄体细胞凋亡的作用机制。应用ＤＮＡ电泳检测技术、ＤＮＡ荧光（ＡＯＥＢＰＩ）染色和流式细胞分析方法观察了Ｐ３３对ＰＭＳＧｈＣＧ假孕大鼠胶原酶ＤＮＡ酶分散的黄体细胞的自发凋亡的影响。结果三种方法一致显示，Ｐ３３（１μｇ／ｍｌ）促进黄体细胞的自发凋亡。阻断酪氨酸蛋白激酶活性（ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ５０μｇ）则抑制Ｐ３３诱导的黄体凋亡；而阻断ＲＮＡ和蛋白质合成（Ｃｙｘ，５０μｇ／ｍｌ；ＡｃｔＤ，５０μｇ／ｍｌ）均不抑制Ｐ３３促进的黄体细胞凋亡。结果表明，Ｐ３３促进培养大鼠黄体细胞的自发凋亡，其作用机制可能与ＴＰＫ途径有关。本实验为抑制素α亚单位或其相关衍生物可能是卵巢局部调节因子之一的假说提供了又一证据。

2－（2－甲氧苯氧）乙胺的合成

２－（２－甲氧苯氧）乙胺是合成某些β－受体阻断剂的重要中间体。我们探讨了几种不同的制备途径，发现将愈创木酚与１，２－二氯乙烷（或１，２－二溴乙烷）反应的单取代卤代物转化为叠氮化物，通过催化氢化，可以获得产率高，纯度好的伯胺。目标物也可以通过Ｇａｂｒｉｅｌ反应或通过相应睛的还原制得，但是叠氮化合物途径是一条经济而安全的路线。